使用 BCG 疫苗了解结核感染 (Pilot BCG CHIM)

背景 2020 年，估计有 1000 万人患上结核病 (TB)，150 万人死亡，使结核病成为仅次于 COVID-19 的第二大传染病杀手。 耐多药结核病是一场公共卫生危机和日益严重的卫生安全威胁。 尽管如此，目前唯一可用于预防结核病的疫苗是已有 100 年历史的卡介苗 (BCG)，它可以预防播散性结核病，但对肺结核的疗效有限。

结核病疫苗的第 3 阶段试验规模大、成本高且持续时间长。 受控人类感染模型涉及给健康参与者接种感染因子，可用于加速疫苗开发，以及提高对疾病发病机制和宿主免疫反应的理解，以及新治疗组合的开发。 鉴于无法可靠地根除感染，目前对使用野生型结核分枝杆菌作为人类挑战剂存在担忧。 牛津的 McShane 小组使用皮内 BCG 建立了人类挑战模型，并发表了几篇同行评议的文章。 利物浦热带医学院提议复制并进一步完善该模型，我将作为医学博士的一部分开展该项目。 研究人员的目标是进行连续的皮肤取样，搭配呼吸道粘膜和全身取样，以调查和比较这些隔间之间的免疫反应。 最终，该模型可用于选择最有希望的临床试验候选者。

研究假设

1. BCG SSI菌株将在皮内注射后14天通过经典微生物学和分子诊断技术通过组织活检回收。
2. 通过微创皮肤活检进行的量化 BCG 恢复（分子技术）将至少达到金标准穿孔活检的 90%，并将在未来为参与者提供更可接受的方法。

总体研究设计 这是一项单中心研究，分为两部分。 研究的第一部分（A 阶段）将招募 10 名参与者。 A 阶段的参与者将在第 0 天接受上臂皮内注射 BCG SSI 疫苗，剂量是通常剂量的三倍（BCG SSI 6-24 x 105 菌落形成单位）。 BCG注射后第14天。 将使用局部麻醉剂从 BCG 注射部位采集以下皮肤样本：皮肤拭子、显微活检、皮肤刮片和穿刺活检。 这部分研究的总体目标是确保在注射后 14 天可以从参与者 BCG 皮内注射部位分离出 BCG。 研究人员旨在测试是否可以通过穿刺活检和微创技术（微生物活检、皮肤刮擦和皮肤拭子）分离出相当数量的 BCG。 如果他们能够使用一种微创技术通过培养或 PCR 分离 BCG 并且没有发生严重的不良事件，他们将进入研究的 B 阶段。

在研究的第二阶段（B 阶段）将招募 20 名参与者。 这些参与者将按照 A 阶段所述接种 BCG 疫苗。将使用具有最佳 BCG 回收率的微创技术进行纵向皮肤取样，以监测 BCG 生长和局部皮肤免疫反应。 将从呼吸道粘膜和血液中提取平行样本，以比较这些隔室中的免疫反应。

留学手续

同意：

在研究的两个阶段，同意和筛选过程将是相同的。 潜在参与者将被邀请在 60 分钟的约会中讨论该研究，他们将在其中观看有关该研究的演示并完成同意测验以证明对研究的理解和同意的能力。

筛选：

为了评估研究的资格，将记录重点病史。 如果研究团队认为有必要，如果参与者的疫苗接种史或病史不明确，将向参与者的全科医生发送全科医生问卷。 将进行临床检查，包括心肺检查。 将采集生命体征，以及用于 COVID-19 横向流动测试（如果 UKHSA 要求）和储存、尿妊娠试验（仅限女性）的鼻子和喉咙拭子。 将进行以下血液测试：HIV 测试、肝炎血清学、全血细胞计数和凝血、储存血清、血液 PBMC。

BCG皮内注射（第0天）：

对于研究的两个部分，在 BCG 注射访视时，参与者将在上臂皮内接受单次 BCG 疫苗注射，注射剂量是通常剂量的三倍。 将使用带有 CE 标志的皮内给药装置（NanoPass MicronJet，NanoPass Technologies Ltd），该装置获准用于液体药物的皮内给药，包括用于标准化皮内给药的疫苗。 这次访问之后，参与者将完成为期 14 天的电子日记以报告任何不良事件。 在整个研究过程中，参与者将可以使用 24/7 全天候电话服务。

