Livelli del fattore di crescita endoteliale vascolare acquoso (VEGF) nella neovascolarizzazione di tipo 3

Si trattava di uno studio pilota, prospettico, interventistico, caso-controllo che indagava i livelli acquosi di VEGF negli occhi con NV correlata all'AMD trattati con bevacizumab intravitreale.

La classificazione della neovascolarizzazione era basata sulla sua localizzazione anatomica accertata mediante imaging multimodale che utilizza FA (angiografia con fluoresceina), ICGA (angiografia con verde indocianina) e OCT (tomografia a coerenza ottica) come recentemente proposto da Freund et al.

Procedure diagnostiche e follow-up Al basale tutti i pazienti sono stati sottoposti a misurazione della BCVA utilizzando il grafico ETDRS (early treatment diabetic retinopathy study) a 4 metri, biomicroscopia del fondo oculare, FA, ICGA e sd-OCT. Tutti gli esami sono stati ripetuti in occasione delle visite di controllo ad eccezione degli esami angiografici.

I test angiografici e le scansioni OCT sono stati registrati utilizzando Spectralis sd-OCT (Spectralis SD-OCT, Heidelberg Engineering, Heidelberg, Germania).

La CMT è stata calcolata dopo aver acquisito una sequenza di 145 sezioni orizzontali registrate in modalità ad alta risoluzione (1024 A-scan/30 gradi) e aver coperto un'area di 20 gradi (orizzontale) × 15 gradi (verticale) con una distanza di ~30 µm tra le singole sezioni. Negli esami di follow-up, il software di elaborazione delle immagini ha consentito la rivalutazione esattamente nella stessa posizione.

Le immagini sono state poi elaborate dal programma di analisi "Thickness Map". Il campo 1 del protocollo di analisi della mappa (centrale 1 mm) è stato utilizzato per i calcoli dello spessore retinico centrale.

Campionamento acquoso e iniezioni di bevacizumab Tutti i pazienti con neovascolarizzazione correlata all'AMD hanno ricevuto tre iniezioni intravitreali di 1,25 mg/0,05 ml di bevacizumab (Avastin; Genentech Inc, South San Francisco, California, USA) al basale, mese 1 e mese 2.

Prima dell'iniezione, l'anestesia topica è stata indotta da colliri di tetracaina (1%). Lo iodio-povidone è stato applicato ai margini palpebrali, alle ciglia, ai bulbi della congiuntiva e ai fornici. Dopo l'applicazione di un telo sterile, è stato inserito uno speculum sul coperchio.

Immediatamente prima di ogni iniezione intravitreale, è stato eseguito un campionamento acquoso aspirando 0,05-0,1 ml di soluzione acquosa utilizzando un ago calibro 30 collegato a una siringa per tubercolina al limbus temporale. Tutti i campioni sono stati raccolti in sala operatoria sotto il controllo del microscopio operatorio.

L'iniezione intravitreale di bevacizumab (IVB) è stata quindi eseguita utilizzando un ago di calibro 30 nel quadrante inferotemporale da 3,5 mm a 4 mm posteriormente al limbus.

I campioni acquosi non diluiti sono stati trasferiti in contenitori sterili e immediatamente conservati in un congelatore a -80°C fino all'analisi.

Gruppo di controllo I campioni di riferimento sono stati ottenuti da 14 pazienti della stessa età sottoposti a chirurgia della cataratta.

I campioni di umore acqueo sono stati ottenuti nello stesso modo descritto sopra per gli occhi con AMD umida. I campioni acquosi non diluiti sono stati trasferiti in contenitori sterili e immediatamente conservati in un congelatore a -80°C fino all'analisi.

Analisi del fattore di crescita endoteliale vascolare I campioni raccolti sono stati gradualmente portati a temperatura ambiente prima di iniziare l'analisi e diluiti 1:1 con il diluente per campioni fornito dal produttore.

Il contenuto di VEGF è stato determinato su 50 µl di campione diluito con un kit VEGF ELISA umano (EHVEGF, Pierce Biotechnology, Rockford, Illinois, USA) secondo le istruzioni del produttore e utilizzando una curva standard estesa comprendente 16, 8 e 4 pg/ml punto standard. Tutti i saggi sono stati eseguiti in duplicato. La concentrazione minima rilevabile di VEGF era di 3,5 pg/ml. Valori inferiori a 3,5 pg/ml sono stati considerati pari a 1 per l'analisi statistica.