Werte des wässrigen vaskulären endothelialen Wachstumsfaktors (VEGF) bei Typ-3-Neovaskularisation

Hierbei handelte es sich um eine prospektive, interventionelle Fall-Kontroll-Pilotstudie zur Untersuchung der wässrigen VEGF-Spiegel in Augen mit AMD-bedingter NV, die mit intravitrealem Bevacizumab behandelt wurden.

Die Klassifizierung der Neovaskularisation basierte auf ihrer anatomischen Lokalisierung, die durch multimodale Bildgebung unter Verwendung von FA (Fluoreszenzangiographie), ICGA (Indocyaningrün-Angiographie) und OCT (optische Kohärenztomographie) ermittelt wurde, wie kürzlich von Freund et al. vorgeschlagen.

Diagnostische Verfahren und Nachsorge Zu Studienbeginn wurden alle Patienten einer BCVA-Messung unter Verwendung eines ETDRS-Diagramms (Early Treatment Diabetic Retinopathie Study) bei 4 Metern, Fundusbiomikroskopie, FA, ICGA und SD-OCT unterzogen. Alle Untersuchungen wurden im Rahmen der Nachsorgetermine wiederholt, mit Ausnahme der angiographischen Untersuchungen.

Angiographische Tests und OCT-Scans wurden mit Spectralis sd-OCT (Spectralis SD-OCT, Heidelberg Engineering, Heidelberg, Deutschland) aufgezeichnet.

CMT wurde berechnet, nachdem eine Sequenz von 145 horizontalen Abschnitten erfasst wurde, die im hochauflösenden Modus (1024 A-Scans/30 Grad) aufgezeichnet wurden und einen Bereich von 20 Grad (horizontal) × 15 Grad (vertikal) mit einem Abstand von ~30 µm abdeckten zwischen einzelnen Abschnitten. Bei Nachuntersuchungen ermöglichte die Bildverarbeitungssoftware eine erneute Auswertung an genau derselben Stelle.

Anschließend wurden die Bilder mit dem Analyseprogramm „Thickness Map“ verarbeitet. Feld 1 des Kartenanalyseprotokolls (zentral 1 mm) wurde für die Berechnung der zentralen Netzhautdicke verwendet.

Wässrige Probenahme und Bevacizumab-Injektionen Alle Patienten mit AMD-bedingter Neovaskularisation erhielten zu Studienbeginn, Monat 1 und Monat 2 drei intravitreale Injektionen von 1,25 mg/0,05 ml Bevacizumab (Avastin; Genentech Inc, South San Francisco, Kalifornien, USA).

Vor der Injektion wurde eine örtliche Anästhesie durch Tetracain-Augentropfen (1 %) eingeleitet. Povidon-Jod wurde auf die Lidränder, die Wimpern, die Bindehaut und die Augenhöhlen aufgetragen. Nach Anlegen eines sterilen Tuches wurde ein Deckelspekulum eingesetzt.

Unmittelbar vor jeder intravitrealen Injektion wurde eine wässrige Probenahme durchgeführt, indem 0,05–0,1 ml wässrige Flüssigkeit mit einer 30-Gauge-Nadel abgesaugt wurden, die mit einer Tuberkulinspritze am temporalen Limbus verbunden war. Alle Proben wurden im Operationssaal unter der Kontrolle eines Operationsmikroskops gesammelt.

Anschließend wurde eine intravitreale Bevacizumab (IVB)-Injektion mit einer 30-Gauge-Nadel im inferotemporalen Quadranten 3,5 mm bis 4 mm hinter dem Limbus durchgeführt.

Die unverdünnten wässrigen Proben wurden in sterile Behälter überführt und sofort bis zur Analyse in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert.

Kontrollgruppen-Referenzproben wurden von 14 altersentsprechenden Patienten entnommen, die sich einer Kataraktoperation unterzogen.

Kammerwasserproben wurden auf die gleiche Weise wie oben beschrieben für Augen mit feuchter AMD gewonnen. Die unverdünnten wässrigen Proben wurden in sterile Behälter überführt und sofort bis zur Analyse in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert.

Assay des vaskulären endothelialen Wachstumsfaktors Die gesammelten Proben wurden vor Beginn des Assays schrittweise auf Raumtemperatur gebracht und 1:1 mit dem vom Hersteller bereitgestellten Probenverdünnungsmittel verdünnt.

Der VEGF-Gehalt wurde an 50 µl verdünnter Probe mit einem humanen VEGF-ELISA-Kit (EHVEGF, Pierce Biotechnology, Rockford, Illinois, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers und unter Verwendung einer erweiterten Standardkurve einschließlich 16, 8 und 4 pg/ml bestimmt Standardpunkt. Alle Tests wurden in zweifacher Ausfertigung durchgeführt. Die minimal nachweisbare Konzentration von VEGF betrug 3,5 pg/ml. Werte unter 3,5 pg/ml wurden für die statistische Analyse als gleich 1 angesehen.