Telomerer længde i israelsk fibrotiske ILD -patienter

Videnskabelig baggrund Interstitielle lungesygdomme (ILD) omfatter en stor heterogen gruppe af tilstande, der involverer lungeparenchyma ved betændelse, fibrose eller begge dele. Fibrotisk ILD (Fild), der er kendetegnet ved bevis for lungefibrose ved enten billeddannelsesundersøgelser (bryst CT) og/eller histopatologi, kan være resultatet af kendte eksponeringer eller tilknytning eller være idiopatisk. Håndtering af FILD afhænger af specifik diagnose, patientkarakteristika og sygdomsadfærd. Nogle tilstande kan reagere positivt på immunsuppression, mens i andre, såsom idiopatisk lungefibrose (IPF), kan en sådan behandling være skadelig. Antifibrotisk terapi kan dæmpe progressionen af ​​forskellige fild, herunder IPF, men i mange tilfælde fører sygdomsprogression i sidste ende til et dødeligt resultat eller behov for lungetransplantation.

Telomerer er gentagne 6-nukleotidsekvenser, der hætter afslutningen af ​​kromosomer og er vigtige for at stabilisere kromosomer [1]. Mens de forkorter med hver celle -replikation, opretholdes telomerer af komplekse mekanismer, der kan tilføje nukleotid -gentagelser (telomerase) og beskytte kromosomale ender med andre mekanismer. Kortede telomerer kan være resultatet af mutationer i telomerrelaterede gener. Korte telomerer er også blevet forbundet med enkelt nukleotidpolymorfisme i disse gener. Telomerer forkortes med alderen og er også kortere blandt mænd. Yderligere erhvervede faktorer bidrager også til forkortelse, herunder skadelige eksponeringer, cigaretrygning, fedme, stress, mangel på fysisk aktivitet og andre [3-4].

Kort leukocyt-telomerlængde (LTL), dvs. <10. percentil justeret for alder, er almindelige hos patienter med forskellige fild, med eller uden identificerbare mutationer i telomerrelaterede gener, både i familiære og sporadiske tilfælde [5-6]. Kort LTL er blevet forbundet med værre prognose blandt personer med adskillige skib, herunder hurtigere forringelse af lungefunktioner, hurtigere sygdomsprogression og kortere transplantationsfri overlevelse [7-11]. Derudover havde IPF -patienter med kort LTL dårligere prognose, når de blev udsat for immunsuppressiv behandling [12], ligesom patienter med anden FILD ofte behandlet med immunsuppression [13]. Antifibrotisk terapi synes på den anden side at være sikker og effektiv [14].

Denne akkumulerende data har konsekvenser for håndtering af patienter. Eksperter foreslår test for LTL hos patienter med familiær lungefibrose, tidlig alder af sygdomsdebut eller med personlig eller familiehistorie med relevant ekstrapulmonal sygdom [8, 15]. Hurtig initiering af antifibrotika, tidlig henvisning til lungetransplantation og undgåelse af immunsuppression er også blevet anbefalet [8, 16].

Imidlertid varierer forekomsten af ​​korte LTL mellem etnisk forskellige kohorter af FILD -patienter [7] og er aldrig blevet vurderet i den israelske befolkning.

Begrundelse Vi mener, at denne undersøgelse vil kaste lys over forekomsten af ​​korte LTL hos israelske individer med FILD og identificere prediktorer, der muliggør mere præcis målretning af LTL -målinger i Israel. Derudover kan det vejlede læger med hensyn til omhyggelig administration af immunsuppressive behandlinger hos israelske fild -patienter, der mistænkes for at have korte telomerer.

Hypotese Vi mener, at andelen af ​​emner med kort LTL er højere hos israelske emner med familiærvild end med sporadisk fild, men alligevel vil en betydelig del af sporadiske fild -emner også have en kort LTL.

Dette kan føre til mere udbredt og evidensbaseret rettet anvendelse af LTL-målinger blandt israelske patienter med Fild.

Undersøgelsesmål Generelt mål for at vurdere forekomsten af ​​korte LTL blandt israelske patienter med FILD og identificere relevant tilknytning og påvirkning af CHART LTL på disse patienter.

Specifikke mål

1. For at vurdere forekomsten af ​​korte LTL blandt israelske patienter med familiær og sporadisk fild.
2. At identificere risikofaktorer for Kort LTL hos israelske fild -patienter.
3. At prospektivt vurdere resultatet af deltagere (med og uden korte telomerer) ved hjælp af en sammensætning af død af enhver årsag, lungetransplantation og tvungen vital kapacitet (FVC) falder ≥5% over en 1-årig periode [17].
4. Derudover vil vi foretage en efterforskningsanalyse af komponenterne i det sammensatte resultatmål såvel som andre mulige kriterier for progressiv lungefibrose (PPF), inklusive årlig tilbagegang af diffusionskapacitet for CO (DLCO) ≥10%, FVC-tilbagegang ≥10%, FVC-nedgang 5-9%, DLCO-tilbagegang ≥ 15%, CT-progression af fibrose, og klinisk forringelse af symptomet på 18].

