晕厥患者腺苷的快速测定 (BlotSpot)

基本原理和目标 直到现在，在临床实践中广泛评估腺苷的障碍一直是难以获得快速可靠的措施。 事实上，由于其在血液中的半衰期短，腺苷不易取样和测量。 在静脉穿刺时，必须使用一种非市售的终止液，以抑制体液中腺苷的降解。 血浆脱蛋白后，通过高效液相色谱法评估腺苷浓度。

最近开发了一种快速方法，该方法包括通过质谱法 (LC-MS/MS) 测量全血而非血浆中的腺苷浓度。 简而言之，在手指穿刺后收集全血，并将一滴血液滴在吸墨纸 (Whatman) 上。 在用甲醇和内标组成的混合物提取腺苷后，通过 LC-MS/MS 测量其浓度。 这种方法快速，患者接受度高，费用不高，易于复制。 上述两种方法在 20 名健康受试者和血管迷走性晕厥患者中的比较显示出可接受的相关性，r=0.65，p<0.01。 血管迷走性晕厥患者的平均腺苷浓度明显高于对照组（3.1 µM 对比 0.60 µM，p<0.001）。 然而，在腺苷测量的印迹纸方法可以取代标准方法之前，需要在更大的患者和对照样本中复制上述结果。

在这项研究中，我们想要评估更大的未经选择的受非心源性晕厥影响的患者队列中的腺苷血浆水平，并将结果与​​健康对照进行比较。

研究设计 我们想要评估晕厥患者和对照组全血腺苷剂量的快速方法。 该研究将在转诊至 Istituto Auxologico Italiano 的患者中进行。 血样将被运送到法国马赛 264 Rue Saint-Pierre, 13385 Marseille, Timon Hospital 的生物化学实验室进行分析 晕厥组：被转诊至 Auxologico 晕厥病房并诊断可能或某些反射性晕厥（I 类诊断）的患者ESC 指南的标准）排除竞争诊断后。

晕厥患者被细分为 3 个预定义的亚组：

• 亚组 A) 无前驱症状或前驱症状非常短（5 秒）、心脏和心电图正常的患者
• 亚组 B) 具有典型血管迷走神经特征的患者（体位性或情绪触发因素、具有自主神经激活体征和症状的长前驱症状，即恶心、出汗、头晕、苍白）
• 亚组 C) 不属于上述任何亚组的患者。

无晕厥组： 1）无晕厥病史，因其他原因转诊至Auxologico的患者；这些患者没有严重的结构性心脏病和其他合并症。 2）从Auxologico人员中选出健康志愿者。 这些患者的选择将根据年龄和性别与晕厥病例相匹配。

血液样本收集 使用手指穿刺收集全血，然后使用吸管移液器将一滴血 (20 μL) 滴在吸水纸 (Whatman 903 protein saver cards™) 上，并在室温下干燥过夜以获得干血斑 (DBS) ).

血样提取 切下 6 毫米的干血斑 (DBS)，然后在 2 mL 微量离心管中用由甲醇 (400 μl) 和内标 (50 μl) 组成的混合物提取，然后在 45°C 下混合 90 分钟。 提取后，将 350 μL 的等分试样转移到新的 2 mL 安全锁管中，并在 60°C 下在氮气下蒸发至干燥，加入 150 μl 的 0.1% 甲酸水溶液并快速涡旋，然后转移到 HPLC 中自动取样器瓶。

腺苷剂量 用甲醇和内标组成的混合物提取腺苷后，通过 LC-MS/MS 测量其浓度。

使用 Shimadzu UFLC XR 系统分析样品，该系统由两个 LC-20ADXR 二元泵、一个 DGU-20A5R 真空脱气机、一个 CT0-20AC 恒温柱温箱和一个 SIL-20ACXR 冷却自动进样器（Shimadzu，Marne la Vallee，France）组成. LC 系统与 ABSciex 4500 三重四极质谱仪（Les Ulis，法国）连接，使用氮气（纯度：99.99%）使用电喷雾电离源 (ESI)。 将 10 微升提取样品注入 2.1 × 100 mm、3 μm AtlantisR T3 色谱柱，Waters（Guyancourt，法国）。 起始流动相由 3% 甲醇和 97% 酸化水（0.1% 甲酸）组成，流速为 0.7 毫升/分钟，持续 3.5 分钟。 然后，将甲醇梯度增加到 30%，持续 3 分钟。 将色谱柱重新平衡 2 分钟至起始条件。