Le moment de l'effet de la consommation du repas principal sur le microbiote intestinal et l'hôte (TIMC)

Cette étude sera un ECR croisé ouvert chez des adultes en bonne santé. Les participants adultes en bonne santé (>18 ans) seront recrutés dans la communauté au moyen d'un dépliant publicitaire (voir document d'accompagnement associé - "Dépliant publicitaire") et du bouche à oreille. Le chercheur organisera une rencontre avec les personnes exprimant un intérêt pour l'étude. Le chercheur recueillera des renseignements démographiques (p. âge et sexe) et demander aux sujets s'ils souffrent d'une maladie aiguë ou chronique (définie comme une maladie qui nécessite des visites régulières dans les services de santé) (voir document justificatif associé - "Questionnaire de santé"). S'ils souffrent d'une maladie chronique, ils seront exclus. D'autres critères d'exclusion comprennent des antécédents de chirurgie intestinale majeure, un poids instable, l'utilisation d'antibiotiques ou de stéroïdes au cours des 3 derniers mois. Les participants seront informés de l'étude à Human Nutrition, New Lister Building, Glasgow Royal Infirmary ou dans les zones sociales du campus principal de l'Université de Glasgow (par ex. Gilchrist). Aucun enfant ne sera recruté. Les sujets qui ont exprimé un intérêt pour l'étude mais qui ne sont pas aptes à participer seront reconnus et recevront une explication quant à la raison pour laquelle ils ont été exclus.

Suite à un consentement écrit éclairé, les participants seront répartis au hasard dans des groupes d'intervention à l'aide de la fonction "rand()" de MS Excel. Les femmes commenceront leur intervention sur la même phase de leur cycle menstruel pour éviter l'effet des changements hormonaux sur les résultats de l'étude.

Interventions diététiques : Les participants seront invités à entreprendre deux régimes expérimentaux. Les deux interventions diététiques sont identiques, la seule différence étant le moment de la consommation du repas principal (dîner et déjeuner). Les participants suivront chaque régime pendant une période d'une semaine avec une période de sevrage de trois semaines entre les deux interventions. La période de lavage vise à ramener les caractéristiques du microbiote intestinal à des niveaux de référence. Le régime fournira les besoins énergétiques moyens des participants (ministère de la Santé) et vise à maintenir le poids des participants stable pendant la période d'étude. Tous les aspects diététiques de l'étude seront conçus et supervisés par des diététistes/nutritionnistes qualifiés, membres de l'équipe de recherche. Les participants recevront une liste de repas et de collations parmi lesquels choisir (voir le document d'appui associé - "Préférences de la liste d'aliments"). Tous les repas seront fournis gratuitement aux participants. Les repas seront commandés en ligne par les chercheurs, en utilisant le hub de l'Université de Glasgow, et seront livrés à la résidence des participants par le personnel du supermarché. Le poids et la taille seront mesurés.

Semaine 1 Les participants suivront un régime structuré contenant des repas de leur choix pendant une semaine. Les participants sélectionneront ces repas dans une liste que le chercheur leur fournira. L'heure du repas sera précisée et les participants devront terminer leur repas en 25±5 minutes. Les participants recevront des instructions écrites sur la façon de suivre le régime (voir le document de support associé - « Fiche d'instructions » et « Calendrier d'étude du participant »). Les participants fourniront tous les échantillons fécaux produits pendant les jours allant de midi du jour 5 à midi du jour 8. Des échantillons de sang (6 ml) et d'urine à jeun seront prélevés le lendemain de la fin de l'intervention de la semaine 1 (c.-à-d. jour 8). Ceux-ci seront collectés au laboratoire de nutrition humaine, au New Lister Building, Glasgow Royal Infirmary. Les mesures de poids et de taille seront répétées.

Semaines 2, 3 et 4 Pendant la période de sevrage, les participants suivront leur régime alimentaire habituel et aucune intervention de recherche n'aura lieu.

Semaine 5 Il s'agira de répliquer l'intervention diététique et la collecte d'échantillons à la semaine 1. La seule différence est que le déjeuner de la semaine 1 sera remplacé par des dîners de la semaine 5.

Conformité au régime : au cours des deux régimes expérimentaux, la conformité sera surveillée en demandant aux participants de remplir une « liste de contrôle » avec leur régime prescrit (voir le document de soutien associé : « Questionnaire de conformité »). Un appel ou un SMS de rappel doux sera envoyé aux participants tous les 3 jours pour augmenter la motivation et la conformité des participants aux régimes.

Prélèvement et analyse d'échantillons : des échantillons frais de matières fécales et d'urine seront prélevés comme décrit ci-dessus. Les principales mesures des résultats seront : a) les modifications de la composition du microbiote intestinal sur la base du séquençage des amplicons du gène ARNr 16S et de la métagénomique du fusil de chasse, b) des modifications de la capacité fonctionnelle bactérienne (métagénomique du fusil de chasse du génome entier) et de la métabolomique urinaire/fécale, c) des modifications de la bactérie ciblée métabolites (acides gras à chaîne courte, sulfure, ammoniac, lactate, succinate, éthanol). Les lipides sanguins, les hormones de l'appétit, les adipokines et les marqueurs inflammatoires seront mesurés à l'aide de kits ELISA. Des échantillons de selles seront prélevés au domicile des participants ou livrés au laboratoire par taxi prépayé.

Analyse détaillée : l'ADN génomique sera extrait des échantillons fécaux à l'aide de tests développés en interne. La pureté de l'échantillon sera testée sur un gel d'agarose à 1 % et la concentration d'acides nucléiques sera mesurée avec Nanodrop. L'amplification de la région V4 du gène de l'ARNr 16S sera réalisée en interne à l'aide de la PCR et du Mastermix haute fidélité et des codes à barres Golay. L'échantillon regroupé sera envoyé à l'Université de Birmingham pour un séquençage de 250 paires de bases sur MiSeq. Les données seront analysées par le Dr Gerasimidis PDRA en bioinfomatique. De même, des mesures de SCFA seront effectuées dans des extraits d'éther acidifiés à l'aide d'une chromatographie en phase gazeuse équipée d'un détecteur FID. La quantification sera effectuée par rapport aux normes authentiques. D'autres métabolites bactériens et marqueurs cardiovasculaires seront dosés avec des dosages colorimétriques et enzymatiques et des kits ELISA disponibles dans le commerce, comme ceux-ci ont été rapportés précédemment. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28318688 et https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26119811

Calcul de puissance : Un calcul de puissance précis est impossible à calculer en raison du manque de données pilotes. Sur la base d'une étude similaire pour une différence moyenne de 5,4 μmol/g d'acétate fécal (SD=5) et une puissance de 80 %, 20 participants sont requis. Le calcul de la puissance sera révisé après le recrutement et l'achèvement de l'étude des 7 premiers participants.