Efeitos do probiótico no tratamento da diarreia persistente em crianças

A diarreia persistente, definida como diarreia que dura mais de duas semanas, mas menos de quatro semanas, é um problema de saúde generalizado em todo o mundo, principalmente em países de baixa renda. É um importante problema de saúde pública para crianças, especialmente em regiões como Ásia, América do Sul e África. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), a diarreia é a segunda principal causa de morbidade e mortalidade em crianças após as infecções respiratórias agudas. A diarreia persistente é um problema significativo que prejudica o estado nutricional das crianças e aumenta os custos do tratamento. Os patógenos comuns associados à diarreia persistente incluem:

Bactérias: Escherichia coli (E. coli), Campylobacter jejuni, Yersinia, Salmonella Enteritidis, Shigella spp., Clostridium difficile, Aeromonas.

Parasita: Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium, Cyclospora, Microsporidia.

Vírus: norovírus, rotavírus, adenovírus. A microbiota intestinal serve como uma barreira protetora contra microorganismos patogênicos e suas toxinas, desempenhando um papel crucial no desenvolvimento e regulação do sistema imunológico dentro do intestino. Alterações na microbiota intestinal foram observadas em crianças com diarreia persistente, destacando sua importância na manutenção da saúde intestinal.

Em termos de tratamento de diarreia persistente, os antibióticos são eficazes no tratamento de infecções bacterianas que causam diarreia persistente em crianças, mas não contra infecções virais ou parasitárias. O uso excessivo de antibióticos pode levar ao crescimento de bactérias resistentes a antibióticos, o que representa um problema significativo de saúde pública. Os probióticos são microrganismos vivos que podem fornecer benefícios à saúde do hospedeiro quando consumidos em quantidades suficientes, desempenhando um papel vital na manutenção de um equilíbrio saudável, que normalmente varia de 1 a 10 bilhões por dia, dependendo da finalidade pretendida de prevenção ou tratamento de suporte . Altas doses de probióticos de Lactobacillus rhamnosus GG, de até 40 bilhões por dia, demonstraram ser seguras e eficazes no tratamento de diarreia associada a antibióticos. No entanto, a qualidade das evidências é moderada a baixa. Em comparação com as espécies de Lactobacillus, as espécies de Bacillus, como B. subtilis, B. clausii e B. coagulans, têm a capacidade de formar esporos, que são resistentes a estressores ambientais, como calor, ácido e bile. Isso significa que os probióticos Bacillus têm maior probabilidade de sobreviver às duras condições do trato digestivo e chegar intactos aos intestinos, onde podem fornecer benefícios à saúde. Verificou-se que os probióticos Bacillus são naturalmente resistentes a certos antibióticos, o que pode torná-los uma opção mais eficaz para indivíduos que tomam antibióticos ou têm histórico de uso de antibióticos. Assim, os pesquisadores propõem a suplementação probiótica de esporos de Bacillus em altas doses como uma solução potencial para o tratamento de pacientes que sofrem de diarréia persistente.

O objetivo geral deste estudo foi avaliar a eficácia de dois tipos de probióticos, o primeiro contendo 2 bilhões de esporos de B. clausii (LiveSpo® CLAUSY) por ampola, e o segundo contendo 5 bilhões de esporos de três espécies bacterianas por ampola (LiveSpo® DIA 30), incluindo Bacillus subtilis, B. clausii e B. coagulans, no apoio ao tratamento de crianças com diarreia persistente.

O primeiro objetivo é avaliar a eficácia desses produtos no alívio dos sintomas típicos e na redução da duração do tratamento. O objetivo secundário é medir as alterações nas propriedades das fezes, os principais índices de citocinas e IgA nas amostras de fezes e sangue e a composição da microbiota antes e depois do tratamento com LiveSpo® DIA 30 e LiveSpo® CLAUSY.

Para tanto, o estudo foi concebido como um ensaio clínico randomizado, cego e controlado com 90 participantes diagnosticados com diarreia persistente. Os participantes são randomizados em 3 grupos usando randomização de blocos permutados: um grupo de controle usando água RO, grupo experimental 1 usando probióticos LiveSpo® DIA 30 e grupo experimental 2 usando probióticos LiveSpo® CLAUSY. Cada paciente recebeu 6 ampolas do produto probiótico atribuído diariamente, divididas em 3 doses após as refeições. O estudo incluiu avaliação clínica diária de indicadores como número de tipos de fezes, presença de muco nas fezes e frequência de evacuações diárias.

