Effetti del probiotico nel trattamento della diarrea persistente nei bambini

La diarrea persistente, definita come diarrea che dura da più di due settimane ma meno di quattro settimane, è un problema di salute diffuso a livello globale, in particolare nei paesi a basso reddito. È un problema di salute pubblica significativo per i bambini, specialmente in regioni come l'Asia, il Sud America e l'Africa. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), la diarrea è la seconda causa di morbilità e mortalità nei bambini dopo le infezioni respiratorie acute. La diarrea persistente è un problema significativo che vanifica lo stato nutrizionale dei bambini e aumenta i costi di trattamento. I patogeni comuni associati alla diarrea persistente includono:

Batteri: Escherichia coli (E. coli), Campylobacter jejuni, Yersinia, Salmonella Enteritidis, Shigella spp., Clostridium difficile, Aeromonas.

Parassita: Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidium, Cyclospora, Microsporidia.

Virus: norovirus, rotavirus, adenovirus. Il microbiota intestinale funge da barriera protettiva contro i microrganismi patogeni e le loro tossine, svolgendo un ruolo cruciale nello sviluppo e nella regolazione del sistema immunitario all'interno dell'intestino. Sono state osservate alterazioni nel microbiota intestinale nei bambini con diarrea persistente, evidenziando la sua importanza nel mantenimento della salute intestinale.

In termini di trattamento della diarrea persistente, gli antibiotici sono efficaci nel trattamento delle infezioni batteriche che causano la diarrea persistente nei bambini, ma non contro le infezioni virali o parassitarie. L'uso eccessivo di antibiotici può portare alla crescita di batteri resistenti agli antibiotici, il che rappresenta un notevole problema per la salute pubblica. I probiotici sono microrganismi vivi che possono fornire benefici per la salute all'ospite se consumati in quantità sufficienti, svolgendo un ruolo fondamentale nel mantenimento di un sano equilibrio, che in genere varia da 1 a 10 miliardi al giorno, a seconda dello scopo previsto della prevenzione o del trattamento di supporto . I probiotici Lactobacillus rhamnosus GG ad alte dosi, fino a 40 miliardi al giorno, si sono dimostrati sicuri ed efficaci nel trattamento della diarrea associata agli antibiotici. Tuttavia, la qualità delle prove è da moderata a bassa. Rispetto alle specie Lactobacillus, le specie Bacillus, come B. subtilis, B. clausii e B. coagulans, hanno la capacità di formare spore, che sono resistenti a fattori di stress ambientali come calore, acido e bile. Ciò significa che i probiotici Bacillus hanno maggiori probabilità di sopravvivere alle dure condizioni del tratto digestivo e raggiungere l'intestino intatto, dove possono fornire benefici per la salute. È stato scoperto che i probiotici Bacillus sono naturalmente resistenti a determinati antibiotici, il che potrebbe renderli un'opzione più efficace per le persone che stanno assumendo antibiotici o che hanno una storia di uso di antibiotici. Pertanto, i ricercatori propongono un'integrazione probiotica di spore di Bacillus ad alte dosi come potenziale soluzione per il trattamento di pazienti affetti da diarrea persistente.

Lo scopo generale di questo studio era valutare l'efficacia di due tipi di probiotici, il primo contenente 2 miliardi di spore di B. clausii (LiveSpo® CLAUSY) per fiala e il secondo contenente 5 miliardi di spore di tre specie batteriche per fiala (LiveSpo® DIA 30), tra cui Bacillus subtilis, B. clausii e B. coagulans, nel supportare il trattamento dei bambini con diarrea persistente.

Il primo obiettivo è valutare l'efficacia di questi prodotti nell'alleviare i sintomi tipici e ridurre la durata del trattamento. L'obiettivo secondario è misurare i cambiamenti nelle proprietà delle feci, i principali indici di citochine e IgA nelle feci e nei campioni di sangue e la composizione del microbiota prima e dopo il trattamento con LiveSpo® DIA 30 e LiveSpo® CLAUSY.

A tal fine, lo studio è concepito come uno studio clinico randomizzato, cieco e controllato con 90 partecipanti con diagnosi di diarrea persistente. I partecipanti vengono randomizzati in 3 gruppi utilizzando la randomizzazione a blocchi permutati: un gruppo di controllo che utilizza acqua RO, gruppo sperimentale 1 che utilizza probiotici LiveSpo® DIA 30 e gruppo sperimentale 2 che utilizza probiotici LiveSpo® CLAUSY. Ogni paziente ha ricevuto giornalmente 6 fiale del prodotto probiotico assegnato, suddivise in 3 dosi dopo i pasti. Lo studio ha incluso la valutazione clinica quotidiana di indicatori come il numero di tipi di feci, la presenza di muco nelle feci e la frequenza dei movimenti intestinali giornalieri.

