木の煙とタバコの喫煙への曝露に関連する進行性非小細胞肺がん患者におけるK-RASがん遺伝子変異：治療的意義 (007/055/OMI)

バックグラウンド：

肺がんは、世界中の男女のがん関連死亡の主な原因です(1)。 2007 年には、213,380 人の肺がん患者が新たに登録されました。これらの症例により、160,390人の死亡が報告されました。 この数字は、世界全体のがん患者数の 15%、がん関連死亡の 29% に相当します。 肺がん患者の 5 年生存率は 13% のみです [監視疫学と最終結果 (seer) 統計 http://seer. がん.gov/]、 したがって、それは依然として深刻な健康問題です(2)。 臨床的に言えば、肺がんは、小細胞肺がんと非小細胞肺がん (NSCLC) をカバーする 2 つの主要なカテゴリーに分類されます。 すべての肺腫瘍の約 75% は、扁平上皮癌、腺癌、および大細胞癌を含む NSCLC です (1)。 化学療法、放射線療法、手術を使用した集学的治療にもかかわらず、局所進行性NSCLCの予後は不良です。 臨床ステージ IIIA の生存率は 1 年後に 64%、5 年後には 23% ～ 30% です。臨床ステージ IIIB では、1 年後と 5 年後にそれぞれ 32% と 3% でした (3)。 NSCLCの治療法は進歩していますが、生存率の改善はほとんど達成されていません。

喫煙はNSCLCの主な原因と考えられていますが、アスベスト、ラドン、重金属、木の煙への曝露など、他の危険因子もあります。 後者は、ヒトの発がん物質であり、NSCLC 発症の重要な危険因子であると記載されています。 NSCLC 患者の木の煙への曝露頻度は 28% です (2)。 現在のデータは、喫煙に関連する肺がんと木の煙への曝露に関連する肺がんが異なる臨床的特徴を示すことを示しており、これらは腫瘍の病因の結果である異なる遺伝子変化を有する可能性があることを示唆しています。 それにもかかわらず、患者が占める危険因子と関連して、肺腫瘍形成に関与する癌遺伝子の変異パターンの違いを特定することを可能にする重要な分子研究は存在しない。 がん生物学の知識の最近の進歩により、疾患の発症と進行に主要な役割を果たすさまざまな潜在的な分子標的が同定されています。 細胞の増殖と生存に関与するシグナル伝達経路の中で最も広範囲に研究されているものの 1 つは、上皮成長因子受容体 (EGFR) によって活性化されるシグナル伝達経路です。 上皮成長因子 (EGF) が EGFR の細胞外ドメインに結合すると、受容体のキナーゼ特性が活性化され、さまざまなシグナル伝達経路の活性化が調節されます。 これらの経路の 1 つは K-RAS の活性化につながり、同時に細胞の増殖、分化、遊走、生存に関与する MAP キナーゼの経路を活性化します (これらは発癌における基本的な出来事です)。 報告によると、EGFR の変異は非喫煙患者の 51% (4)、喫煙患者の 10% で見られる一方、K-RAS の変異はタバコに関連する肺腺癌の 30% ～ 50% で発生します。

K-RAS の活性変異は NSCLC だけでなく、結腸直腸腺癌の 50% 以上、膵臓腫瘍の 75%、肺癌の 48%、副腎皮質腫瘍の 44% でも発生します (5)。 これらの変異は、その 90% 以上が K-RAS 遺伝子のコドン 12 (6-8) で発生し、エルロチニブに対する反応の欠如と関連しているため、悪性腫瘍の予後に対する独立した危険因子であると考えられます。 (9)、チロシンキナーゼ阻害剤。 私たちの研究チームは最近、木の煙が生存率とエルロチニブによる治療に対する反応の独立した要因であることを報告しました(10)。 この情報は、肺癌の腫瘍形成が喫煙者の段階に応じた異なる分子機構に起因するという仮説 (11) や、木の煙への曝露などの悪性新生物の出現に関連する他の発癌因子に起因するという仮説を強く裏付けています。 したがって、喫煙患者で報告されているものと比較して、木の煙は K-RAS 癌遺伝子に異なる頻度とパターンの突然変異を引き起こす可能性があると我々は考えています。 木の煙に曝露された NSCLC 患者が、喫煙患者と非喫煙患者の両方に関して、K-RAS 遺伝子の変異の頻度と種類に何らかの違いを示すかどうかを判断することは、臨床的に重要です。

実際、より特異的な治療を受け、治療に対する反応や全生存期間に関してより良い結果が得られる患者を選択することを目的として、多くの潜在的な生物学的マーカーが研究されています。 このため、NSCLC の危険因子に関連する K-RAS 変異を検出できることは、さまざまな治療アプローチを提案し、各腫瘍の特定の特性に応じて患者に利益をもたらす出発点となる可能性があります。

一般的な目的:

木材の煙への曝露または喫煙の背景を持つ非小細胞肺がん患者に発生する、K-RAS 癌遺伝子のコドン 12 における変異の頻度と種類を定義する。

材料および方法：

K-RAS 癌遺伝子における変異の存在は、木の煙にさらされた背景を持つ進行性 NSCLC 患者 50 人および喫煙の背景を持つ NSCLC 患者 50 人を対象に遡及的に評価されます。 さらに、肺がんのこれらの危険因子のいずれかへの曝露の背景の有無にかかわらず、NSCLC患者50人が前向きに評価される。 前向きに研究される患者の対象基準は次の通りである：進行性NSCLCステージIIIB/IVと診断され、これまでに化学療法、放射線療法、またはその両方を受けておらず、パラフィンブロックに埋め込まれた腫瘍組織またはホルマリン固定された腫瘍組織を有する患者。これらの患者はインフォームドコンセントレターに署名する必要があります。 除外基準は、研究への参加を拒否した患者、または研究からの撤退を決定した患者、腫瘍組織を持たない患者、またはサンプルの品質が低い患者です。 患者の組織学的診断に使用される腫瘍サンプルは、ホルマリン固定またはパラフィン包埋のいずれも、国立がん研究所および国立呼吸器疾患研究所の病理学部門から入手されます。これらのサンプルは、K-RAS 変異の分析用の DNA を収集するために使用されます。 患者の臨床データは医療ファイルから取得されます。

DNA抽出:

ゲノムDNAは、QIAamp DNAFFPE組織キット(QIAGEN)を製造業者の指示に従って使用し、50%を超える腫瘍を含むパラフィンスライドの領域から標準手順により抽出した。

K-RAS 癌遺伝子変異の分析 サンプルからの KRAS 遺伝子変異を、製造業者の指示に従って、Therascreen RGQ PCR Kit (QUIAGEN、Scorpions ARMS 法) によって検出しました。

結果の統計分析では、連続変数は算術平均、中央値、標準偏差として表示され、カテゴリ変数は比率と 95% 信頼区間として表示されます。 推論比較は、コルモゴロフ・スミルノフ検定によって決定されたデータ（正常および異常）の分布に従って、スチューデントの t 検定およびマン・ホイットニーの U 検定によって実行されます。 カイ二乗検定またはフィッシャーの直接確率検定のいずれかが、カテゴリ変数間の有意性を評価するために実行されます。 統計的有意性は、両側検定を使用して p<0.05 値として決定されます。 有意な変数と境界線上の有意性 (p<0.1) を持つ変数の両方が多変量ロジスティック回帰分析に含まれます。 グループ間の比較はログランク検定で行われます。