Použití BCG vakcíny k pochopení tuberkulózní infekce (Pilot BCG CHIM)

Souvislosti Odhaduje se, že v roce 2020 onemocnělo tuberkulózou (TBC) 10 milionů lidí a 1,5 milionu lidí zemřelo, což z TBC činí po COVID-19 druhého hlavního zabijáka infekce. Multirezistentní tuberkulóza je krizí veřejného zdraví a rostoucí hrozbou pro zdravotní bezpečnost. Navzdory tomu je jedinou v současnosti dostupnou vakcínou pro prevenci tuberkulózy 100 let stará vakcína Bacille Calmette-Guerin (BCG), která zabraňuje roztroušeným formám tuberkulózy, ale má omezenou účinnost proti plicní tuberkulóze.

Fáze 3 testů vakcín proti tuberkulóze jsou rozsáhlé, nákladné a prováděné po dlouhou dobu. Modely kontrolované lidské infekce zahrnují naočkování zdravých účastníků infekčním agens a lze je použít k urychlení vývoje vakcíny a také ke zlepšení porozumění patogenezi onemocnění a imunitní odpovědi hostitele a vývoji nových terapeutických kombinací. V současné době existují obavy při použití divokého typu Mycobacterium tuberculosis jako provokačního agens pro člověka vzhledem k tomu, že infekci nelze spolehlivě vymýtit. Skupina McShane v Oxfordu vytvořila model lidské provokace využívající intradermální BCG a publikovala několik recenzovaných článků. Liverpool School of Tropical Medicine navrhuje replikovat a dále zdokonalovat tento model a já se tohoto projektu pustím jako součást MD. Vyšetřovatelé se zaměřují na provedení sériového odběru vzorků kůže spárovaných s odběrem respiračních slizničních a systémových vzorků, aby prozkoumali a porovnali imunitní odpověď mezi těmito kompartmenty. Tento model lze nakonec použít k výběru nejslibnějších kandidátů pro klinické studie.

Studujte hypotézu

1. Kmen BCG SSI bude získán biopsií tkáně 14 dní po intradermální injekci klasickými mikrobiologickými i molekulárními diagnostickými technikami.
2. Kvantifikovaná BCG obnova (molekulární techniky) minimálně invazivní kožní biopsií bude minimálně z 90 % stejně dobrá jako biopsie zlatého standardu a v budoucnu nabídne účastníkům přijatelnější metodu.

Celkový design studie Jedná se o jednocentrovou studii rozdělenou do dvou částí. První část studie (fáze A) přijme 10 účastníků. Účastníci fáze A dostanou intradermální injekci vakcíny BCG SSI do horní části paže v den 0 v trojnásobku obvyklé dávky (BCG SSI 6-24 x 105 jednotek tvořících kolonie). 14. den po injekci BCG. z místa vpichu BCG budou odebrány následující vzorky kůže za použití lokálního anestetika: kožní výtěr, mikrobiopsie, kožní seškrab a biopsie děrováním. Celkovým cílem této části studie bude zajistit, aby bylo možné BCG izolovat od účastníků intradermální injekce BCG 14 dní po injekci. Vyšetřovatelé se snaží otestovat, zda lze BCG izolovat ve srovnatelných množstvích děrovací biopsií a minimálně invazivními technikami (mikrobiopsie, kožní seškrab a kožní stěr). Do fáze B studie postoupí, pokud jsou schopni izolovat BCG kultivací nebo PCR pomocí jedné z minimálně invazivních technik a nedošlo k žádným závažným nežádoucím příhodám.

Ve druhé fázi studie (fáze B) bude přijato 20 účastníků. Tito účastníci obdrží BCG vakcínu popsanou pro fázi A. Minimálně invazivní technika s nejlepší výtěžností BCG bude použita k provedení podélného odběru vzorků kůže ke sledování růstu BCG a lokální imunitní reakce kůže. Paralelně budou odebrány vzorky z respirační sliznice a krve pro porovnání imunitní odpovědi v těchto kompartmentech.

Studijní postupy

Souhlas:

V obou fázích studie bude proces souhlasu a screeningu stejný. Potenciální účastníci budou pozváni k diskusi o studii na 60minutové schůzce, kde zhlédnou prezentaci o studii a vyplní kvíz o souhlasu, aby prokázali porozumění studii a schopnost vyjádřit souhlas.

Promítání:

K posouzení způsobilosti pro studii bude odebrána zaměřená anamnéza. Bude-li to výzkumným týmem považováno za nutné, budou dotazníky praktických lékařů zaslány praktickým lékařům účastníků, pokud jejich historie očkování nebo zdravotní historie není jasná. Bude provedeno klinické vyšetření včetně kardiorespiračního vyšetření. Budou odebrány vitální funkce a také výtěr z nosu a krku pro test laterálního průtoku COVID-19 (pokud to UKHSA vyžaduje) a skladování, těhotenský test z moči (pouze ženy). Budou odebrány následující krevní testy: HIV test, sérologie hepatitidy, úplný krevní obraz a srážlivost, skladované sérum, krevní PBMC.

BCG intradermální injekce (den 0):

Pro obě části studie, při návštěvě injekce BCG, účastníci dostanou jednu injekci BCG vakcíny v trojnásobku obvyklé dávky intradermálně do horní části paže. Bude použito intradermální aplikační zařízení označené CE (NanoPass MicronJet, NanoPass Technologies Ltd), které je licencováno pro intradermální podávání tekutých léků včetně vakcín pro standardizované intradermální podávání. Po této návštěvě si účastníci vyplní elektronický deník po dobu 14 dnů, aby hlásili případné nežádoucí příhody. V průběhu studie budou mít účastníci přístup k nepřetržité telefonní službě.

