el Estudio de Colaboración Ósea con Diabéticos Tipo UNO (TONICS)

Métodos El proyecto consiste en un estudio transversal de casos y controles de histología ósea, densidad y fuerza en pacientes adultos con diabetes tipo 1 y estudios in vitro del metabolismo de las células óseas, incluida la función mitocondrial en pacientes con diabetes tipo 1.

Participantes 111 pacientes masculinos y femeninos de 18 a 80 años de edad con DT1 de inicio temprano (diagnosticada antes de los 18 años) y 37 sujetos de control sanos de edad, sexo e IMC emparejados. De esos 24 casos y 12 controles son necesarios para estudios sobre biopsias óseas y aspirados de médula ósea.

Investigaciones Datos clínicos de registros médicos digitales, encuesta y entrevista: niveles de péptido c, historial médico que incluye información sobre complicaciones relacionadas con la diabetes, historial de fracturas y medicación concomitante.

Muestras de sangre: hemoglobina A1c, calcio ionizado (Ca2+), hormona paratiroidea (PTH), 25-hidroxicolecalciferol, hemoglobina, leucocitos, plaquetas, creatinina, tasa de filtración glomerular estimada (TFGe), fosfatasa alcalina, alanina transaminasa, albúmina, índice internacional normalizado de protrombina (USD). Y posiblemente los anticuerpos relacionados con el péptido C y la DT1 en sujetos con DT1, que estos resultados no se encuentren en los registros médicos. Niveles séricos en ayunas de marcadores bioquímicos de resorción ósea, formación ósea e inhibición de la formación ósea: telopéptido C reticulado de colágeno tipo I (CTX), péptido N-terminal de procolágeno-1 (P1NP), esclerostina, niveles en ayunas de miARN circulantes informados asociado con el recambio óseo se medirá mediante PCR cuantitativa (qPCR) mediante el uso de un instrumento LightCycler 480 (se enviará a medición en Viena (Dr. M Hackl, TamiRNA, Viena, Austria)).

Para los participantes que hayan aceptado que se les realice una biopsia ósea y un aspirado de médula, mediremos la hemoglobina, las plaquetas, el INR, el tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) 5 días antes de la biopsia. De estos sujetos, también obtendremos sangre completa para: Investigaciones in vivo sobre monocitos (osteoclastogénesis) y Ensayos de resorción.

La exploración de absorciometría de rayos X de energía dual (DXA) proporcionará DMO en la cadera y la columna vertebral, así como la puntuación del hueso trabecular (TBS) y la exploración de todo el cuerpo para medir la masa muscular HR-pQCT en el radio distal y la tibia. obtendrá: Geometría ósea, DMO volumétrica, Microarquitectura ósea, Resistencia ósea.

mediante microindentación con OsteoProbe®, mediremos el índice de resistencia del material (BMSi), una medida de la dureza y rigidez del hueso.

Biopsia ósea: tras el marcaje óseo con tetraciclina oral, se realizará una biopsia ósea transilíaca de 8 mm. Los especímenes óseos se incrustarán en plástico y se utilizarán para

• Histomorfometría ósea (parámetros estructurales, estáticos y dinámicos)
• Análisis de elementos microfinitos (análisis de resistencia)
• Mediciones de ultra alta resolución en osteocitos (número, densidad y conexiones)
• Inmunohistoquímica e imagen para factores de acoplamiento y expresión génica. El tejido óseo crioseccionado se utilizará para realizar transcriptómica espacial para evaluar la actividad génica en loci específicos del hueso.

Se asegurará un aspirado de médula ósea de 10-15 ml y se utilizará para estudiar las células óseas:

• Métodos de citometría de flujo en estudios in vitro sobre células madre mesenquimales (MSC) de aspirados de médula ósea: expresión, diferenciación y proliferación en osteoblastos (OB) y adipocitos.
• Se utilizarán monocitos de sangre periférica para estudiar la osteoclastogénesis y la actividad de reabsorción ósea
• Estudios in vitro y proteómica de la comunicación de células óseas en cocultivos de OB y ​​osteoclastos (OC).
• Se realizará la secuenciación del ARN de una sola célula para demostrar las firmas genéticas de MSC, OB y ​​OC en pacientes con DT1 y controles.
• Determinación del perfil metabólico (utilizando el analizador Seahorse Xfe96) y medición de la captación de glucosa de MSC, OB y ​​OC en pacientes con DT1 y controles
• Imágenes de la morfología mitocondrial usando MitoTracker.
• Hibridación in situ e inmunohistoquímica Resultado

Diferencias entre los pacientes con DT1 de inicio temprano y los controles sanos de la misma edad en los siguientes parámetros y la relación entre estos parámetros en pacientes con DT1:

• FENOTIPO ÓSEO: Densidad ósea, geometría, arquitectura, histomorfometría, mediciones de ultra alta resolución en osteocitos y análisis de elementos finitos (FEA): fuerza calculada obtenida de escaneos DXA, escaneos HRpQCT y de biopsias óseas en un subgrupo de sujetos y Dureza ósea ( Bone Score), medida por microindentación.
• METABOLISMO ÓSEO: niveles de skinAGE y niveles de marcadores bioquímicos de recambio óseo y miARN circulantes que se sabe que están relacionados con el recambio óseo, medidas dinámicas de la histomorfometría ósea. Inmunohistoquímica e imagen en biopsias óseas.

Los análisis in vitro y otras investigaciones sobre las células producirán resultados sobre la diferenciación, la proliferación y la comunicación y el acoplamiento intercelulares de las células óseas, las firmas genéticas de las células óseas y los perfiles metabólicos.

• VALORES DE PREDICCIÓN de la variabilidad de la frecuencia cardíaca (evaluación de Can con Vagus(TM), autofluorescencia de la piel (mediante AGE Reader de Diagnoptics) y masa muscular (mediante exploración DXA de todo el cuerpo) y - fuerza (mediante fuerza de prensión manual medida con dinamómetro) Los datos se resumirse utilizando razones de probabilidad, análisis de tendencias y análisis de regresión, ajustando los posibles factores de confusión. Se aplicarán las pruebas t de Student y Chi cuadrado para la prueba de comparación de grupos. Los análisis estadísticos se realizarán en Excel® y STATA®.

Cálculo de la potencia El número total de individuos que se reclutarán se basa en un estudio previo de resistencia ósea en pacientes con diabetes tipo 2 (mismo método) que muestra un índice de resistencia del material óseo (BMSi) de 78,2 (SD 7,5) en los controles y 74, 6 (DE 7,6) en pacientes con DT2. Con 111 pacientes con DT1 y 37 controles, el poder del estudio será del 80 % para demostrar una diferencia en la fuerza ósea de 4.

El número de participantes necesarios para los estudios sobre el metabolismo celular se basa en una diferencia esperada entre grupos en la respiración basal del 25 % cuando se utiliza el analizador de flujo extracelular Seahorse. (La diferencia del 25 % es similar a la observada en otro tipo de células en pacientes con y sin diabetes tipo 1 en un estudio en curso en la Universidad de Aarhus).

los datos de origen estarán disponibles en los escáneres y, en cuanto a otros exámenes, las capturas de pantalla/fotografías de las ventanas de resultados se guardan en la base de datos codificada, donde los resultados también se escriben a mano.

Se realizará un seguimiento local. Los médicos e investigadores involucrados siguen los procedimientos operativos estándar para los exámenes.