Účinky probiotik v léčbě přetrvávajícího průjmu u dětí

Přetrvávající průjem, který je definován jako průjem, který trvá déle než dva týdny, ale méně než čtyři týdny, je celosvětově rozšířeným zdravotním problémem, zejména v zemích s nízkými příjmy. Je to významný problém veřejného zdraví pro děti, zejména v regionech, jako je Asie, Jižní Amerika a Afrika. Podle Světové zdravotnické organizace (WHO) je průjem druhou hlavní příčinou nemocnosti a úmrtnosti u dětí po akutních respiračních infekcích. Přetrvávající průjem je významný problém, který maří nutriční stav dětí a zvyšuje náklady na léčbu. Mezi běžné patogeny spojené s přetrvávajícím průjmem patří:

Bakterie: Escherichia coli (E. coli), Campylobacter jejuni, Yersinia, Salmonella Enteritidis, Shigella spp., Clostridium difficile, Aeromonas.

Parazit: Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium, Cyclospora, Microsporidia.

Viry: norovirus, rotavirus, adenovirus. Střevní mikroflóra slouží jako ochranná bariéra proti patogenním mikroorganismům a jejich toxinům, hraje klíčovou roli ve vývoji a regulaci imunitního systému ve střevě. Změny střevní mikroflóry byly pozorovány u dětí s přetrvávajícím průjmem, což zdůrazňuje jeho význam pro udržení zdraví střev.

Pokud jde o léčbu přetrvávajících průjmů, antibiotika jsou účinná při léčbě bakteriálních infekcí, které způsobují přetrvávající průjem u dětí, ale ne proti virovým nebo parazitárním infekcím. Nadužívání antibiotik může vést k růstu bakterií odolných vůči antibiotikům, což představuje významný problém pro veřejné zdraví. Probiotika jsou živé mikroorganismy, které mohou hostiteli poskytnout zdravotní výhody, jsou-li konzumovány v dostatečném množství a hrají zásadní roli při udržování zdravé rovnováhy, která se obvykle pohybuje od 1 do 10 miliard denně, v závislosti na zamýšleném účelu prevence nebo podpůrné léčby. . Vysoké dávky probiotik Lactobacillus rhamnosus GG, až 40 miliard denně, se ukázaly jako bezpečné a účinné při léčbě průjmu souvisejícího s antibiotiky. Kvalita důkazů je však střední až nízká. Ve srovnání s druhy Lactobacillus mají druhy Bacillus, jako je B. subtilis, B. clausii a B. coagulans, schopnost tvořit spory, které jsou odolné vůči stresorům prostředí, jako je teplo, kyselina a žluč. To znamená, že probiotika Bacillus s větší pravděpodobností přežijí drsné podmínky trávicího traktu a dostanou se neporušená do střev, kde mohou poskytnout zdravotní výhody. Bylo zjištěno, že probiotika Bacillus jsou přirozeně rezistentní vůči určitým antibiotikům, což z nich může učinit účinnější volbu pro jedince, kteří užívají antibiotika nebo kteří je v minulosti užívali. Výzkumníci tedy navrhují suplementaci probiotik ve vysokých dávkách Bacillus spor jako potenciální řešení pro léčbu pacientů trpících přetrvávajícím průjmem.

Celkovým cílem této studie bylo posoudit účinnost dvou typů probiotik, z nichž první obsahuje 2 miliardy spor B. clausii (LiveSpo® CLAUSY) na ampuli a druhý obsahuje 5 miliard spor tří bakteriálních druhů v ampuli. (LiveSpo® DIA 30), včetně Bacillus subtilis, B. clausii a B. coagulans, při podpoře léčby dětí s přetrvávajícím průjmem.

Prvním cílem je vyhodnocení účinnosti těchto přípravků při zmírňování typických příznaků a zkrácení doby léčby. Sekundárním cílem je měření změn vlastností stolice, hlavních indexů cytokinů a IgA ve vzorcích stolice a krve a složení mikroflóry před a po léčbě LiveSpo® DIA 30 a LiveSpo® CLAUSY.

Za tímto účelem je studie navržena jako randomizovaná, slepá a kontrolovaná klinická studie s 90 účastníky s diagnózou přetrvávajícího průjmu. Účastníci jsou randomizováni do 3 skupin pomocí permutované blokové randomizace: kontrolní skupina používající RO vodu, experimentální skupina 1 používající probiotika LiveSpo® DIA 30 a experimentální skupina 2 používající probiotika LiveSpo® CLAUSY. Každý pacient dostával 6 ampulí přiděleného probiotického přípravku denně, rozdělených do 3 dávek po jídle. Studie zahrnovala každodenní klinické hodnocení ukazatelů, jako je počet typů stolice, přítomnost hlenu ve stolici a frekvence denních stolic.

