Hurtig måling af adenosin hos synkopepatienter (BlotSpot)

Begrundelse og formål Indtil nu har en barriere for den udbredte evaluering af adenosin i klinisk praksis været vanskeligheden ved at opnå hurtige pålidelige mål. På grund af dets korte halveringstid i blodet er adenosin faktisk ikke let at prøve og måle. På tidspunktet for venepunktur skal der anvendes en stopopløsning - ikke kommercielt tilgængelig - for at hæmme nedbrydningen af ​​adenosin i kropsvæsken. Efter plasmadeproteinisering vurderes adenosinkoncentrationen ved hjælp af højtydende væskekromatografi.

Der er for nylig udviklet en hurtig metode, som består i at måle adenosinkoncentration i fuldblod i stedet for plasma ved hjælp af massespektrometri (LC-MS/MS). Kort fortalt opsamles fuldblod efter fingerpunktering, og en dråbe afsættes på et klatpapir (Whatman). Efter ekstraktion af adenosin ved hjælp af en blanding bestående af methanol og intern standard måles dets koncentration ved LC-MS/MS. Denne metode er hurtig, godt accepteret af patienten, ikke dyr og let replikerbar. Sammenligning mellem de to ovennævnte metoder hos 20 raske forsøgspersoner og hos patienter med vasovagal synkope har vist en acceptabel korrelation med en r=0,65 og p<0,01. Den gennemsnitlige adenosinkoncentration var signifikant højere hos patienter med vasovagal synkope end hos kontroller (3,1 µM versus 0,60 µM, p<0,001). Ovenstående resultater skal dog replikeres i en større prøve af patienter og kontroller, før blot papirmetoden til måling af adenosin kan erstatte standardmetoden.

I denne undersøgelse ønsker vi at vurdere adenosinplasmaniveauer i en større uselekteret kohorte af patienter, der er ramt af ikke-kardial synkope og at sammenligne resultaterne med raske kontroller.

Studiedesign Vi ønsker at vurdere den hurtige metode til adenosindosering i fuldblod hos patienter med synkope og i kontroller. Undersøgelsen vil blive udført på patienter henvist til Istituto Auxologico Italiano. Blodprøven vil blive sendt til Laboratory of Biochemistry, Timone Hospital 264 Rue Saint-Pierre, 13385 Marseille, Frankrig til analyse. kriterier i ESC-retningslinjer) efter udelukkelse af konkurrerende diagnoser.

Der er synkopepatienter underopdelt i 3 foruddefinerede undergrupper:

• Undergruppe A) Patienter uden prodromer eller meget korte prodromer (5 sek), normalt hjerte og normalt EKG
• Undergruppe B) Patienter med typiske vasovagale træk (ortostatiske eller følelsesmæssige triggere, lange prodromer med tegn og symptomer på autonom aktivering, dvs. kvalme, svedtendens, svimmelhed, bleghed)
• Undergruppe C) Patienter, der ikke tilhører nogen af ​​ovenstående undergrupper.

Ingen synkopegruppe: 1) Patienter uden en historie med synkope, henvist til Auxologico af andre årsager; disse patienter har fravær af alvorlig strukturel hjertesygdom og andre komorbiditeter. 2) Sunde frivillige udvalgt blandt Auxologicos personale. Udvælgelsen af ​​disse patienter vil blive foretaget for at matche dem til synkope tilfælde efter alder og køn.

Indsamling af blodprøver Fuldblod opsamles ved hjælp af fingerpunktering efterfulgt af deponering af en dråbe blod (20 μL) ved hjælp af finnpipette, på et duppepapir (Whatman 903 protein saver cards™) og tørret natten over ved stuetemperatur for at opnå tørret blodplet (DBS) ).

Blodprøveekstraktion Seks millimeter tørret blodplet (DBS) skæres ud efterfulgt af ekstraktion med blanding bestående af methanol (400 μl) og intern standard (50 μl) i 2 mL mikrofugerør og blandes derefter i 90 minutter ved 45°C. Efter ekstraktion overføres en alikvot på 350 μL til et nyt 2-ml safe-lock-rør og inddampes til tørhed ved 60°C under nitrogen, 150 μl 0,1% myresyre i vand tilsættes og vortexes hurtigt før overførsel til en HPLC hætteglas til autoprøveudtager.

Adenosin-dosering Efter ekstraktion af adenosin ved hjælp af en blanding bestående af methanol og intern standard måles dets koncentration ved LC-MS/MS.

Prøver analyseres ved hjælp af et Shimadzu UFLC XR-system bestående af to LC-20ADXR binære pumper, en DGU-20A5R vakuumafgasser og en CT0-20AC termostateret kolonneovn og en SIL-20ACXR afkølet autoprøveudtager (Shimadzu, Marne la Vallee, Frankrig) . LC-systemet var forbundet med et ABSciex 4500 tredobbelt kvadrupol massespektrometer (Les Ulis, Frankrig), der arbejdede med en elektrospray-ioniseringskilde (ESI) under anvendelse af nitrogen (renhed: 99,99%). Ti mikroliter af den ekstraherede prøve blev injiceret på en 2,1 × 100 mm, 3 μm AtlantisR T3-søjle, Waters (Guyancourt, Frankrig). Den mobile startfase bestod af 3 % methanol og 97 % forsuret vand (0,1 % myresyre) med en strømning på 0,7 ml/min i 3,5 min. Derefter blev gradienten af ​​methanol øget til 30% i 3 min. Søjlen blev re-ækvilibreret i 2 minutter til startbetingelser.