Usando a vacina BCG para entender a infecção por tuberculose (Pilot BCG CHIM)

Histórico Em 2020, cerca de 10 milhões de pessoas adoeceram com tuberculose (TB) e 1,5 milhão de pessoas morreram, tornando a TB a segunda principal causa de morte infecciosa depois do COVID-19. A tuberculose multirresistente é uma crise de saúde pública e uma ameaça crescente à segurança da saúde. Apesar disso, a única vacina atualmente disponível para a prevenção da tuberculose é o Bacille Calmette-Guerin (BCG), de 100 anos, que previne formas disseminadas de tuberculose, mas tem eficácia limitada contra a tuberculose pulmonar.

Os ensaios de vacinas de fase 3 para tuberculose são grandes, caros e conduzidos por períodos prolongados. Os modelos de infecção humana controlada envolvem a inoculação de participantes saudáveis ​​com um agente infeccioso e podem ser usados ​​para acelerar o desenvolvimento de vacinas, bem como melhorar a compreensão da patogênese da doença e da resposta imune do hospedeiro e o desenvolvimento de novas combinações terapêuticas. Existem preocupações atuais no uso de Mycobacterium tuberculosis de tipo selvagem como um agente de desafio humano, uma vez que a infecção não pode ser erradicada de forma confiável. O grupo McShane em Oxford estabeleceu um modelo de desafio humano usando BCG intradérmico e publicou vários artigos revisados ​​por pares. A Escola de Medicina Tropical de Liverpool propõe-se a replicar e refinar ainda mais este modelo e eu irei realizar este projeto como parte de um MD. Os investigadores pretendem realizar amostras de pele em série emparelhadas com amostras de mucosa respiratória e sistêmica para investigar e comparar a resposta imune entre esses compartimentos. Em última análise, este modelo pode ser usado para selecionar os candidatos mais promissores para ensaios clínicos.

hipótese de estudo

1. A cepa BCG SSI será recuperada por biópsia de tecido 14 dias após a injeção intradérmica por técnicas clássicas de diagnóstico microbiológico e molecular.
2. A recuperação quantificada de BCG (técnicas moleculares) por biópsia de pele minimamente invasiva será pelo menos 90% tão boa quanto a biópsia padrão ouro e oferecerá um método mais aceitável para os participantes no futuro.

Desenho geral do estudo Este é um estudo de centro único dividido em duas partes. A primeira parte do estudo (fase A) recrutará 10 participantes. Os participantes na fase A receberão injeção intradérmica da vacina BCG SSI na parte superior do braço no dia 0 em três vezes a dose usual (BCG SSI 6-24 x 105 unidades formadoras de colônia). No dia 14 após a injeção de BCG. as seguintes amostras de pele serão coletadas do local da injeção de BCG com o uso de anestésico local: swab de pele, microbiópsia, raspagem de pele e biópsia por punção. O objetivo geral desta parte do estudo será garantir que o BCG possa ser isolado do local da injeção intradérmica de BCG dos participantes 14 dias após a injeção. Os investigadores pretendem testar se o BCG pode ser isolado em quantidades comparáveis ​​por biópsia por punção e técnicas minimamente invasivas (microbiópsia, raspagem de pele e esfregaço de pele). Eles passarão para a fase B do estudo se forem capazes de isolar o BCG por cultura ou PCR usando uma das técnicas minimamente invasivas e nenhum evento adverso grave tiver ocorrido.

Na segunda fase do estudo (fase B) serão recrutados 20 participantes. Esses participantes receberão a vacina BCG conforme descrito para a fase A. A técnica minimamente invasiva com a melhor recuperação de BCG será usada para realizar amostragem longitudinal da pele para monitorar o crescimento do BCG e a resposta imune local da pele. Amostras paralelas serão retiradas da mucosa respiratória e do sangue para comparar a resposta imune nestes compartimentos.

Procedimentos de estudo

Consentimento:

Em ambas as fases do estudo, o processo de consentimento e triagem será o mesmo. Os participantes em potencial serão convidados a discutir o estudo em um encontro de 60 minutos, onde assistirão a uma apresentação sobre o estudo e responderão a um questionário de consentimento para demonstrar a compreensão do estudo e a capacidade de consentir.

Triagem:

Para avaliar a elegibilidade para o estudo, um histórico médico específico será obtido. Se considerado necessário pela equipe de pesquisa, os questionários de GP serão enviados aos GPs dos participantes se seu histórico de vacinação ou histórico médico não estiver claro. Será realizado um exame clínico incluindo exame cardiorrespiratório. Os sinais vitais serão coletados, bem como um esfregaço de nariz e garganta para teste de fluxo lateral COVID-19 (se exigido pela UKHSA) e armazenamento, teste de gravidez de urina (somente mulheres). Serão realizados os seguintes exames de sangue: teste de HIV, sorologia para hepatite, hemograma completo e coagulação, soro armazenado, PBMCs sanguíneos.

