K-RAS onkogén mutáció előrehaladott, nem kissejtes tüdőrákban szenvedő betegekben, amelyek a fafüstnek és a dohányzásnak való kitettséghez kapcsolódnak: terápiás következmények (007/055/OMI)

Háttér:

A tüdőrák világszerte a férfiak és a nők rákkal összefüggő halálozásának vezető oka (1). 2007-ben 213 380 új tüdőrákos esetet regisztráltak; ezekből az esetekből 160 390 halálesetet jelentettek. Ez a szám az összes eset 15%-át és a rákkal összefüggő halálozások 29%-át teszi ki a világon. A tüdőrákos betegek mindössze 13%-a éli túl 5 évig [felügyeleti epidemiológia és végeredmény (látó) statisztika http://seer. cancer.gov/], ezért továbbra is súlyos egészségügyi probléma (2). Klinikai szempontból a tüdőrák két fő kategóriába sorolható, amelyek a kissejtes tüdőrákot és a nem-kissejtes tüdőrákot (NSCLC) foglalják magukban. Az összes tüdődaganat körülbelül 75%-a NSCLC, beleértve a laphámsejtes karcinómát, az adenokarcinómát és a nagysejtes karcinómát (1). A kemoterápiát, sugárterápiát és műtétet alkalmazó multimodális kezelés ellenére a lokálisan előrehaladott NSCLC rossz prognózisú. A IIIA klinikai stádiumban a túlélési arány egy év után 64%, öt év után pedig 23% és 30% között van; a IIIB klinikai stádium esetében 32%, illetve 3% öt év után (3). Míg az NSCLC kezelésében előrelépés történt, a túlélési arányban kevés javulást sikerült elérni.

A dohányzást tekintik az NSCLC fő okának, de vannak más kockázati tényezők is, mint például az azbesztnek, radonnak, nehézfémeknek és fafüstnek való kitettség. Ez utóbbit humán rákkeltő anyagként és az NSCLC kialakulásának fontos kockázati tényezőjeként írták le. A fafüstnek való kitettség gyakorisága NSCLC-ben szenvedő betegeknél 28% (2). A jelenlegi adatok azt mutatják, hogy a dohányzással összefüggő tüdőrák és a fafüst expozícióval összefüggő tüdőrák eltérő klinikai jellemzőket mutat, ami arra utal, hogy eltérő genetikai elváltozásokkal is rendelkezhetnek, amelyek a daganat etiológiájának következményei. Mindazonáltal nincsenek jelentős molekuláris kutatások, amelyek lehetővé tennék a tüdődaganatképződésben szerepet játszó onkogének mutációinak mintázatának különbségeit a beteg által számon tartott rizikófaktorok függvényében. A rákbiológia ismereteinek közelmúltbeli fejlődése számos potenciális molekuláris célpont azonosításához vezetett, amelyek nagy szerepet játszanak a betegség kialakulásában és progressziójában. A sejtproliferációban és -túlélésben szerepet játszó egyik legszélesebb körben kutatott jelátviteli út az epidermális növekedési faktor receptor (EGFR) által aktivált jelátviteli útvonal. Amikor az epidermális növekedési faktor (EGF) kötődik az EGFR extracelluláris doménjéhez, a receptor kináz tulajdonsága aktiválódik, szabályozva a különböző jelátviteli utak aktiválását. Ezen útvonalak egyike a K-RAS aktiválásához vezet, amely egyúttal aktiválja a MAP kináz útját, amely részt vesz a sejt proliferációjában, differenciálódásában, migrációjában és túlélésében (ezek az onkogenezis alapvető eseményei). A jelentések azt mutatják, hogy az EGFR mutációi a nemdohányzó betegek 51%-ánál (4) és a dohányzó betegek 10%-ánál, míg a K-RAS mutációi a dohányzással összefüggő tüdőadenokarcinómák 30-50%-ában fordulnak elő.

