Lunghezza dei telomeri nei pazienti con ILD fibrotici israeliani

Le malattie polmonari interstiziali di fondo scientifico (ILD) comprendono un grande gruppo eterogenico di condizioni che coinvolgono il parenchima polmonare per infiammazione, fibrosi o entrambi. L'ILD fibrotico (FILD), che è caratterizzato dall'evidenza della fibrosi polmonare da studi di imaging (TC toracica) e/o istopatologia, può derivare da esposizioni o associazioni note o essere idiopatica. La gestione del FILD dipende dalla diagnosi specifica, dalle caratteristiche del paziente e dal comportamento della malattia. Alcune condizioni possono rispondere favorevolmente all'immunosoppressione, mentre in altre, come la fibrosi polmonare idiopatica (IPF), tale trattamento può essere dannoso. La terapia antifibrotica può attenuare la progressione di vari FILD, incluso IPF, ma in molti casi, la progressione della malattia alla fine porta a un risultato fatale o alla necessità di trapianto di polmone.

I telomeri sono sequenze ripetitive a 6 nucleotidi che limitano la fine dei cromosomi e sono essenziali per stabilizzare i cromosomi [1]. Mentre accorciano con ogni replicazione cellulare, i telomeri sono mantenuti da meccanismi complessi che possono aggiungere ripetizioni nucleotidiche (telomerasi) e proteggere le estremità cromosomiche da altri meccanismi. I telomeri accorciati possono derivare da mutazioni nei geni correlati ai telomeri. I telomeri brevi sono stati anche associati al polimorfismo a singolo nucleotide in quei geni. I telomeri si accorciano con l'età e sono anche più brevi tra i maschi. Ulteriori fattori acquisiti contribuiscono anche all'accorciamento, tra cui esposizioni dannose, fumo di sigaretta, obesità, stress, mancanza di attività fisica e altri [3-4].

La lunghezza dei telomeri di leucociti corti (LTL), ovvero <10 ° percentile adeguato per età, sono comuni nei pazienti con vari Fild, con o senza mutazioni identificabili nei geni correlati ai telomeri, sia in casi familiari che sporadici [5-6]. Il breve LTL è stato associato a una prognosi peggiore tra i soggetti con diversi Fild, incluso un rapido deterioramento dei test delle funzioni polmonari, una progressione della malattia più rapida e una sopravvivenza libera da trapianto più breve [7-11]. Inoltre, i pazienti con IPF con breve LTL avevano una prognosi peggiore quando esposti al trattamento immunosoppressivo [12], così come i pazienti con altri Fild comunemente trattati con immunosoppressione [13]. La terapia antifibrotica, d'altra parte, sembra essere sicura ed efficace [14].

Questi dati accumulati hanno implicazioni sulla gestione dei pazienti. Gli esperti suggeriscono di test per LTL in pazienti con fibrosi polmonare familiare, prima età di insorgenza della malattia o con storia personale o familiare di malattia extrapolmonare rilevante [8, 15]. Sono stati raccomandati anche pronta iniziazione di antifibrotici, referral precoce per trapianto di polmone ed evitamento dell'immunosoppressione [8, 16].

Tuttavia, la prevalenza di LTL breve varia tra le coorti etnicamente diverse dei pazienti con FILD [7] e non sono mai state valutate nella popolazione israeliana.

Razionale crediamo che questo studio farà luce sulla prevalenza di Short LTL negli individui israeliani con FILD e identificherà i predittori che consentiranno un targeting più preciso delle misurazioni LTL in Israele. Inoltre, può guidare i medici in merito all'attenta somministrazione di trattamenti immunosoppressivi nei pazienti con fild israeliani sospettati di avere telomeri corti.

Ipotesi riteniamo che la percentuale di soggetti con corto LTL sia più elevata nei soggetti israeliani con fild familiare che con il fild sporadico, ma una percentuale significativa di soggetti sporadici fild avrà anche un breve LTL.

Ciò può portare a un uso diretto più diffuso e basato sull'evidenza delle misurazioni LTL tra i pazienti israeliani con FILD.

Obiettivi di studio Generale mira a valutare la prevalenza di LTL breve tra i pazienti israeliani con FILD e identificare l'associazione pertinente e l'impatto di LTL breve su quei pazienti.

Obiettivi specifici

1. Per valutare la prevalenza di LTL breve tra i pazienti israeliani con fild familiare e sporadico.
2. Identificare i fattori di rischio per il corto LTL nei pazienti con Fild israeliani.
3. Valutare prospetticamente l'esito dei partecipanti (con e senza telomeri brevi) usando un composito di morte di qualsiasi causa, trapianto polmonare e capacità vitale forzata (FVC) diminuisce ≥5% per un periodo di 1 anno [17].
4. Inoltre, condurremo un'analisi esplorativa dei componenti della misura del risultato composito, nonché altri possibili criteri per la fibrosi polmonare progressiva (PPF), incluso il declino annuale della capacità di diffusione per CO (DLCO) ≥10%, declino FVC ≥10%, FVC Declino FVC, 18%, 18%, 18%, 18%, 5%di decesso. 17.