Následná fáze A:

Ve fázi A se účastníci zúčastní následných schůzek ve dnech 2, 7, 14, 21 a 28 po BCG. Z místa vpichu BCG bude odebrán kožní tampon a při každé následné návštěvě bude místo vpichu vyfotografováno. Budou provedeny následující krevní testy: sérum a PBMC pro imunologii konzumované při každé následné návštěvě a krevní RNA v den 2.

Kromě toho se účastníci zúčastní 14. dne na kožní biopsie. Lokální anestetikum bude aplikováno kolem místa BCG vakcinace a budou odebrány následující vzorky kůže v tomto pořadí:

• Mikrobiopsie – Tento přístroj používá dutou jehlu k odebrání vzorku kůže o průměru 0,21 mm a hloubce 0,4 mm.
• Kožní seškrábnutí – Tímto se odebere vzorek z povrchu kůže pomocí Rhino-sondy.
• Punch biopsie – Odebere se vzorek kůže ze středu místa BCG pomocí 4mm nástroje pro biopsii punch.

Následná fáze B:

Ve fázi B se účastníci zúčastní následných návštěv ve dnech 2, 7, 14, 21 a 28 po injekci BCG jako ve fázi A.

Kromě toho budou ve fázi B z nosu ve dnech 0, 2, 7, 14, 21 a 28 ve fázi B odebrány následující vzorky respirační sliznice:

• Výplach nosu bude proveden pouze u podskupiny účastníků – nos se propláchne normálním fyziologickým roztokem a vytvořená tekutina se shromáždí a analyzuje
• Nasorpce - účastníci budou mít do nosních dírek vsunuty malé kousky filtračního papíru na maximálně 2 minuty
• Nosní škrábnutí - malé povrchové škrábance se odebírají zevnitř nosu, aby se shromáždily nosní buňky
• Z místa vakcinace BCG budou odebrány následující vzorky kůže: Mikrobiopsie NEBO kožní seškrab (v závislosti na výsledcích fáze A) A Kožní výtěr ve dnech 0, 2, 7, 14, 21 a 28

Laboratorní mykobakteriologický rozbor

• Vzorky kožní biopsie budou kryokonzervovány a následně zpracovány v dávce
• Vzorky kůže budou rozmraženy a homogenizovány a poté kultivovány na agaru Middlebrook 7H11 po dobu 4 týdnů před počítáním.
• Zbývající homogenát bioptického vzorku bude uchováván při -80° pro následnou extrakci DNA
• Zbývající homegenát bude rozmražen a bude extrahována DNA a bude provedena kvantitativní PCR

Laboratorní imunologická analýza Protilátkové odpovědi: Vzorky séra a nasorpce budou uchovány pro měření protilátek pomocí standardních testů ELISA.

Buněčné reakce: Ex vivo testy s interferonem γ (IFN-γ) Enzyme-Linked Immunospot (ELISpot) budou provedeny na čerstvě izolovaných PBMC od všech účastníků. Budou také hodnoceny reakce na purifikovaný proteinový derivát (PPD) z M. tuberculosis. Nestimulované PBMC budou použity jako měřítko produkce IFN-y na pozadí. Výsledky budou uvedeny jako buňky tvořící skvrny na milion PBMC, vypočítané odečtením průměrného počtu nestimulovaných PBMC od průměrného počtu trojitých antigenových jamek a korekcí na počet PBMC v jamce.

Analýza RNA: Vzorky budou uchovány pro testování proveditelnosti transkriptomického podpisu. Tyto metody budou zásadní při vývoji CHIM pro testování vakcín.

Postupy hlášení závažných nežádoucích účinků (SAE) a podezření na neočekávané závažné nežádoucí účinky (SUSAR):

Nežádoucí události budou aktivně i pasivně získávány. Prvních 14 dní bude vypracován deník příznaků, aby se identifikovaly jakékoli nežádoucí příhody, a nežádoucí příhody budou požadovány při následných návštěvách a zaznamenány do eCRF účastníka. Jakákoli závažná nežádoucí příhoda, kterou CI považuje za související s provokační látkou a neočekávanou, bude hlášena REC. Protože provokační látky jsou vakcíny s registrací, mechanismus pro hlášení jakýchkoli závažných nežádoucích účinků MHRA je prostřednictvím žluté karty.

Výbor pro monitorování dat a bezpečnosti (DSMC)

Konkrétní úlohou výboru bude:

• Nezávisle přezkoumat SAE a AESI bez ohledu na příbuznost s jakýmikoli postupy studie v průběhu studie.
• Formálně přezkoumat bezpečnostní profil a kvantifikovanou míru obnovy BCG
• Provádět neplánované kontroly na žádost studijního týmu v požadavku a frekvenci určené závažností hlášených nežádoucích účinků.

DSMC bude dodána bezpečnostní zpráva na konci studie, v případě SAE, nebo pokud o to kdykoli požádá CI nebo členové DSMC.

Předseda DSMC bude rovněž kontaktován s žádostí o radu, pokud se KI domnívá, že je zapotřebí nezávislé poradenství nebo přezkoumání.