Obsah a metody pro subklinickou detekci. Účastníky studie byly děti ve věku 3 až 24 měsíců, které vykazovaly známky řídké stolice nebo abnormální vody více než 3krát denně po dobu 14 až 30 dnů, s diagnózou přetrvávajícího průjmu, bez dalších systémových onemocnění kromě průjmu při přijetí. do nemocnice a během léčby.

• Hematologické a biochemické testy se provádějí v den 0 pouze jako součást rutinních postupů na oddělení hematologie a biochemie Národní dětské nemocnice.
• Multiplexní analýza Real-time PCR se provádí v den 0 pouze na Oddělení molekulární biologie infekčních nemocí Národní dětské nemocnice k detekci 24 střevních patogenů ve vzorcích stolice za účelem konzultace vhodné léčebné terapie.
• Test PCR v reálném čase se provádí na vzorcích stolice v den 0, 3 a 7 v den propuštění ve Spobiotic Research Center (vlastní jméno), aby se detekovaly probiotické spory, včetně B. subtilis, B. clausii a B. coagulans, aby křížově zkontrolovat správné užívání probiotik nebo placeba v experimentální a kontrolní skupině, v daném pořadí.
• Testy ELISA se provádějí na vzorcích stolice a krve v den 0 a 7 v den propuštění na Oddělení molekulární biologie pro infekční nemoci Vietnamské národní dětské nemocnice za účelem stanovení hladin prozánětlivých cytokinů a hladin IgA a TNF-alfa, v tomto pořadí, pro hodnocení změn imunitní indikátory během léčby.
• Analýza sekvenování metagenomu 16S V3-V4 byla provedena v Macrogen (Soul, Korea) pomocí technologie sekvenování nové generace (NGS) na platformě Illumina MiSeq (Illumina, San Diego, CA, USA), s využitím běhu 2 × 250 bp. konfigurace. Pro analýzu byla použita DNA extrahovaná ze vzorků stolice asi 5-10 reprezentativních pacientů z každé skupiny v den 0 a v den propuštění s cílem identifikovat změny v mikrobiomu. Paralelně byla aplikována analýza mikrobioty stejnou metodou na 5-10 sdružených vzorků odebraných od 30 pacientů (6 pacientů na sdružený vzorek x 5 vzorků = 30 pacientů; nebo 3 pacienti na sdružený vzorek x 10 vzorků = 30 pacientů).
• Sběr dat a statistická analýza zahrnují sběr individuálních lékařských záznamů a systematizaci informací o pacientech do souboru dat.

Vyšetřovatelé doporučují, aby skupiny CLAUSY a DIA30 pokračovaly v užívání probiotik v preventivní dávce 1-2 ampule denně po dobu dalších 28 dnů po propuštění. Poté proveďte telefonický rozhovor s rodiči pacientů ve všech třech skupinách (kontrola, CLAUSY a DIA30), abyste se zeptali na typické příznaky průjmu, které se mohly opakovat 28. den (nepovinné).

Tabulková analýza se provádí na dichotomických proměnných pomocí χ2 testu nebo Fisherova exaktního testu, když je očekávaná hodnota kterékoli buňky nižší než pět. Spojité proměnné se porovnávají buď pomocí Wilcoxonova testu, t-testu nebo Mann-Whitneyho testu, pokud data nejsou normálně distribuována. K určení, zda existuje statisticky významný rozdíl mezi třemi skupinami, byl proveden test ANOVA. Korelace mezi proměnnými jsou hodnoceny Spearmanovou korelační analýzou. Statistické a grafické analýzy se provádějí na softwaru GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Hladina významnosti všech analýz je nastavena na p < 0,05. P-hodnoty. Účinnost LiveSpo® DIA 30 a LiveSpo® CLAUSY je hodnocena a porovnávána s kontrolou na základě následujících klinických a subklinických kritérií získaných od experimentálních a kontrolních skupin: Primární výsledek: (i) Průjem trvání symptomatické úlevy; Sekundární výsledky: (ii) Regulovat hladiny cytokinů jako IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-23 a TNF-alfa ve vzorcích krve. (iii) Snížení hladiny IgA ve vzorcích krve a stolice. (iv) Zlepšení diverzity a počtu prospěšných bakteriálních druhů ve srovnání se škodlivými bakteriálními druhy ve střevní mikrobiotě.