Эффекты пробиотиков при лечении персистирующей диареи у детей

Постоянная диарея, которая определяется как диарея, которая длится более двух недель, но менее четырех недель, является широко распространенной проблемой здравоохранения во всем мире, особенно в странах с низким уровнем дохода. Это серьезная проблема общественного здравоохранения для детей, особенно в таких регионах, как Азия, Южная Америка и Африка. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), диарея является второй после острых респираторных инфекций причиной заболеваемости и смертности детей. Постоянная диарея представляет собой серьезную проблему, которая ухудшает пищевой статус детей и увеличивает затраты на лечение. Общие патогены, связанные с персистирующей диареей, включают:

Бактерии: кишечная палочка (E. coli), Campylobacter jejuni, Yersinia, Salmonella Enteritidis, Shigella spp., Clostridium difficile, Aeromonas.

Паразиты: Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium, Cyclospora, Microsporidia.

Вирусы: норовирус, ротавирус, аденовирус. Кишечная микробиота служит защитным барьером от патогенных микроорганизмов и их токсинов, играя решающую роль в развитии и регуляции иммунной системы в кишечнике. У детей с персистирующей диареей наблюдались изменения в микробиоте кишечника, что подчеркивает ее важность для поддержания здоровья кишечника.

Что касается лечения затяжной диареи, антибиотики эффективны при лечении бактериальных инфекций, вызывающих затяжную диарею у детей, но не против вирусных или паразитарных инфекций. Чрезмерное использование антибиотиков может привести к росту устойчивых к антибиотикам бактерий, что представляет серьезную проблему для общественного здравоохранения. Пробиотики — это живые микроорганизмы, которые при употреблении в достаточных количествах могут принести пользу для здоровья хозяина, играя жизненно важную роль в поддержании здорового баланса, который обычно колеблется от 1 до 10 миллиардов в день, в зависимости от предполагаемой цели профилактики или поддерживающего лечения. . Было показано, что высокие дозы пробиотиков Lactobacillus rhamnosus GG, до 40 миллиардов в день, безопасны и эффективны при лечении антибиотикоассоциированной диареи. Однако качество доказательств находится в диапазоне от умеренного до низкого. По сравнению с видами Lactobacillus виды Bacillus, такие как B. subtilis, B. clausii и B. coagulans, обладают способностью образовывать споры, устойчивые к стрессовым факторам окружающей среды, таким как тепло, кислота и желчь. Это означает, что пробиотики Bacillus с большей вероятностью выживут в суровых условиях пищеварительного тракта и попадут в кишечник в целости и сохранности, где они могут принести пользу для здоровья. Было обнаружено, что пробиотики Bacillus обладают естественной устойчивостью к определенным антибиотикам, что может сделать их более эффективным вариантом для людей, принимающих антибиотики или уже применявших антибиотики в анамнезе. Таким образом, исследователи предлагают высокие дозы пробиотиков Bacillus spore в качестве потенциального решения для лечения пациентов, страдающих персистирующей диареей.

Общая цель этого исследования состояла в том, чтобы оценить эффективность двух типов пробиотиков, первый из которых содержит 2 миллиарда спор B. clausii (LiveSpo® CLAUSY) на ампулу, а второй содержит 5 миллиардов спор трех видов бактерий на ампулу. (LiveSpo® DIA 30), включая Bacillus subtilis, B. clausii и B. coagulans, в поддержку лечения детей с затяжной диареей.

Первой целью является оценка эффективности этих продуктов в облегчении типичных симптомов и сокращении продолжительности лечения. Второстепенной задачей является измерение изменений свойств стула, индексов основных цитокинов и IgA в образцах стула и крови, а также состава микробиоты до и после лечения препаратами LiveSpo® DIA 30 и LiveSpo® CLAUSY.

С этой целью исследование разработано как рандомизированное, слепое и контролируемое клиническое испытание с участием 90 участников с диагнозом персистирующая диарея. Участников рандомизируют на 3 группы с помощью рандомизации с переставленными блоками: контрольную группу с использованием воды обратного осмоса, экспериментальную группу 1 с использованием пробиотиков LiveSpo® DIA 30 и экспериментальную группу 2 с использованием пробиотиков LiveSpo® CLAUSY. Каждый пациент ежедневно получал по 6 ампул назначенного пробиотического препарата, разделенных на 3 приема после еды. Исследование включало ежедневную клиническую оценку таких показателей, как количество видов стула, наличие слизи в стуле, частота ежедневных дефекаций.

