l'étude de collaboration sur les os diabétiques de type ONE (TONICS)

Méthodes Le projet consiste en une étude cas-témoin transversale sur l'histologie osseuse, la densité et la force chez des patients adultes atteints de DT1 et des études in vitro du métabolisme des cellules osseuses, y compris la fonction mitochondriale dans le DT1.

Participants 111 hommes et femmes âgés de 18 à 80 ans atteints d'un DT1 précoce (diagnostiqué avant l'âge de 18 ans) et 37 sujets témoins en bonne santé appariés selon l'âge, le sexe et l'IMC. De ces 24 cas et 12 témoins sont nécessaires pour des études sur les biopsies osseuses et les aspirations de moelle osseuse.

Enquêtes Données cliniques issues de dossiers médicaux numériques, d'enquêtes et d'entretiens : niveaux de peptide c, antécédents médicaux, y compris des informations sur les complications liées au diabète, les antécédents de fracture et les médicaments concomitants.

Échantillons sanguins : hémoglobine A1c, calcium ionisé (Ca2+), hormone parathyroïdienne (PTH), 25-hydroxycholécalciférol, hémoglobuline, leucocytes, plaquettes, créatinine, débit de filtration glomérulaire estimé (DFGe), phosphatase alcaline, alanine transaminase, albumine, rapport de prothrombine normalisé international (INR). Et éventuellement des anticorps anti-peptide C et anti-DT1 chez les sujets DT1, ces résultats ne se retrouveront peut-être pas dans les dossiers médicaux. Niveaux sériques à jeun des marqueurs biochimiques de la résorption osseuse, de la formation osseuse et de l'inhibition de la formation osseuse : télopeptide C réticulé du collagène de type I (CTX), peptide N-terminal du procollagène-1 (P1NP), sclérostine, niveaux à jeun des miARN circulants rapportés associés au remodelage osseux seront mesurés par PCR quantitative (qPCR) à l'aide d'un instrument LightCycler 480 (sera envoyé à la mesure à Vienne (Dr M Hackl, TamiRNA, Vienne, Autriche)).

Pour les participants qui ont accepté de subir une biopsie osseuse et une aspiration de moelle, nous mesurerons l'hémoglobuline, les plaquettes, l'INR, le temps de thromboplastine partielle activée (APTT) 5 jours avant la biopsie. De ces sujets, nous obtiendrons également du sang pur pour : Des investigations in vivo sur des monocytes (ostéoclastogenèse) et des tests de résorption.

L'analyse d'absorptiométrie à rayons X à double énergie (DXA) fournira une DMO à la hanche et à la colonne vertébrale ainsi qu'un score osseux trabéculaire (TBS) et une analyse du corps entier pour une mesure de la masse musculaire HR-pQCT au rayon distal et au tibia, nous obtiendra : Géométrie osseuse, DMO volumétrique, Microarchitecture osseuse, Résistance osseuse.

par microindentation à l'aide d'OsteoProbe®, nous mesurerons l'indice de résistance du matériau (BMSi), une mesure de la dureté et de la rigidité osseuse.

Biopsie osseuse : suite à un marquage osseux à la tétracycline orale, une biopsie osseuse trans iliaque de 8 mm sera réalisée. Les spécimens osseux seront incorporés dans du plastique et utilisés pour

• Histomorphométrie osseuse (paramètres structuraux, statiques et dynamiques)
• Micro analyse par éléments finis (analyse de la résistance)
• Mesures ultra-haute résolution sur les ostéocytes (nombre, densité et connexions)
• Immunohistochimie et imagerie pour les facteurs de couplage et l'expression des gènes. Le tissu osseux cryosectionné sera utilisé pour effectuer une transcriptomique spatiale afin d'évaluer l'activité des gènes dans des loci spécifiques à l'os.

