Telomerelänge bei israelischen fibrotischen ILD -Patienten

Der wissenschaftliche Hintergrund interstitielle Lungenerkrankungen (ILD) umfasst eine große heterogene Gruppe von Erkrankungen, an denen das Lungenparenchym durch Entzündung, Fibrose oder beides beteiligt ist. Die fibrotische ILD (FILD), die durch Beweise für Lungenfibrose durch Bildgebungsstudien (Brust -CT) und/oder Histopathologie gekennzeichnet sind, können sich aus bekannten Expositionen oder Assoziationen ergeben oder idiopathisch sein. Das Management von FILD hängt von spezifischer Diagnose, Patienteneigenschaften und Krankheitsverhalten ab. Einige Erkrankungen können positiv auf die Immunsuppression reagieren, während in anderen, wie z. B. idiopathische Lungenfibrose (IPF), eine solche Behandlung schädlich sein kann. Die antifibrotische Therapie kann das Fortschreiten verschiedener FILD, einschließlich IPF, abschwächen. In vielen Fällen führt das Fortschreiten der Krankheit jedoch letztendlich zu einem tödlichen Ergebnis oder einer Notwendigkeit einer Lungentransplantation.

Telomere sind sich wiederholende 6-Nukleotid-Sequenzen, die das Ende der Chromosomen beenden, und sind für stabilisierende Chromosomen wesentlich [1]. Während sie mit jeder Zellreplikation verkürzen, werden Telomere durch komplexe Mechanismen aufrechterhalten, die Nucleotid -Wiederholungen (Telomerase) hinzufügen und chromosomale Enden durch andere Mechanismen schützen können. Kürzte Telomere können aus Mutationen in telomerbezogenen Genen resultieren. Kurze Telomere wurden auch mit einem einzelnen Nukleotidpolymorphismus in diesen Genen in Verbindung gebracht. Telomere verkürzen sich mit dem Alter und sind auch bei Männern kürzer. Zusätzliche erworbene Faktoren tragen ebenfalls zur Verkürzung bei, einschließlich schädlicher Expositionen, Zigarettenrauchen, Fettleibigkeit, Stress, mangelnder körperlicher Aktivität und anderen [3-4].

Die kurze Leukozyten-Telomerlänge (LTL), d. H. <10. Perzentil, die für das Alter angepasst sind, sind bei Patienten mit verschiedenen FILD häufig mit oder ohne identifizierbare Mutationen in telomerbezogenen Genen, sowohl in familiären als auch in sporadischen Fällen [5-6]. Die kurze LTL wurde bei Probanden mit mehreren FILD mit einer schlechteren Prognose in Verbindung gebracht, einschließlich einer schnelleren Verschlechterung von Lungenfunktionstests, schnelleren Fortschreiten der Erkrankung und einem kürzeren transplantationsfreien Überleben [7-11]. Darüber hinaus hatten IPF -Patienten mit kurzer LTL eine schlechtere Prognose, wenn sie einer immunsuppressiven Behandlung ausgesetzt waren [12], ebenso wie Patienten mit anderen FILD, die üblicherweise mit Immunsuppression behandelt wurden [13]. Die antifibrotische Therapie hingegen scheint sicher und wirksam zu sein [14].

Diese akkumulierenden Daten haben Auswirkungen auf das Management von Patienten. Experten schlagen Testen auf LTL bei Patienten mit familiärer Lungenfibrose, frühzeitiger Erkrankungsalter oder mit persönlicher oder familiärer Vorgeschichte einer relevanten extrapulmonalen Erkrankung [8, 15]. Eine sofortige Initiierung der Antifibrotika, die frühe Überweisung zur Lungentransplantation und die Vermeidung der Immunsuppression wurden ebenfalls empfohlen [8, 16].

Die Prävalenz von kurzer LTL variiert jedoch zwischen ethnisch unterschiedlichen Kohorten von Fild -Patienten [7] und wurde in der israelischen Population noch nie bewertet.

