Délka telomerů u izraelských fibrotických pacientů

Vědecké pozadí intersticiální plicní onemocnění (ILD) zahrnují velkou heterogenní skupinu stavů, které zahrnují plicní parenchym zánětem, fibrózou nebo obojím. Fibrotická ILD (Fild), která se vyznačuje důkazem plicní fibrózy buď zobrazovacími studiemi (hrudníku CT) a/nebo histopatologií, může být výsledkem známých expozic nebo asociace nebo být idiopatická. Léčba Fild závisí na specifické diagnóze, charakteristice pacienta a chování onemocnění. Některé podmínky mohou reagovat příznivě na imunosupresi, zatímco u jiných, jako je idiopatická plicní fibróza (IPF), může být taková léčba škodlivá. Antifibrotická terapie může zmírnit progresi různých Fild, včetně IPF, ale v mnoha případech však progrese onemocnění nakonec vede k fatálnímu výsledku nebo potřebě transplantace plic.

Telomery jsou opakující se 6-nukleotidové sekvence, které omezují konec chromozomů, a jsou nezbytné při stabilizaci chromozomů [1]. Zatímco se zkracují s každou replikací buněk, telomery jsou udržovány komplexními mechanismy, které mohou přidat nukleotidové opakování (telomeráza) a chránit chromozomální konce jinými mechanismy. Zkrácené telomery mohou být výsledkem mutací v genech souvisejících s telomerou. Krátké telomery byly také spojeny s polymorfismem s jedním nukleotidem v těchto gentech. Telomery se zkrátí s věkem a jsou také kratší mezi muži. Ke zkrácení přispívají také další získané faktory, včetně škodlivých expozic, kouření cigaret, obezity, stresu, nedostatku fyzické aktivity a dalších [3-4].

Krátká délka telomery leukocytů (LTL), tj. <10. percentil upravené pro věk, jsou běžné u pacientů s různými plošnými, s identifikovatelnými mutacemi v telomerech v genech, a to jak ve rodinných, tak v sporadických případech [5-6]. Krátká LTL byla spojena s horší prognózou u subjektů s několika Fild, včetně rychlejšího zhoršení testů plicních funkcí, rychlejší progresi onemocnění a kratší přežití bez transplantací [7-11]. Kromě toho měli pacienti s krátkou LTL IPF horší prognózu, když byli vystaveni imunosupresivní léčbě [12], stejně jako pacienti s jiným životem, který se běžně léčil imunosupresí [13]. Antifibrotická terapie se na druhé straně zdá být bezpečná a účinná [14].

Tato hromadění údajů má důsledky na řízení pacientů. Odborníci navrhují testování na LTL u pacientů s familiární plicní fibrózou, račním věkem nástupu onemocnění nebo s osobní nebo rodinnou anamnézou relevantního extrapulmonálního onemocnění [8, 15]. Rovněž bylo doporučeno rychlé zahájení antifibrotiky, včasné doporučení pro transplantaci plic a vyhýbání se imunosupresi [8, 16].

Prevalence krátkého LTL se však liší mezi etnicky rozmanitými kohortami plochých pacientů [7] a nikdy nebyla hodnocena v izraelské populaci.

Odůvodnění Domníváme se, že tato studie vrhne světlo na prevalenci krátkého LTL u izraelských jedinců s Fild a identifikuje prediktory, které umožní přesnější cílení měření LTL v Izraeli. Kromě toho může vést lékaře, pokud jde o pečlivé podání imunosupresivní léčby u izraelských pacientů, kteří mají podezření z krátkých telomerů.

Hypotéza Domníváme se, že podíl subjektů s krátkým LTL je vyšší u izraelských subjektů s rodinným plochým než u sporadického filmu, přesto, že významný podíl sporadických plochých subjektů bude mít také krátký LTL.

To může vést k více rozšířenému a přímému používání měření LTL založených na důkazech mezi izraelskými pacienty s Fildem.

Cíle studie Obecně se zaměřují na posouzení prevalence krátkého LTL u izraelských pacientů s Fild a identifikovat relevantní asociaci a dopad krátkého LTL na tyto pacienty.

Konkrétní cíle

1. Posoudit prevalenci krátkého LTL mezi izraelskými pacienty s familiárním a sporadickým plochem.
2. Identifikovat rizikové faktory pro krátké LTL u izraelských pacientů.
3. Pro prospektivně posoudit výsledek účastníků (s krátkými telomery a bez krátkých telomerů) pomocí složení smrti jakékoli příčiny, transplantace plic a nucené vitální kapacity (FVC) poklesu ≥ 5% v průběhu 1 roku [17].
4. Additionally, we will conduct an exploratory analysis of the components of the composite outcome measure as well as other possible criteria for progressive pulmonary fibrosis (PPF), including annual decline of diffusion capacity for CO (DLCO) ≥10%, FVC decline ≥10%, FVC decline 5-9%, DLCO decline ≥15%, CT progression of fibrosis, and clinical worsening of symptoms [17, 18].