后续阶段A：

在 A 阶段，参与者将在 BCG 后第 2、7、14、21 和 28 天参加后续预约。 每次随访时，将从 BCG 注射部位采集皮肤拭子并拍摄该部位的照片。 将进行以下血液测试：用于免疫学的血清和 PBMC 在第 2 天进行每次随访和血液 RNA。

此外，参与者将在第 14 天参加皮肤活检。 将在 BCG 疫苗接种部位周围注射局部麻醉剂，并按此顺序采集以下皮肤样本：

• 显微活检——该仪器使用空心针取直径为 0.21 毫米、深度为 0.4 毫米的皮肤样本。
• 皮肤刮擦 - 这将使用 Rhino 探针从皮肤表面取样。
• 穿刺活检 - 这将使用 4 毫米穿刺活检仪器从 BCG 部位中间采集皮肤样本。

后续B阶段：

在 B 阶段，与 A 阶段一样，参与者将在 BCG 注射后第 2、7、14、21 和 28 天参加随访。

此外，在 B 阶段，将在 B 阶段第 0、2、7、14、21 和 28 天从鼻子采集以下呼吸道粘膜样本：

• 仅对一部分参与者进行洗鼻——用生理盐水冲洗鼻子，收集并分析产生的液体
• 鼻吸法 - 参与者会将小块滤纸插入鼻孔最多 2 分钟
• 鼻刮 - 从鼻子内部取出小的表面刮痕以收集鼻腔细胞
• 以下皮肤样本将从 BCG 疫苗接种部位采集：第 0、2、7、14、21 和 28 天的微生物活检或皮肤刮擦（取决于 A 阶段的结果）和皮肤拭子

实验室分枝杆菌分析

• 皮肤活检标本将被冷冻保存并随后进行分批处理
• 将皮肤样本解冻并匀化，然后在 Middlebrook 7H11 琼脂上培养 4 周，然后计数。
• 剩余的活检标本匀浆将储存在-80°以供后续DNA提取
• 将剩余的 homegenate 解冻，提取 DNA 并进行定量 PCR

实验室免疫学分析抗体反应：将保留血清和鼻吸样本，用于使用标准 ELISA 测定进行抗体测量。

细胞反应：将对来自所有参与者的新鲜分离的 PBMC 进行离体干扰素 γ (IFN-γ) 酶联免疫斑点 (ELISpot) 测定。 还将评估对来自结核分枝杆菌的纯化蛋白衍生物 (PPD) 的反应。 未刺激的 PBMC 将用作背景 IFN-γ 产生的量度。 结果将报告为每百万 PBMC 的斑点形成细胞，通过从一式三份抗原孔的平均计数中减去未刺激的 PBMC 的平均计数并校正孔中的 PBMC 数量来计算。

RNA 分析：样本将被保留用于转录组特征可行性测试。 随着 CHIM 开发疫苗测试，这些方法将是必不可少的。

严重不良事件 (SAE) 和疑似意外严重不良反应 (SUSAR) 的报告程序：

将主动和被动地征求不良事件。 前 14 天将完成症状日记以确定任何不良事件，不良事件将在后续访问中征集并记录在参与者 eCRF 中。 任何被 CI 认为与挑战剂相关且意外的严重不良事件都将报告给 REC。 由于挑战剂是具有上市许可的疫苗，因此向 MHRA 报告任何 SAE 的机制是通过黄卡。

数据和安全监督委员会 (DSMC)

该委员会的具体职责是：

• 独立审查 SAE 和 AESI，无论其与整个研究过程中的任何研究程序是否相关。
• 正式审查安全概况和量化的 BCG 回收率
• 应研究团队的要求，按照报告的不良事件严重程度确定的要求和频率进行计划外审查。

DSMC 将在研究结束时、出现 SAE 时或 CI 或 DSMC 成员随时提出要求时提供安全报告。

如果 CI 认为需要独立建议或审查，还将联系 DSMC 主席寻求建议。