A K-RAS aktív mutációi nem csak az NSCLC-ben fordulnak elő, hanem a colorectalis adenocarcinomák >50%-ában, a hasnyálmirigytumorok 75%-ában, a tüdőrák 48%-ában és a mellékvesekéreg daganatok 44%-ában is előfordulnak (5). Ezek a mutációk független kockázati tényezőnek tűnnek a rosszindulatú daganatok prognózisában, mivel több mint 90%-uk a K-RAS gén 12-es kodonjában (6-8) fordul elő, és az erlotinibre adott válasz hiányával függnek össze. (9), tirozin-kináz inhibitor. Kutatócsoportunk a közelmúltban arról számolt be, hogy a fafüst független tényező a túlélésben és az erlotinib-kezelésre adott válaszban (10). Ez az információ erősen alátámasztja azt a hipotézist, hogy a tüdőrák daganatképződése a dohányzó stádiumától (11) vagy a rosszindulatú daganat megjelenésével összefüggő egyéb rákkeltő tényezőktől, például a fafüst expozíciótól függően különböző molekuláris mechanizmusok eredménye. Ezért úgy gondoljuk, hogy a dohányzó betegeknél leírtakhoz képest a fafüst eltérő gyakorisággal és mintázatú mutációt okozhat a K-RAS onkogénben. Klinikai jelentőséggel bír annak meghatározása, hogy a fafüstnek kitett NSCLC-s betegek mutatnak-e különbséget a K-RAS gén mutációinak gyakoriságában és típusában, mind a dohányzó, mind a nemdohányzó betegek tekintetében.

Valójában számos lehetséges biológiai markert vizsgálnak azzal a céllal, hogy kiválasszák azokat a betegeket, akik specifikusabb terápiát kapnak, és így jobb eredményeket érnek el a kezelésre adott válasz és az általános túlélés tekintetében. Ez az oka annak, hogy az NSCLC kockázati tényezőivel összefüggő K-RAS mutációk kimutatásának képessége kiindulópontot jelenthet a különböző kezelési megközelítések javasolásához, és az egyes daganatok sajátos jellemzőinek megfelelően a betegek javát szolgálja.

Általános cél:

A K-RAS onkogén 12-es kodonjában előforduló mutációk gyakoriságának és típusának meghatározása olyan nem-kissejtes tüdőrákos betegeknél, akiknek hátterében fafüst-expozíció vagy dohányzás áll.

Anyagok és metódusok:

A K-RAS onkogén mutációinak jelenlétét retrospektív módon értékelik 50 előrehaladott NSCLC-s betegnél, akiknek hátterében fafüst expozíció áll, és 50 NSCLC-ben szenvedő betegen, akiknek hátterében dohányzás áll. Ezenkívül 50 olyan NSCLC-ben szenvedő beteget vizsgálnak meg, akiknél fennáll a tüdőrák e kockázati tényezőinek kitettsége, vagy nem. A prospektívan vizsgálandó betegek esetében a beválasztási kritériumok a következők: előrehaladott, IIIB/IV. stádiumú NSCLC-vel diagnosztizált betegek, akik korábban nem kaptak kemoterápiát, sugárterápiát vagy mindkettőt, és akiknél paraffin blokkba ágyazott vagy formalinnal fixált daganatszövet van; ezeknek a betegeknek alá kell írniuk a beleegyező nyilatkozatot. A kizárási kritériumok a következők lesznek: olyan betegek, akik megtagadják a vizsgálatban való részvételt, vagy akik úgy döntenek, hogy kilépnek a vizsgálatból, daganatszövet nélküli vagy rossz minőségű mintával rendelkező betegek. A betegek szövettani diagnosztizálásához használt, formalinban fixált vagy paraffinba ágyazott daganatmintákat az Országos Rákkutató Intézet és az Országos Légzőszervi Intézet Patológiai Osztályától szerzik be; ezeket a mintákat DNS gyűjtésére fogják használni a K-RAS mutációk elemzéséhez. A betegek klinikai adatait az orvosi aktáikból szerzik be.

DNS kivonás:

A genomi DNS-t standard eljárással extraháltuk a >50% tumort tartalmazó paraffinlemezek területeiről a QIAamp DNAFFPE Tissue Kit (QIAGEN) segítségével, a gyártó utasításai szerint.

K-RAS onkogén mutációk elemzése A mintákból származó KRAS génmutációkat a gyártó utasításai szerint Therascreen RGQ PCR Kittel (QUIAGEN, Scorpions ARMS módszer) mutattuk ki.

Az eredmények statisztikai elemzéséhez a folytonos változókat számtani átlagként, mediánként és szórásaként, míg a kategorikus változókat arányként és 95%-os konfidenciaintervallumként jelenítjük meg. A következtetési összehasonlításokat Student-féle t-próbával és Mann-Whitney U-próbával végezzük, a Kolmogorov-Smirnov-próbával meghatározott adatok (normál és abnormális) eloszlása ​​szerint. A kategorikus változók közötti szignifikancia értékelésére vagy a chi-négyzet tesztet vagy a Fisher-féle egzakt tesztet hajtják végre. A statisztikai szignifikanciát p<0,05 értékként határozzuk meg kétirányú teszttel. A többváltozós logisztikus regressziós elemzésbe mind a szignifikáns, mind a határesetben szignifikáns (p<0,1) változók bekerülnek. A csoportok közötti összehasonlítás a log-rank teszttel történik.