Forskningsdesign og metoder Dette er en prospektiv undersøgelse med samarbejde med to medicinske centre: Pulmonal Fibrosis Center for Tel-Aviv Medical Center (ICHILOV), et tertiært medicinsk center i det centrale Israel og opdelingen af ​​pulmonal medicin i Barzilai University Medical Center, et sekundært, perifert medicinsk center fra det sydlige Israel.

I alt 90 patienter med Fild rekrutteres fra de to klinikker, hvilket repræsenterer forskellig israelsk befolkning. Denne kohort vil omfatte 30 patienter med familiær lungefibrose og 60 med sporadisk lungefibrose.

Patienter med familiær lungefibrose er dem med mindst en første grad eller anden grad af slægtning med FILD [8].

10 sunde aldersmatchede kontroller uden nogen personlig eller familiehistorie med lungesygdom vil også blive rekrutteret.

Således vil prøvestørrelse af hele undersøgelsen såvel som i vores center omfatte op til 100 deltagere.

Deltagere med Fild vil blive fulgt op i 1 år efter rekruttering, herunder kliniske og lungefunktionstest på mindst hver 6. måned, eller hyppigere, i henhold til behandlende læge. Indsamlede data vil omfatte deltagernes demografi og antropometrik, familiehistorie og personlig medicinsk historie, resultater af lungefunktionstest, thoraxafbildning og histopatologiske mønstre, kliniske diagnoser af FILD (ifølge en multidisciplinær teamdiskussion), behandling og resultat.

Målte variabler

Indsamlede data vil omfatte (se vedhæftet Excel -fildatablad):

• Alder
• Køn
• Etnisk gruppe
• Fødested
• Højde, vægt, BMI
• Familiehistorie
• Rygningshistorie
• Bopæl
• Besættelse
• Tidligere medicinsk historie, co-morbiditeter og medicin
• Relevante eksponeringer
• ILD -diagnose
• Specifikke ILD -terapier
• Kliniske fund, herunder fysisk undersøgelse, laboratorieundersøgelser, lungefunktionstest, billeddannelse, ekkokardiografi, lungebiopsi -diagnose, bronchoalveolær lavageforskel
• Hospitaliseringer
• Diagnose af lungekræft eller anden malignitet
• Resultater, herunder årlig tilbagegang af lungefunktionstest, forværring af symptomer, forværring af CT -tegn på lungefibrose, lungetransplantation og død

LTL -måling Foruden kliniske data indsamles blodprøver for at måle LTL ved hjælp af "Gold Standard" Telomer Restriction Fragment (TRF) -analysemetoden. Kort sagt fordøjes genomisk DNA (2-5 ug) natten over ved 37 ° C med Hinfi-restriktionsendonuklease. Fragmenter adskilles på en agarosegel, overført til en Hybond N+ -membran. Membranen hybridiseres over natten ved 50 ° C med en 5 'slutmærket (AACCCT) 3 oligonukleotidprobe og med stigeprobe på 1KB-stige. Efter membranvask udsættes membranen for phosphoimager. Den gennemsnitlige telomerlængde beregnes af computerprogrammet Telotool [19-20]. TRF -analyse vil blive udført på laboratoriet for prof. Yehuda Tzfati ved det hebraiske universitet, som er meget erfaren inden for telomerebiologi og i telomerlængdeanalyse. Blodprøver tages en gang fra hver deltager. Som beskrevet ovenfor for LTL -måling udføres ingen genetisk sekventering som en del af denne undersøgelse.

Beregning af prøvestørrelse, hvis man antager, at 50% og 20% ​​af deltagerne i den familiære fild og sporadiske fild vil have en kort LTL, kræves en prøvestørrelse på 87 patienter (29 familiære og 58 sporadiske fild) for at detektere signifikante forskelle i proportioner af individer med kort LTL med en alpha -fejlrate på 0,05 og 80% effekt.

Den foreslåede undersøgelse vil kræve godkendelse af lokale institutionelle gennemgangsbestyrelser og Helsinki -udvalg i både Medical Center. Enkeltpersoner vil give informeret samtykke inden deltagelse i undersøgelsen.

Inkluderingskriterier

1. Voksne emner i alderen ≥18 år gammel
2. I stand og villig til at give informeret samtykke til at deltage i undersøgelsen
3. Lungefibrose tydeligt på brystet CT (tegn på honningkage og/eller trækkraft bronchiectasis) [17]
4. Personer, der opfylder kriterier 1 og 2, men uden bevis for kronisk lungesygdom vil tjene som kontrol med kontroller.

1. Emner med sarkoidose som etiologi for FILD 2. Emner, der havde gennemgået lungetransplantation 3. Gravide kvinder

Sammenligning af statistisk analyse mellem grupper (dvs. familiemæssig vs sporadisk fild, patienter med VS uden kort LTL) vil blive udført ved hjælp af Chi-square-test, Mann-Whitney-test eller studerendes t-test, ifølge målte variabler. Korrelationer vurderes ved at beregne Pearsons eller Spearmans koefficienter, hvor det er relevant. Evaluering af prediktorer for kort LTL og af sygdomsprogression vil blive analyseret ved hjælp af univariate og multivariat logistiske regressionsanalysemodeller.