Lattoferrina contro placebo nei pazienti in terapia intensiva (RCT)

1. introduzione

   1.1. Molecola di lattoferrina

   La lattoferrina (LF) è una proteina del latte che lega il ferro, come suggerisce il nome (lacto si riferisce alle proteine ​​del latte e ferrina significa ferro. LF aiuta a modulare i livelli di ferro nel corpo [1-3]. LF è una parte delle proteine ​​del siero di latte. Il colostro (il primo latte prodotto dalle madri dopo il parto) ha sette volte più LF del latte maturo [4].

   LF si trova ovunque nel corpo che necessita di immunità contro i microbi. si trova in molti organi come reni, polmoni, cistifellea, pancreas, intestino, fegato, prostata, e anche nei fluidi corporei come saliva, lacrime, sperma, liquido cerebrospinale, urina, secrezioni bronchiali, secrezioni vaginali, liquido sinoviale, cordone ombelicale sangue, plasma sanguigno e cellule immunitarie [1,2,4].

   LF ha molti effetti benefici nel corpo. Ha effetto antiossidante, immunomodulatore, antinfiammatorio, antimicrobico e antivirale [5,6] come mostrato nella figura 1 [7].

   Figura 1: diversi effetti della lattoferrina [7]

   1.2. Lattoferrina come molecola antiossidante

   Il corpo è influenzato da diversi fattori come agenti patogeni, inquinanti ambientali e tossine. Questo porta allo sviluppo e all'accumulo di specie reattive dell'ossigeno (ROS) nel corpo che è noto come stress ossidativo. I ROS possono causare molte malattie come il cancro; quindi, l'effetto antiossidante prodotto da diverse molecole come LF può fermare il danno indotto dai ROS [8,9]. L'obiettivo è mantenere l'equilibrio tra molecola antiossidante e ROS. LF è un tipo di molecole antiossidanti che potenziano l'attività delle vie antiossidanti endogene [10].

   LF agisce come agente neuroprotettivo nella malattia di Parkinson e nella malattia di Alzheimer [11-13]. Protegge anche dall'osteoporosi mediante l'inibizione dell'attività degli osteoblasti e il suo effetto antiossidante [14,15].

   LF migliora il metabolismo del glucosio nei pazienti con diabete mellito di tipo 2 attraverso il potenziamento della risposta insulino-mediante [16-19] e previene l'obesità dovuta allo squilibrio nel metabolismo del grasso corporeo [17,20]. Riduce anche la pressione sanguigna nell'ipertensione [21].

   1.3. Lattoferrina come molecola antipatogena e immunomodulante

   LF ha attività antibatterica contro i batteri Gram-positivi e Gram-negativi, poiché uccide i patogeni, previene la formazione di biofilm da parte di Staphylococcus aureus o Pseudomonas aeruginosa [22,23]. LF previene anche le infezioni del tratto gastrointestinale virale, batterico, fungino e protozoico [22,24]. LF migliora il trattamento dell'infezione gastrica da Helicobacter pylori [25]. LF protegge anche da endotossiemia, batteriemia, sepsi ed enterite necrotica dopo resezione parziale dell'intestino [26] e nei neonati [27-29].

   LF agisce come agente antibatterico uccidendo le cellule batteriche, modulando il sistema immunitario. Inoltre, LF si lega al ferro portando alla sua assenza nei media causando l'inibizione della crescita batterica, che protegge il corpo dalle infezioni [30].

   LF possiede un'attività antivirale e potenzia l'effetto dei farmaci antivirali [31].

   LF agisce come agente antivirale bloccando i recettori di superficie del patogeno e impedendogli di legarsi alla cellula bersaglio, ad esempio legandosi ai recettori dell'enzima di conversione dell'angiotensina II utilizzati dalla sindrome respiratoria acuta grave - coronavirus 2 (SARS-CoV-2) per passare membrana cellulare e quindi inibire l'ingresso del virus nella cellula [32-34].

   LF ha anche un effetto antimicotico contro i dermatofiti e potenzia l'effetto dei farmaci antifungini [35,36]. Inoltre, LF ha un effetto antiparassitario nel trattamento della toxoplasmosi e della malaria [37].

   Ha anche un effetto immunomodulante, stimolando il corpo a sintetizzare citochine e chemochine e accelerando la maturazione delle cellule del sistema immunitario [3,38,39].