Návrh a metody výzkumu Jedná se o prospektivní studii se spoluprací dvou lékařských center: Plicní fibrosové centrum lékařského centra Tel-Aviv (Ichilov), terciární lékařské středisko ve středním Izraeli a divizi plicního medicíny v Barzilai University Medical Center, sekundární periferní lékařské centrum z jižního Izraele.

Z obou klinik bude přijato celkem 90 pacientů s FILD, což představuje rozmanitou izraelskou populaci. Tato kohorta bude zahrnovat 30 pacientů s familiární plicní fibrózou a 60 se sporadickou plicní fibrózou.

Pacienti s familiární plicní fibrózou jsou pacienti s příbuzným prvním stupněm nebo prvním stupněm s Fillem [8].

Budou také přijato také 10 zdravých kontrol odpovídajících věku bez osobní nebo rodinné anamnézy plicních chorob.

Velikost vzorku celé studie i v našem centru tedy bude zahrnovat až 100 účastníků.

Účastníci s Fillem budou sledováni po dobu 1 roku po náboru, včetně klinických a plicních funkčních testů každých 6 měsíců, nebo častěji, podle ošetřujícího lékaře. Shromážděná data budou zahrnovat demografii účastníků a antropometriku, rodinnou anamnézu a osobní anamnézu, výsledky testů plicních funkcí, hrudní zobrazování a histopatologické vzorce, klinické diagnózy (podle diskuse o multidisciplinárním týmu), léčbu a výsledky.

Měřené proměnné

Shromážděná data budou zahrnovat (viz připojený datový list souboru Excel):

• Stáří
• Pohlaví
• Etnická skupina
• Rodiště
• Výška, hmotnost, BMI
• Rodinná historie
• Historie kouření
• Bydliště
• Povolání
• Minulá lékařská historie, komorbidity a léky
• Relevantní expozice
• ILD diagnóza
• Specifické terapie ILD
• Klinické nálezy, včetně fyzického vyšetření, laboratorních testů, testů plicních funkcí, zobrazování, echokardiografie, plicní biopsická diagnostika, bronchoalveolární výplachový rozdíl
• Hospitalizace
• Diagnóza rakoviny plic nebo jiné malignity
• Výsledky, včetně ročního poklesu testů plicních funkcí, zhoršení symptomů, zhoršení CT příznaků plicní fibrózy, transplantace plic a smrti

Měření LTL Kromě klinických údajů budou odebrány vzorky krve pro měření LTL pomocí analýzy „zlatého standardu“ restrikčního fragmentu (TRF). Stručně řečeno, genomická DNA (2-5 µg) je štěpena přes noc při 37 ° C s restrikční endonukleázou Hinfi. Fragmenty jsou odděleny na agarózovém gelu, přeneseny na hybond n+ membránu. Membrána je hybridizována přes noc při 50 ° C s 5 'koncovou značkou (AACCCT) 3 oligonukleotidovou sondou a s žebříkovou sondou 1 kB žebříku. Po promytí membrány je membrána vystavena fosfoimageru. Průměrná délka telomery se vypočítá pomocí počítačového programu Telotool [19-20]. Analýza TRF bude prováděna v Laboratoři prof. Yehuda Tzfatiho na hebrejské univerzitě, která je vysoce zkušená v oblasti biologie telomer a analýzy délky telomer. Vzorky krve budou odebrány jednou od každého účastníka. Jak je podrobně uvedeno výše pro měření LTL, v rámci této studie nebude provedeno žádné genetické sekvenování.

Výpočet velikosti vzorku za předpokladu, že 50% a 20% účastníků familiárního a sporadického Filda budou mít krátký LTL, velikost vzorku 87 pacientů (29 familiární a 58 sporadických plochých) je zapotřebí k detekci významných rozdílů v proporcích subjektů s krátkou LTL mírou chyby alfa 0,05 a 80% energie.

Navrhovaná studie bude vyžadovat schválení místními institucionálními revizními radami a Helsinskými výbory obou zdravotnických středisek. Jednotlivci budou poskytovat informovaný souhlas před účastí na studii.

Kritéria pro zařazení

1. Dospělé subjekty, ve věku ≥ 18 let
2. Schopný a ochotný poskytnout informovaný souhlas s účastí na studii
3. Plicní fibróza patrná na CT hrudníku (příznaky voštiny a/nebo trakční bronchiektasis) [17]
4. Subjekty splňují kritéria 1 a 2, ale bez důkazu chronické plicní choroby budou sloužit jako kritéria pro vyloučení kontroly

1. subjekty se sarkoidózou jako etiologie pro Fild 2. subjekty, které podstoupily transplantaci plic 3. Těhotné ženy

Srovnání statistické analýzy mezi skupinami (tj. Familiární vs. sporadickým plochem, pacienti s VS bez krátkého LTL) bude provedeno pomocí testu chí-kvadrát, Mann-Whitneyho testu nebo Studentova t-testu, podle měřených proměnných. Korelace budou podle potřeby posouzeny výpočtem Pearsonových nebo Spearmanových koeficientů. Hodnocení prediktorů krátkého LTL a progrese onemocnění bude analyzováno pomocí modelů univariate a multivariate logistické regresní analýzy.