Содержание и методы субклинического обнаружения. Участниками исследования были дети в возрасте от 3 до 24 месяцев, у которых были выявлены признаки жидкого стула или аномального количества воды более 3 раз в день в течение от 14 до 30 дней, с диагнозом персистирующей диареи, без других системных заболеваний, кроме диареи при поступлении. в больницу и во время лечения.

• Гематологические и биохимические исследования проводятся в день 0 только в рамках плановых процедур в отделении гематологии и биохимии РДКБ.
• Только в 0-й день в отделении молекулярной биологии инфекционных болезней Национальной детской больницы проводится мультиплексный ПЦР в реальном времени для выявления 24 кишечных патогенов в образцах стула с целью консультации по соответствующей лечебной терапии.
• ПЦР в реальном времени проводится в образцах стула на 0, 3 и 7 день выписки в Исследовательском центре Spobiotic (имя собственное) для обнаружения пробиотических спор, включая B. subtilis, B. clausii и B. coagulans, для перепроверьте правильность использования пробиотиков или плацебо в экспериментальной и контрольной группах соответственно.
• Тесты ELISA проводятся на образцах стула и крови в день 0 и день выписки 7 в отделении молекулярной биологии инфекционных заболеваний Вьетнамской национальной детской больницы для определения уровней провоспалительных цитокинов и уровней IgA и TNF-альфа, соответственно, для оценки изменений в иммунозависимые показатели во время лечения.
• Анализ секвенирования метагенома 16S V3-V4 был проведен в Macrogen (Сеул, Корея) с использованием технологии секвенирования следующего поколения (NGS) на платформе Illumina MiSeq (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США) с использованием цикла 2 × 250 п.н. конфигурация. ДНК, выделенная из образцов стула примерно 5-10 репрезентативных пациентов из каждой группы в день 0 и в день выписки, использовалась для анализа с целью выявления изменений в микробиоме. Параллельно анализ микробиоты с использованием того же метода был применен к 5-10 объединенным образцам, взятым у 30 пациентов (6 пациентов на объединенный образец x 5 образцов = 30 пациентов; или 3 пациента на объединенный образец x 10 образцов = 30 пациентов).
• Сбор данных и статистический анализ включают в себя сбор индивидуальных медицинских карт и систематизацию информации о пациентах в набор данных.

Исследователи рекомендуют группам CLAUSY и DIA30 продолжать прием пробиотиков в профилактической дозе 1-2 ампулы в день еще в течение 28 дней после выписки. После этого проведите телефонное интервью с родителями пациентов во всех трех группах (контрольная, CLAUSY и DIA30), чтобы узнать о любых типичных симптомах диареи, которые могли повториться на 28-й день (необязательно).

Табличный анализ выполняется на дихотомических переменных с использованием критерия χ2 или точного критерия Фишера, когда математическое ожидание любой ячейки меньше пяти. Непрерывные переменные сравниваются с использованием критерия Уилкоксона, t-критерия или критерия Манна-Уитни, когда данные не распределены нормально. Для определения наличия статистически значимой разницы между тремя группами был проведен тест ANOVA. Корреляции между переменными оцениваются с помощью корреляционного анализа Спирмена. Статистический и графический анализы выполнены с помощью программного обеспечения GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, Калифорния, США). Уровень значимости всех анализов установлен на уровне p < 0,05. P-значения. Эффективность LiveSpo® DIA 30 и LiveSpo® CLAUSY оценивают и сравнивают с контролем на основании следующих клинических и субклинических критериев, полученных в экспериментальной и контрольной группах: Первичный результат: (i) симптоматическая диарея, продолжительность облегчения; Вторичные результаты: (ii) Регулировать уровни цитокинов, таких как IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-23 и TNF-альфа, в образцах крови. (iii) Снижение уровня IgA в образцах крови и кала. (iv) Улучшение разнообразия и количества полезных видов бактерий по сравнению с вредными видами бактерий в микробиоте кишечника.