Begründung Wir sind der Ansicht, dass diese Studie auf die Prävalenz von kurzer LTL bei israelischen Personen mit Fild beleuchtet und Prädiktoren identifiziert werden, die eine genauere Targeting von LTL -Messungen in Israel ermöglichen. Darüber hinaus kann es die Ärzte in Bezug auf die sorgfältige Verabreichung von immunsuppressiven Behandlungen bei israelischen Patienten leiten, die vermutet, dass sie kurze Telomere haben.

Hypothese Wir glauben, dass der Anteil der Probanden mit kurzer LTL bei israelischen Probanden mit familiärem Fild höher ist als bei sporadischem Fild, aber ein erheblicher Anteil der sporadischen Fild -Probanden wird auch eine kurze LTL haben.

Dies kann zu einer weiter verbreiteten und evidenzbasierten gerichteten Verwendung von LTL-Messungen bei israelischen Patienten mit FILD führen.

Studienziele allgemein Ziel, die Prävalenz von kurzer LTL bei israelischen Patienten mit FILD zu bewerten und einen relevanten Assoziation und die Auswirkungen von kurzer LTL auf diese Patienten zu identifizieren.

Spezifische Ziele

1. Beurteilung der Prävalenz von kurzer LTL bei israelischen Patienten mit familiärem und sporadischem Fild.
2. Risikofaktoren für kurze LTL bei israelischen Fildpatienten zu identifizieren.
3. Um das Ergebnis von Teilnehmern (mit und ohne kurze Telomere) unter Verwendung eines Verbundwerkstoffs aus dem Tod einer Ursache, einer Lungentransplantation und einer erzwungenen Vitalkapazität (FVC) prospektiv zu bewerten, sinkt über einen Zeitraum von 1 Jahr um ≥ 5% [17].
4. Additionally, we will conduct an exploratory analysis of the components of the composite outcome measure as well as other possible criteria for progressive pulmonary fibrosis (PPF), including annual decline of diffusion capacity for CO (DLCO) ≥10%, FVC decline ≥10%, FVC decline 5-9%, DLCO decline ≥15%, CT progression of fibrosis, and clinical worsening of symptoms [17, 18].

Forschungsdesign & Methoden Dies ist eine prospektive Studie mit Zusammenarbeit von zwei medizinischen Zentren: dem Lungenfibrosezentrum des Tel-Aviv Medical Center (ICHILOV), einem tertiären medizinischen Zentrum im Zentrum von Israel und der Aufteilung des Lungenmedizines von Barzilai University Medical Center, ein sekundäres, peripheres medizinisches Zentrum aus Süd-Israel.

Insgesamt werden 90 Patienten mit FILD aus den beiden Kliniken rekrutiert, wodurch eine vielfältige israelische Bevölkerung dargestellt wird. Diese Kohorte umfasst 30 Patienten mit familiärer Lungenfibrose und 60 mit sporadischer Lungenfibrose.

Patienten mit familiärer Lungenfibrose sind diejenigen mit mindestens einem relativ mit Fild im ersten Grad oder im zweiten Grad [8].

10 gesunde altersübergreifende Kontrollen ohne persönliche oder familiäre Anamnese von Lungenerkrankungen werden ebenfalls rekrutiert.

Die Stichprobengröße der gesamten Studie sowie in unserem Zentrum umfasst somit bis zu 100 Teilnehmer.

Die Teilnehmer mit Fild werden nach der Einstellung 1 Jahr nach der Einstellung verfolgt, einschließlich der mindestens alle 6 Monate oder häufiger klinischer und Lungenfunktionstests nach dem Ermessen der behandelnden Arzt. Zu den gesammelten Daten gehören demografische Daten der Teilnehmer und Anthropometrie, Familiengeschichte und persönliche Krankengeschichte, Lungenfunktionstests Ergebnisse, Thoraxbildgebung und histopathologische Muster, klinische Diagnosen von FILD (gemäß einer multidisziplinären Teamdiskussion), Behandlung und Ergebnis.