   1.4. Lattoferrina come molecola antinfiammatoria

   LF possiede anche attività antinfiammatoria nei disturbi non infettivi come allergie, artrite, cancro [40] e colite infiammatoria [41,42]. LF ha un effetto antinfiammatorio inibendo i ROS per prevenire la perossidazione lipidica mediante chelazione del ferro. LF migliora anche la produzione di citochine anti-infiammatorie (IL-10) e sopprime la produzione di citochine pro-infiammatorie (IL-6, IL-8, IL-1b e fattore di necrosi tumorale (TNF-α)). Inoltre, LF entra nei mastociti e interagisce con le proteasi infiammatorie (chimasi, catepsina G e triptasi) [43].

   La lattoferrina inibisce principalmente la produzione di ROS e l'ulteriore perossidazione lipidica chelando il ferro che è essenziale per la loro produzione, inibendo così la via infiammatoria [44].

   1.5. Lattoferrina per l'anemia dell'infiammazione

   LF tratta i disturbi infiammatori aumentando la produzione di ferroproteine ​​e diminuendo il livello di IL-6 per ridistribuire il ferro endogeno tra sangue e tessuti. Quindi, LF è usato come terapia per l'anemia causata da infiammazione [45-47].

   1.6. Sicurezza dell'uso della lattoferrina

   LF è sicuro per l'uso. La sua sicurezza è dimostrata dalla Food and Drug Administration [48]. Tuttavia, la LF bovina, come ingrediente nel latte vaccino, può causare un'ipersensibilità, quindi l'uso di lattoferrina ha un rischio di reazione allergica ed è controindicato in caso di ipersensibilità alle proteine ​​del latte vaccino e nell'intolleranza al lattosio [49,50]. Altri effetti collaterali di LF sono lievi includono: mal di stomaco, vomito e costipazione [51].

2. Scopo dello studio

   L'obiettivo è studiare l'effetto della lattoferrina sul miglioramento degli esiti clinici nei pazienti in terapia intensiva rispetto al placebo e anche valutarne la sicurezza.

3. Metodi

   3.1. Progettazione dello studio

   La ricerca sarà uno studio clinico controllato randomizzato in doppio cieco per valutare l'efficacia e la sicurezza di un farmaco. La randomizzazione sarà 1:1 e ottenuta da farmacisti clinici indipendenti che lavorano nei reparti di terapia intensiva dell'ospedale. Sia i pazienti che i ricercatori saranno in cieco per l'identificazione del trattamento e dei gruppi placebo. L'assegnazione dei pazienti nei loro gruppi verrà effettuata dopo aver verificato che soddisfi i criteri di inclusione e non soddisfi i criteri di esclusione entro 24 ore dal ricovero in terapia intensiva. Tutti i pazienti riceveranno lo standard di cura al momento del ricovero.

   3.2. Pazienti e popolazioni

   Un campione di 650 pazienti (325 pazienti in entrambi i gruppi A e B) che saranno ricoverati nei reparti di terapia intensiva dell'ospedale universitario di Mansoura sarà utilizzato per rappresentare la popolazione in terapia intensiva.

   3.3. Intervento

   Dosi di LF da 100 a 4500 mg al giorno per le sue indicazioni sono sicure senza tossicità significative [52]. I pazienti saranno randomizzati (1:1) in due gruppi (gruppo A e gruppo B). Una dose di 200 mg per via orale due volte al giorno (400 mg al giorno) mostra miglioramenti nella conta piastrinica, nella conta dei linfociti e nel livello di emoglobina sierica [53].

   Quindi, questa dose sarà scelta in questo studio. Un gruppo riceverà due bustine da 100 mg di lattoferrina per via enterale (per via orale o mediante tubo Ryle) ogni 12 ore (400 mg al giorno) per 28 giorni più lo standard di cura. un altro gruppo riceverà solo lo standard di cura.

   3.4 Analisi statistica e dimensione del campione

   Analisi statistica:

   In questo studio verrà utilizzata la strategia di intenzione di trattare (ITT). Le variabili categoriche saranno presentate come proporzione e percentuale. Le variabili continue saranno presentate come media (deviazione standard) se distribuite normalmente o come mediana (IQR) o (25°-75° percentile) per dati non distribuiti normalmente Il test di Mann-Whitney o il test t saranno utilizzati per confrontare le caratteristiche di base e esiti tra i due gruppi. Nel confronto tra i due gruppi, il test di Mann-Whitney verrà utilizzato per confrontare le proporzioni per i dati non parametrici (nominali o categorici) e per confrontare le mediane per i dati parametrici continui non normalmente distribuiti. Mentre t-test verrà utilizzato solo per confrontare le medie in caso di parametri continui normalmente distribuiti. Verranno quindi testate distribuzioni di dati continui al fine di conoscere il test corretto da utilizzare nel confronto dei dati parametrici tra i due gruppi.

