Izolace bezbuněčné fetální DNA z použitého kultivačního média a její potenciální role pro preimplantační genetickou diagnostiku (PGD).

Neinvazivita je společným tématem lékařských specializací 21. století. V porodnictví vyvolalo neinvazivní prenatální testování změnu paradigmatu v prenatální klinické praxi prostřednictvím sekvenování fetální bezbuněčné DNA (cfDNA) v mateřské plazmě. Současná praxe preimplantačního genetického testování aneuploidie (PGT-A) však vyžaduje biopsii trofektodermu, což s sebou nese technické problémy a obavy o životaschopnost embryí. Možnost překonat tyto problémy se objevila v posledních letech s objevem, že cfDNA uvolněná embryem do kultivačního média během posledních fází vývoje nabízí novou strategii pro genetické posouzení preimplantačního embrya.

Naše studie hodnotí možnost izolovat fetální bezbuněčnou DNA (cfDNA) z kultivačního média a porovnává výsledky se vzorky biopsie TE od stejných pacientů, kteří podstoupili cyklus stimulace IVF s intracytoplazmatickou injekcí spermie v nemocnici Al-Sharq v období od března 2022 do dubna 2023. V průběhu studie byla všechna embrya kultivována až do stadia blastocysty. Všichni zařazení pacienti podstoupili niPGD pro určení pohlaví pomocí použitého kultivačního média a také standardní PGD s TE biopsií s použitím techniky polymerázové řetězové reakce pro gen SRY. Embrya byla individuálně kultivována v kapkách média o objemu 30 ml a vývoj embryí pokročil s použitím sekvenčního kultivačního média, což je v souladu s rutinní laboratorní praxí. Pro niPGD analýzu bylo kultivační médium ve stádiu blastocyst v den 5 odebráno (10-20 ul) bezprostředně před provedením biopsie TE. Pouze embrya dosahující stupně 1 (fragmentace menší než 15 %) byla považována za vhodná pro biopsii a vitrifikaci. Vzorky kultivačního média embryí podstoupily amplifikaci celého genomu (WGA) s použitím soupravy DOPlify® WGA (PerkinElmer), aby se vytvořila reprezentativní amplifikace celkové DNA z použitého kultivačního média. WGA na bázi DOP-PCR reprodukovatelně amplifikuje celkovou DNA za účelem produkce mikrogramových množství amplifikované a purifikované genomové DNA za méně než 3 hodiny. Naším cílem je vyhodnotit míru shody mezi výsledky biopsie trofektodermu a cfDNA odebranou z použitého média s optimalizovaným protokolem pro získání adekvátního množství a kvality genomové DNA. Tato zajímavá práce je důležitým úsilím prokázat proveditelnost nového neinvazivního přístupu, který může být spolehlivou alternativou pro hodnocení chromozomálních abnormalit in vitro kultivovaných embryí, které povedou k narození živého a zdravého dítěte.

Později provedeme detekci genu SRY pro určení pohlaví pomocí polymerázové řetězové reakce na bezbuněčné fetální DNA izolované ze vzorků použitého média a porovnáme naše výsledky s výsledky TBC.