Isolering af cellefrit føtalt DNA fra brugt kulturmedium og dets potentielle rolle for præimplantationsgenetisk diagnose (PGD).

Ikke-invasivitet er et fælles tema på tværs af medicinske specialer i det 21. århundrede. Inden for obstetrik fremkaldte non-invasiv prænatal testning et paradigmeskift i prænatal klinisk praksis gennem sekventering af føtalt cellefrit DNA (cfDNA) i moderens plasma. Men den nuværende praksis for præimplantations genetisk testning for aneuploidi (PGT-A) kræver trophectoderm biopsi, hvilket medfører tekniske udfordringer og embryo levedygtighed bekymringer. Muligheden for at overvinde disse problemer nåede horisonten i de senere år, med opdagelsen af, at cfDNA frigivet af embryoet til dyrkningsmedierne i de seneste udviklingsstadier tilbyder en ny strategi til at vurdere præimplantationsembryoet genetisk.

Vores undersøgelse evaluerer muligheden for at isolere føtalt cellefrit DNA (cfDNA) fra dyrkningsmedier og sammenligne resultaterne med TE-biopsiprøver fra de samme patienter, som gennemgik en IVF-stimuleringscyklus med intracytoplasmatisk sædinjektion på Al-Sharq Hospital mellem marts 2022 og april. 2023. I løbet af undersøgelsens tidsramme blev alle embryoner dyrket indtil blastocyststadiet. Alle tilmeldte patienter gennemgik niPGD til kønsbestemmelse under anvendelse af brugte dyrkningsmedier såvel som standard PGD med TE-biopsi ved anvendelse af polymerasekædereaktionsteknik for SRY-gen. Embryonerne blev individuelt dyrket i 30 ml mediedråber, og embryoudviklingen skred frem ved anvendelse af sekventielle dyrkningsmedier, i overensstemmelse med rutinemæssig laboratoriepraksis. Til niPGD-analyse blev kulturmediet i blastocyststadiet på dag 5 opsamlet (10-20 µl) umiddelbart før TE-biopsi blev udført. Kun embryoner, der opnåede en grad 1 (fragmentering mindre end 15%), blev betragtet som egnede til biopsi og forglasning. Embryonkulturmedieprøverne gennemgik hel-genom-amplifikation (WGA) ved hjælp af DOPlify® WGA-kittet (PerkinElmer) for at generere repræsentativ amplifikation af totalt DNA fra brugte kulturmedier. Den DOP-PCR-baserede WGA amplificerer reproducerbart total DNA for at producere mikrogram mængder af amplificeret og oprenset genomisk DNA på mindre end 3 timer. Vi sigter mod at evaluere overensstemmelseshastighederne mellem trophectoderm-biopsiresultater og cfDNA indsamlet fra brugte medier med en optimeret protokol for at opnå en passende mængde og kvalitet af genomisk DNA. Dette interessante arbejde er en vigtig indsats for at etablere gennemførligheden af ​​den nye ikke-invasive tilgang, der kan være et pålideligt alternativ til vurdering af kromosomale abnormiteter af in vitro-dyrkede embryoner, som vil føre til fødslen af ​​en levende og sund baby.

Senere vil vi udføre SRY-gendetektionen til kønsbestemmelse ved hjælp af polymerasekædereaktionen på det cellefrie føtale DNA isoleret fra brugte medieprøver og sammenligne vores resultater med TB-resultaterne.