Progettazione e metodi di ricerca Questo è uno studio prospettico, con collaborazione di due centri medici: il centro di fibrosi polmonare del Tel-Aviv Medical Center (Ichilov), un centro medico terziario di Israele centrale e la divisione della medicina polmonare dell'Università di Barzilai, un centro medico periferico e periferico da sud di Israele.

Un totale di 90 pazienti con FILD saranno reclutati dalle due cliniche, rappresentando così diverse popolazioni israeliane. Questa coorte includerà 30 pazienti con fibrosi polmonare familiare e 60 con fibrosi polmonare sporadica.

I pazienti con fibrosi polmonare familiare sono quelli con un parente di primo grado o di secondo grado con FILD [8].

Verranno reclutati anche 10 controlli sani abbinati all'età senza una storia personale o familiare di malattie polmonari.

Pertanto, la dimensione del campione dell'intero studio, nonché nel nostro centro includerà fino a 100 partecipanti.

I partecipanti a FILD saranno seguiti per 1 anno dopo il reclutamento, compresi i test di funzionalità clinica e polmonare ogni 6 mesi, o più frequentemente, secondo la discrezione del medico curante. I dati raccolti includeranno dati demografici dei partecipanti e antropometria, storia familiare e storia medica personale, risultati dei test polmonari, imaging toracico e modelli istopatologici, diagnosi cliniche di FILD (secondo una discussione di gruppo multidisciplinare), trattamento e risultato.

Variabili misurate

I dati raccolti includeranno (vedere la scheda dati dei file Excel allegata):

• Età
• Genere
• Gruppo etnico
• Luogo di nascita
• Altezza, peso, BMI
• Storia familiare
• Storia del fumo
• Luogo di residenza
• Occupazione
• Storia medica passata, comorbilità e farmaci
• Esposizioni pertinenti
• Diagnosi ILD
• Terapie ILD specifiche
• Risultati clinici, tra cui esame fisico, test di laboratorio, test di funzionalità polmonare, imaging, ecocardiografia, diagnosi di biopsia polmonare, differenziale di lavaggio broncoalveolare
• Ospedale
• Diagnosi di carcinoma polmonare o altra malignità
• Risultati, incluso il declino annuale dei test di funzionalità polmonare, il peggioramento dei sintomi, il peggioramento dei segni CT di fibrosi polmonare, il trapianto polmonare e la morte

Misurazione LTL Oltre ai dati clinici, i campioni di sangue verranno raccolti per misurare LTL utilizzando il metodo di analisi del frammento di restrizione dei telomeri (TRF). In breve, il DNA genomico (2-5 µg) viene digerito durante la notte a 37 ° C con endonucleasi di restrizione Hinfi. I frammenti vengono separati su un gel di agarosio, trasferiti su una membrana Hybond N+. La membrana viene ibridata durante la notte a 50 ° C con una sonda oligonucleotidica 3 etichettata da 5 '(AACCCT) 3 e con sonda della scala della scala da 1KB. Dopo i lavaggi della membrana, la membrana è esposta al fosfoimager. La lunghezza media dei telomeri è calcolata dal programma per computer Teltool [19-20]. L'analisi TRF sarà condotta presso il laboratorio del Prof. Yehuda Tzfati presso l'Università ebraica, che ha un grande esperienza nel campo della biologia dei telomeri e nell'analisi della lunghezza dei telomeri. I campioni di sangue verranno prelevati una volta da ciascun partecipante. Come dettagliato sopra per la misurazione di LTL, non verrà eseguito sequenziamento genetico come parte di questo studio.

Calcolo della dimensione del campione Supponendo che il 50% e il 20% dei partecipanti al FILD familiare e al Fild sporadico avranno un LTL corto, una dimensione del campione di 87 pazienti (29 FILD familiare e 58 sporadica) per rilevare differenze significative nelle proporzioni di soggetti con LTL corto con un tasso di errore alfa di 0,05 e 80%.

Lo studio proposto richiederà l'approvazione dei comitati di revisione istituzionale locali e dei comitati Helsinki di entrambi i Centro medico. Le persone forniranno il consenso informato prima della partecipazione allo studio.

Criteri di inclusione

1. Soggetti adulti, di età ≥18 anni
2. In grado e disposto a fornire il consenso informato per partecipare allo studio
3. Fibrosi polmonare evidente sulla TC toracica (segni di bronchiectasie a nido d'ape e/o trazione) [17]
4. I soggetti che soddisfano i criteri 1 e 2 ma senza prove di malattia polmonare cronica serviranno come criteri di esclusione dei controlli

1. Soggetti con sarcoidosi come eziologia per Fild 2. Soggetti che avevano subito il trapianto di polmone 3. Donne in gravidanza

Confronto di analisi statistica tra gruppi (ovvero FILD sporadico familiare vs, pazienti con VS senza LTL breve) verranno eseguiti utilizzando il test Chi-quadrato, il test di Mann-Whitney o il test t di Student, secondo le variabili misurate. Le correlazioni saranno valutate calcolando i coefficienti di Pearson o Spearman, a seconda dei casi. La valutazione dei predittori di LTL breve e della progressione della malattia sarà analizzata utilizzando modelli di analisi di regressione logistica univariata e multivariata.