Injeção intradérmica de BCG (dia 0):

Para ambas as partes do estudo, na visita de injeção de BCG, os participantes receberão uma única injeção da vacina BCG em três vezes a dose usual por via intradérmica na parte superior do braço. Será usado um dispositivo de entrega intradérmica marcado pela CE (NanoPass MicronJet, NanoPass Technologies Ltd), que é licenciado para a entrega intradérmica de medicamentos líquidos, incluindo vacinas para entrega intradérmica padronizada. Após esta visita, os participantes preencherão um diário eletrônico por 14 dias para relatar quaisquer eventos adversos. Ao longo do estudo, os participantes terão acesso a um serviço telefônico de plantão 24 horas por dia, 7 dias por semana.

Fase de acompanhamento A:

Na fase A, os participantes comparecerão às consultas de acompanhamento nos dias 2, 7, 14, 21 e 28 após o BCG. Um esfregaço de pele será retirado do local da injeção de BCG e uma fotografia do local em cada visita de acompanhamento. Os seguintes exames de sangue serão feitos: soro e PBMC para imunologia em cada consulta de acompanhamento e RNA no sangue no dia 2.

Além disso, os participantes comparecerão no dia 14 para biópsias de pele. O anestésico local será injetado ao redor do local de vacinação com BCG e as seguintes amostras de pele serão coletadas nesta ordem:

• Microbiópsia - Este instrumento usa uma agulha oca para coletar uma amostra de pele de 0,21 mm de diâmetro e 0,4 mm de profundidade.
• Raspagem de pele - Isso coletará uma amostra da superfície da pele usando uma sonda Rhino.
• Biópsia por punção - Isso coletará uma amostra de pele do meio do local do BCG usando um instrumento de biópsia por punção de 4 mm.

Acompanhamento Fase B:

Na fase B, os participantes comparecerão para consultas de acompanhamento nos dias 2, 7, 14, 21 e 28 após a injeção de BCG, como na fase A.

Além disso, na fase B, as seguintes amostras de mucosa respiratória serão coletadas do nariz nos dias 0, 2, 7, 14, 21 e 28 na fase B:

• A lavagem nasal será realizada apenas em um subconjunto de participantes - o nariz é irrigado com solução salina normal e o líquido produzido é coletado e analisado
• Nasoabsorção - os participantes terão pequenos pedaços de papel de filtro inseridos nas narinas por no máximo 2 minutos
• Raspagem nasal - pequenos arranhões superficiais são retirados de dentro do nariz para coletar células nasais
• As seguintes amostras de pele serão coletadas do local de vacinação com BCG: Microbiópsia OU raspagem de pele (dependendo dos resultados da fase A) E Swab de pele nos dias 0, 2, 7, 14, 21 e 28

Análise micobacteriológica laboratorial

• As amostras de biópsia de pele serão criopreservadas e posteriormente processadas em lote
• As amostras de pele serão descongeladas e homogeneizadas, em seguida, cultivadas em ágar Middlebrook 7H11 por 4 semanas antes da contagem.
• O restante homogeneizado da amostra de biópsia será armazenado a -80° para posterior extração de DNA
• O restante do homegenato será descongelado e o DNA será extraído e a PCR quantitativa será realizada

Análise imunológica laboratorial Respostas de anticorpos: Amostras de soro e nasossorção serão retidas para medição de anticorpos usando ensaios ELISA padrão.

Respostas celulares: Ensaios Ex Vivo Interferon γ (IFN-γ) Enzyme-Linked Immunospot (ELISpot) serão realizados em PBMCs recém-isolados de todos os participantes. As respostas ao derivado proteico purificado (PPD) de M. tuberculosis também serão avaliadas. PBMCs não estimulados serão usados ​​como uma medida da produção de IFN-γ de fundo. Os resultados serão relatados como células formadoras de manchas por milhão de PBMCs, calculados subtraindo a contagem média de PBMCs não estimulados da contagem média de poços de antígeno em triplicado e corrigindo o número de PBMCs no poço.

Análise de RNA: As amostras serão retidas para testes de viabilidade de assinatura transcriptômica. Esses métodos serão essenciais à medida que o CHIM se desenvolve para testes de vacinas.

Procedimentos de notificação de eventos adversos graves (SAEs) e suspeitas de reações adversas graves inesperadas (SUSARs):

Os eventos adversos serão solicitados ativa e passivamente. Um diário de sintomas será preenchido nos primeiros 14 dias para identificar quaisquer eventos adversos e os eventos adversos serão solicitados nas visitas de acompanhamento e registrados no eCRF do participante. Qualquer evento adverso grave considerado pelo IC como relacionado ao agente de desafio e inesperado será relatado ao CEP. Como os agentes de desafio são vacinas com Autorização de Introdução no Mercado, o mecanismo para relatar quaisquer SAEs ao MHRA é por meio de cartão amarelo.

Comitê de Monitoramento de Dados e Segurança (DSMC)

O papel específico do comitê será:

• Revisar SAEs e AESIs de forma independente, independentemente da relação com qualquer um dos procedimentos do estudo ao longo do estudo.
• Revisar formalmente o perfil de segurança e a taxa de recuperação de BCG quantificada
• Realizar revisões não programadas a pedido da equipe do estudo em uma demanda e frequência determinadas pela gravidade dos eventos adversos relatados.

O DSMC receberá um relatório de segurança ao final do estudo, no caso de um SAE, ou se solicitado a qualquer momento pelos membros do CI ou do DSMC.

O presidente do DSMC também será contatado para aconselhamento quando o CI julgar necessário um parecer ou revisão independente.