Un aspirat de moelle osseuse 10-15 ml sera sécurisé et utilisé pour étudier les cellules osseuses :

• Méthodes de cytométrie en flux sur des études in vitro sur des cellules souches mésenchymateuses (CSM) d'aspirats de moelle osseuse : expression, différenciation et prolifération en ostéoblastes (OB) et en adipocytes.
• Les monocytes du sang périphérique seront utilisés pour étudier l'ostéoclastogenèse et l'activité de résorption osseuse
• Études in vitro et protéomique de la communication cellulaire osseuse dans des co-cultures d'OBs et d'ostéoclastes (OCs).
• Un séquençage d'ARN unicellulaire sera effectué pour démontrer les signatures génétiques des MSC, OB et OC chez les patients DT1 et les témoins.
• Détermination du profil métabolique (à l'aide de l'analyseur Seahorse Xfe96) et mesure de l'absorption de glucose des MSC, OB et OC chez les patients DT1 et les témoins
• Imagerie de la morphologie mitochondriale à l'aide de MitoTracker.
• Hybridation in situ et immunohistochimie

Différences entre les patients atteints de DT1 à début précoce et les témoins sains appariés selon l'âge dans les paramètres suivants et la relation entre ces paramètres chez les patients atteints de DT1 :

• PHÉNOTYPE OSSEUX : Densité osseuse, géométrie, architecture, histomorphométrie, mesures ultra-haute résolution sur les ostéocytes et analyse par éléments finis (FEA) - force calculée obtenue à partir de scans DXA, scans HRpQCT et de biopsies osseuses dans un sous-groupe de sujets et dureté osseuse ( Bone Score), mesuré par microindentation.
• MÉTABOLISME OSSEUX : Niveaux de skinAGEs et niveaux de marqueurs biochimiques du renouvellement osseux et de miARN circulants connus pour être liés au renouvellement osseux, mesures dynamiques de l'histomorphométrie osseuse. Immunohistochimie et -imagerie sur biopsies osseuses.

Des analyses in vitro et d'autres investigations sur les cellules produiront des résultats sur la différenciation, la prolifération et la communication et le couplage intercellulaires des cellules osseuses, les signatures génétiques des cellules osseuses et les profils métaboliques.

• VALEURS DE PRÉDICTION de la variabilité de la fréquence cardiaque (évaluation Can avec Vagus(TM), de l'autofluorescence cutanée (par AGE Reader de Diagnoptics) et de la masse musculaire (par DXA corps entier) et - de la force (par la force de préhension mesurée par un dynamomètre). être résumées à l'aide des rapports de cotes, de l'analyse des tendances et de l'analyse de régression, en ajustant les facteurs de confusion potentiels. Le test t des étudiants et les tests du chi carré seront appliqués pour le test de comparaison de groupe. Les analyses statistiques seront effectuées dans Excel® et STATA®.

Calcul de la puissance Le nombre total d'individus qui seront recrutés est basé sur une étude précédente de la résistance osseuse chez les patients DT2 (même méthode) montrant un indice de résistance du matériau osseux (BMSi) de 78,2 (SD 7,5) chez les témoins et de 74, 6 (SD 7,6) chez les patients DT2. Avec 111 patients DT1 et 37 témoins, la puissance de l'étude sera de 80% pour démontrer une différence de résistance osseuse de 4.

Le nombre de participants nécessaires pour les études sur le métabolisme cellulaire est basé sur une différence attendue entre les groupes dans la respiration basale de 25 % lors de l'utilisation de l'analyseur de flux extracellulaire Seahorse. (La différence de 25 % est similaire à celle observée dans un autre type de cellule chez les patients DT1 et non DT1 dans une étude en cours à l'Université d'Aarhus).

les données sources seront disponibles sur les scanners et comme pour les autres examens, des captures d'écran/photographies des fenêtres de résultats sont enregistrées dans la base de données codée, où les résultats sont également saisis à la main.

Une surveillance locale sera effectuée. Les procédures opérationnelles standard pour les examens sont suivies par les cliniciens et les enquêteurs impliqués.