Gemessene Variablen

Die gesammelten Daten werden gehören (siehe angehängte Excel -Dateidatenblatt):

• Alter
• Geschlecht
• Ethnische Gruppe
• Geburtsort
• Größe, Gewicht, BMI
• Familiengeschichte
• Rauchergeschichte
• Wohnort
• Beruf
• Vergangene Krankengeschichte, Komorbiditäten und Medikamente
• Relevante Expositionen
• ILD -Diagnose
• Spezifische ILD -Therapien
• Klinische Befunde, einschließlich körperlicher Untersuchung, Labortests, Lungenfunktionstests, Bildgebung, Echokardiographie, Diagnose der Lungenbiopsie, bronchoalveolarer Lavage -Differential
• Krankenhausaufenthalte
• Diagnose von Lungenkrebs oder anderer Malignität
• Ergebnisse, einschließlich eines jährlichen Rückgangs der Lungenfunktionstests, sich verschlechternde Symptome, Verschlechterung der CT -Anzeichen von Lungenfibrose, Lungentransplantation und Tod

LTL -Messung Zusätzlich zu klinischen Daten werden Blutproben gesammelt, um LTL unter Verwendung der TRF -Analysemethode "Gold Standard" Telomer Restriction Fragment (TRF) zu messen. Kurz gesagt, die genomische DNA (2-5 µg) wird über Nacht bei 37 ° C mit Hinfi-Restriktionsendonuklease verdaut. Fragmente werden auf einem Agarosegel getrennt, das in eine Hybond N+ -Membran übertragen wird. Die Membran wird über Nacht bei 50 ° C mit einer 5-'-endkarätigen (AACCCT) 3 Oligonukleotidsonde und einer Leitersonde von 1 KB Leiter hybridisiert. Nach der Membranwäsche wird die Membran Phosphoimager ausgesetzt. Die mittlere Telomerlänge wird vom Computerprogramm Telotool [19-20] berechnet. Die TRF -Analyse wird im Labor von Prof. Yehuda Tzfati an der hebräischen Universität durchgeführt, das auf dem Gebiet der Telomer -Biologie und in der Analyse der Telomerlänge sehr erfahren ist. Von jedem Teilnehmer werden einmal Blutproben entnommen. Wie oben für die LTL -Messung beschrieben, wird im Rahmen dieser Studie keine genetische Sequenzierung durchgeführt.

Die Berechnung der Stichprobengröße unter der Annahme, dass 50% und 20% der Teilnehmer im familiären Fild und des sporadischen FILD einen kurzen LTL haben, ist eine Stichprobengröße von 87 Patienten (29 familiäre und 58 sporadische Fild) erforderlich, um signifikante Unterschiede in der Proposition von Probanden mit kurzer LTL mit einer Alpha -Fehlerrate von 0,05 und 80% zu erfassen.

Die vorgeschlagene Studie erfordert die Genehmigung durch lokale institutionelle Überprüfungsausschüsse und Helsinki -Ausschüsse beider Medical Center. Einzelpersonen werden vor der Teilnahme an der Studie eine Einverständniserklärung einreichen.

Einschlusskriterien

1. Erwachsene Probanden im Alter von ≥ 18 Jahren
2. Fähig und bereit, eine Einverständniserklärung zur Teilnahme an der Studie zu erhalten
3. Lungenfibrose auf der Brust -CT (Anzeichen von Waben- und/oder Traktionsbronchiektase) [17]
4. Probanden erfüllen die Kriterien 1 und 2, aber ohne Hinweise auf chronische Lungenerkrankungen werden als Kontrollkriterien dienen

1. Probanden mit Sarkoidose als Ätiologie für Fild 2. Probanden, die eine Lungentransplantation unterzogen hatten.

Der statistische Analysevergleich zwischen Gruppen (d. H. familiären vs. sporadischen FILD, Patienten mit VS ohne kurze LTL) werden unter Verwendung des Chi-Quadrat-Tests, des Mann-Whitney-Tests oder des Student-T-Tests gemäß gemessenen Variablen durchgeführt. Korrelationen werden durch die Berechnung von Pearson oder Spearman -Koeffizienten gegebenenfalls bewertet. Die Bewertung von Prädiktoren für kurze LTL und des Fortschreitens der Krankheit wird unter Verwendung von univariaten und multivariaten logistischen Regressionsanalysemodellen analysiert.