Vandig vaskulær endotelvækstfaktor (VEGF) niveauer i type 3 neovaskularisering

Dette var en pilot, prospektiv, interventionel case-kontrol undersøgelse, der undersøgte vandige niveauer af VEGF i øjne med AMD-relateret NV behandlet med intravitreal bevacizumab.

Klassificering af neovaskularisering var baseret på dens anatomiske lokalisering som fastslået ved multimodal billeddannelse ved anvendelse af FA (fluorescein angiografi), ICGA (indocyanin grøn angiografi) og OCT (optisk kohærens tomografi) som for nylig foreslået af Freund et al.

Diagnostiske procedurer og opfølgning Ved baseline gennemgik alle patienterne BCVA-måling ved hjælp af tidlig behandlingsdiabetisk retinopatistudie (ETDRS) diagram ved 4 meter, fundusbiomikroskopi, FA, ICGA og sd-OCT. Alle undersøgelser blev gentaget i anledning af opfølgende aftaler med undtagelse af angiografiske tests.

Angiografiske tests og OCT-scanninger blev optaget ved hjælp af Spectralis sd-OCT (Spectralis SD-OCT, Heidelberg Engineering, Heidelberg, Tyskland).

CMT blev beregnet efter opnåelse af en sekvens på 145 vandrette sektioner optaget i højopløsningstilstand (1024 A-scanninger/30 grader) og dækkende et område på 20 grader (vandret) × 15 grader (lodret) med en afstand på ~30 µm mellem de enkelte afsnit. Ved opfølgende undersøgelser tillod billedbehandlingssoftwaren revurdering på nøjagtig samme sted.

Billederne blev derefter behandlet af analyseprogrammet "Thickness Map". Felt 1 i kortanalyseprotokollen (central 1 mm) blev brugt til central retinale tykkelsesberegninger.

Vandig prøveudtagning og Bevacizumab-injektioner Alle patienter med AMD-relateret neovaskularisering modtog tre intravitreale injektioner af 1,25 mg/0,05 ml bevacizumab (Avastin; Genentech Inc, South San Francisco, Californien, USA) ved baseline, måned 1 og måned 2.

Før injektion blev topisk anæstesi induceret af tetracain (1%) øjendråber. Povidon-jod blev påført øjenlågskanterne, vipperne, conjunctiva bulbi og fornices. Efter påføring af et sterilt afdækning blev et lågspekulum indsat.

Umiddelbart før hver intravitreal injektion blev der udført vandig prøvetagning ved at aspirere 0,05-0,1 ml vandig ved anvendelse af en 30-gauge nål forbundet til en tuberkulinsprøjte ved den temporale limbus. Alle prøverne blev opsamlet i operationsstuen under operationsmikroskopkontrol.

Intravitreal bevacizumab (IVB)-injektion blev derefter udført med en 30-gauge nål i den inferotemporale kvadrant ved 3,5 mm til 4 mm posteriort for limbus.

De ufortyndede vandige prøver blev overført til sterile beholdere og straks opbevaret i en -80°C fryser indtil analyse.

Kontrolgruppe Referenceprøver blev opnået fra 14 aldersmatchede patienter, der undergik kataraktoperation.

Humorvandsprøver blev opnået på samme måde som beskrevet ovenfor for øjne med våd-AMD. De ufortyndede vandige prøver blev overført til sterile beholdere og straks opbevaret i en -80°C fryser indtil analyse.

Vaskulær endotelvækstfaktorassay. Indsamlede prøver blev gradvist ækvilibreret til stuetemperatur, før analysen påbegyndtes og fortyndet 1:1 med prøvefortynderen leveret af producenten.

VEGF-indholdet blev bestemt på 50 µl fortyndet prøve med et humant VEGF ELISA-kit (EHVEGF, Pierce Biotechnology, Rockford, Illinois, USA) i henhold til producentens anvisninger og under anvendelse af en udvidet standardkurve, der inkluderer en 16, 8 og 4 pg/ml standard punkt. Alle assays blev udført i to eksemplarer. Den mindste påviselige koncentration af VEGF var 3,5 pg/ml. Værdier lavere end 3,5 pg/ml blev betragtet som lig med 1 for statistisk analyse.