Contenuti e metodi per il rilevamento subclinico. I partecipanti allo studio erano bambini di età compresa tra 3 e 24 mesi che mostravano segni di feci molli o acqua anormale in più di 3 occasioni al giorno per una durata compresa tra 14 e 30 giorni, con diagnosi di diarrea persistente, senza altre malattie sistemiche eccetto la diarrea al momento del ricovero in ospedale e durante il trattamento.

• I test ematologici e biochimici vengono condotti il ​​giorno 0 solo come parte delle procedure di routine presso il dipartimento di ematologia e biochimica dell'ospedale pediatrico nazionale.
• Un test PCR multiplex in tempo reale viene condotto solo il giorno 0 presso il Dipartimento di Biologia Molecolare per le Malattie Infettive dell'Ospedale Nazionale dei Bambini per rilevare 24 agenti patogeni intestinali nei campioni di feci allo scopo di consultare una terapia terapeutica appropriata.
• Un test PCR in tempo reale viene condotto su campioni di feci il giorno 0, 3 e 7 giorno di dimissione presso il Centro di ricerca spobiotico (nome proprio) per rilevare le spore probiotiche, tra cui B. subtilis, B. clausii e B. coagulans, per verificare l'uso corretto di probiotici o placebo rispettivamente nei gruppi sperimentali e di controllo.
• I test ELISA vengono condotti su campioni di feci e sangue il giorno 0 e 7 della dimissione presso il Dipartimento di Biologia Molecolare per le Malattie Infettive del Vietnam National Children's Hospital per determinare i livelli di citochine proinfiammatorie e i livelli di IgA e TNF-alfa, rispettivamente, per valutare i cambiamenti nella indicatori immuno-correlati durante il trattamento.
• L'analisi del sequenziamento del metagenoma 16S V3-V4 è stata effettuata presso Macrogen (Seoul, Corea) utilizzando la tecnologia di sequenziamento di nuova generazione (NGS) sulla piattaforma Illumina MiSeq (Illumina, San Diego, CA, USA), utilizzando una corsa 2 × 250 bp configurazione. Per l'analisi è stato utilizzato il DNA estratto da campioni di feci di circa 5-10 pazienti rappresentativi di ciascun gruppo il giorno 0 e il giorno della dimissione, con l'obiettivo di identificare i cambiamenti nel microbioma. Parallelamente, l'analisi del microbiota utilizzando lo stesso metodo è stata applicata a 5-10 campioni aggregati prelevati da 30 pazienti (6 pazienti per campione raggruppato x 5 campioni = 30 pazienti; o 3 pazienti per campione raggruppato x 10 campioni = 30 pazienti).
• La raccolta dei dati e l'analisi statistica implicano la raccolta di cartelle cliniche individuali e la sistematizzazione delle informazioni sui pazienti in un set di dati.

I ricercatori raccomandano che i gruppi CLAUSY e DIA30 continuino a utilizzare i probiotici al dosaggio di prevenzione di 1-2 fiale al giorno per altri 28 giorni dopo la dimissione. Successivamente, condurre un'intervista telefonica con i genitori dei pazienti in tutti e tre i gruppi (Controllo, CLAUSY e DIA30) per informarsi su eventuali sintomi tipici di diarrea che potrebbero essersi ripresentati il ​​giorno 28 (facoltativo).

L'analisi tabulare viene eseguita su variabili dicotomiche utilizzando il test χ2 o il test esatto di Fisher quando il valore atteso di qualsiasi cella è inferiore a cinque. Le variabili continue vengono confrontate utilizzando il test di Wilcoxon, il test t o il test di Mann-Whitney quando i dati non sono distribuiti normalmente. Per determinare se vi fosse una differenza statisticamente significativa tra i tre gruppi, è stato eseguito un test ANOVA. Le correlazioni tra le variabili sono valutate dall'analisi di correlazione di Spearman. Le analisi statistiche e grafiche vengono eseguite sul software GraphPad Prism v8.4.3 (GraphPad Software, CA, USA). Il livello di significatività di tutte le analisi è fissato a p <0,05. Valori P. L'efficacia di LiveSpo® DIA 30 e LiveSpo® CLAUSY viene valutata e confrontata con il controllo in base ai seguenti criteri clinici e subclinici ottenuti dai gruppi Sperimentale e di Controllo: Esito primario: (i) Diarrea durata sollievo sintomatico; Risultati secondari: (ii) Regolare i livelli di citochine come IL-6, IL-8, IL-10, IL-17, IL-23 e TNF-alfa nei campioni di sangue. (iii) Diminuzione del livello di IgA nel sangue e nei campioni fecali. (iv) Miglioramento della diversità e del conteggio delle specie batteriche benefiche rispetto alle specie batteriche dannose nel microbiota intestinale.