   Gli investigatori riporteranno l'intervallo di confidenza al 95% e il valore P per i nostri test statistici con livello di significatività statistica sarà valore p <0,05.

   Verrà eseguita un'analisi di regressione, se vi sono differenze statisticamente significative tra le caratteristiche basali tra cui età, sesso, numero di comorbilità (DM, ipertensione (HTN), cardiopatia ischemica (IHD), fibrillazione atriale (FA), BPCO) in Al fine di escludere l'effetto di queste variabili confondenti sui risultati dello studio, i ricercatori confronteranno il tasso di mortalità per tutte le cause a 28 giorni, l'incidenza di reazioni di ipersensibilità e la necessità di ventilazione meccanica invasiva (IMV) utilizzando il test di Mann-Whitney. mentre il t-test verrà utilizzato per confrontare il giorno della morte, la durata della necessità di ossigenoterapia e IMV e la durata della degenza in terapia intensiva e tutti i parametri misurati nello studio se saranno distribuiti normalmente, ma se saranno non- normalmente distribuito, verrà invece utilizzato il test di Mann-Whitney.

   . L'analisi statistica sarà ottenuta con il software SPSS, versione 26.

   Misura di prova:

   Il potere del processo dipenderà dall'esito primario (mortalità a 28 giorni). La proporzione della popolazione in terapia intensiva rispetto a tutta la popolazione ospedaliera è di circa il 25% Un campione totale di 634 pazienti raggiungerebbe almeno l'80% (0,8) di potenza per rilevare una differenza di rischio di 0,2 (20%) nella mortalità per tutte le cause a 28 giorni (risultato primario) tra l'ipotesi alternativa e l'ipotesi nulla (le proporzioni dei due gruppi sono 0,5) con un livello di significatività (α) di 0,05 e una proporzione del livello di confidenza del 95% in Clincalc.com calcolatrice [55]. Per compensare la perdita stimata al follow-up e aumentare la potenza dello studio di oltre l'80%, i ricercatori aumenteranno la dimensione del campione in entrambi i gruppi a 650 pazienti (317 in ciascun gruppo di studio).

   I dati sulla mortalità sono stati stimati dalla mortalità media in agosto, settembre e ottobre 2023 presso i reparti di terapia intensiva dell'ospedale universitario di Mansoura tra tutti i pazienti ospedalizzati. Il tasso di mortalità risulta essere di circa 720 casi in questi 3 mesi (240 casi/mese) nei pazienti in terapia intensiva che ricevono lo standard di cura. Il sistema online è stato utilizzato per ottenere il tasso di mortalità in questi tre mesi. L'ipotesi è che LF ridurrà la mortalità del 20%, quindi il tasso di mortalità sarà ridotto da 240 a 192 al mese.

4. Qualità e sicurezza dei dati

   Gli investigatori raccoglieranno i dati dal sistema ospedaliero direttamente in un foglio Excel, la riservatezza del paziente sarà mantenuta prima, durante e dopo lo studio. I pazienti che verranno dimessi prima dei 28 giorni di degenza, saranno comunicati al giorno 28 per conoscere la mortalità al giorno 28.

5. Pubblicazione dei risultati dello studio e del finanziamento

   A causa dei limiti di dimensioni nella pubblicazione della ricerca come un articolo in una rivista. Gli investigatori mirano a dividere questa ricerca in tre articoli e pubblicare questi articoli in riviste peer-review (pubblicazioni in 3 fasi).

   Finanziamento non esiste una fonte di finanziamento per questo studio

   Conflitto di interessi Gli inquirenti non dichiarano alcun conflitto di interessi rilevante

6. Considerazioni etiche

L'approvazione etica sarà presa dall'Institutional Review Board (IRB), facoltà di medicina, università di Mansoura, comitati etici di ricerca nella facoltà di medicina e farmacia, università di Tanta. I benefici dell'intervento per i pazienti superano i rischi attesi. I consensi informati saranno ottenuti da tutti i partecipanti a questa ricerca. La privacy dei partecipanti e la riservatezza dei dati saranno mantenute. Qualsiasi rischio imprevisto apparso durante la ricerca verrà comunicato in tempo ai partecipanti, all'IRB e ai comitati etici. Tutte le procedure di studio obbediranno allo standard dei principi della Dichiarazione di Helsinki (1964).