Conteúdos e Métodos de Detecção Subclínica. Os participantes do estudo foram crianças de 3 a 24 meses que apresentaram sinais de fezes moles ou água anormal em mais de 3 ocasiões por dia por um período entre 14 e 30 dias, diagnosticadas com diarreia persistente, sem outras doenças sistêmicas, exceto diarreia na admissão para o hospital e durante o tratamento.

• Os testes hematológicos e bioquímicos são realizados no dia 0 apenas como parte dos procedimentos de rotina no Departamento de Hematologia e Bioquímica do Hospital Infantil Nacional.
• Um ensaio multiplex de PCR em tempo real é realizado no dia 0 apenas no Departamento de Biologia Molecular para Doenças Infecciosas do Hospital Infantil Nacional para detectar 24 patógenos intestinais em amostras de fezes com o objetivo de consultar a terapia de tratamento apropriada.
• Um ensaio de PCR em tempo real é realizado em amostras de fezes nos dias 0, 3 e 7 de alta no Spobiotic Research Center (nome próprio) para detectar esporos probióticos, incluindo B. subtilis, B. clausii e B. coagulans, para verificar o uso adequado de probióticos ou placebo nos grupos experimental e controle, respectivamente.
• Os testes ELISA são realizados em amostras de fezes e sangue no dia 0 e 7 dias de alta no Departamento de Biologia Molecular para Doenças Infecciosas do Hospital Infantil Nacional do Vietnã para determinar os níveis de citocinas pró-inflamatórias e os níveis de IgA e TNF-alfa, respectivamente, para avaliar as alterações no indicadores relacionados ao sistema imunológico durante o tratamento.
• A análise do sequenciamento do metagenoma 16S V3-V4 foi realizada na Macrogen (Seul, Coréia) usando a tecnologia de sequenciamento de próxima geração (NGS) na plataforma Illumina MiSeq (Illumina, San Diego, CA, EUA), utilizando uma execução de 2 × 250 bp configuração. O DNA extraído de amostras de fezes de cerca de 5 a 10 pacientes representativos de cada grupo no dia 0 e no dia da alta foi usado para a análise, com o objetivo de identificar alterações no microbioma. Paralelamente, a análise da microbiota usando o mesmo método foi aplicada a 5-10 amostras agrupadas retiradas de 30 pacientes (6 pacientes por amostra agrupada x 5 amostras = 30 pacientes; ou 3 pacientes por amostra agrupada x 10 amostras = 30 pacientes).
• A coleta de dados e a análise estatística envolvem a coleta de registros médicos individuais e a sistematização das informações do paciente em um conjunto de dados.

Os pesquisadores recomendam que os grupos CLAUSY e DIA30 continuem usando probióticos na dosagem de prevenção de 1-2 ampolas por dia por mais 28 dias após a alta. Depois, conduza uma entrevista por telefone com os pais dos pacientes em todos os três grupos (Controle, CLAUSY e DIA30) para perguntar sobre quaisquer sintomas típicos de diarreia que possam ter ocorrido novamente no dia 28 (opcional).

A análise tabular é realizada em variáveis ​​dicotômicas usando o teste χ2 ou o teste exato de Fisher quando o valor esperado de qualquer célula é inferior a cinco. As variáveis ​​contínuas são comparadas usando o teste de Wilcoxon, teste t ou o teste de Mann-Whitney quando os dados não são normalmente distribuídos. Para determinar se havia uma diferença estatisticamente significativa entre os três grupos, um teste ANOVA foi realizado. As correlações entre as variáveis ​​são avaliadas pela análise de correlação de Spearman. As análises estatísticas e gráficas são realizadas no software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, EUA). O nível de significância de todas as análises é definido em p < 0,05. Valores P. A eficácia de LiveSpo® DIA 30 e LiveSpo® CLAUSY é avaliada e comparada com o controle com base nos seguintes critérios clínicos e subclínicos obtidos dos grupos Experimento e Controle: Resultado primário: (i) Diarreia com duração do alívio sintomático; Resultados secundários: (ii) Regular os níveis de citocinas como IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-23 e TNF-alfa em amostras de sangue. (iii) Diminuição do nível de IgA em amostras de sangue e fezes. (iv) Melhoria na diversidade e contagem de espécies bacterianas benéficas em comparação com espécies de bactérias nocivas na microbiota intestinal.