Mutation de l'oncogène K-RAS chez les patients atteints d'un cancer du poumon non à petites cellules avancé associé à l'exposition à la fumée de bois et au tabagisme : implications thérapeutiques (007/055/OMI)

Arrière-plan:

Le cancer du poumon est la principale cause de décès liés au cancer chez les hommes et les femmes dans le monde (1). En 2007, 213 380 nouveaux cas de cancer du poumon ont été enregistrés ; à partir de ces cas, 160 390 décès ont été signalés. Ce nombre représente 15% du total des cas et 29% des décès liés au cancer dans le monde. Seuls 13 % des patients atteints d'un cancer du poumon survivent pendant 5 ans [épidémiologie de surveillance et statistiques sur les résultats finaux (seer) http://seer. cancer.gov/], il s'agit donc toujours d'un grave problème de santé (2). Cliniquement parlant, le cancer du poumon est divisé en deux catégories principales qui couvrent le cancer du poumon à petites cellules et le cancer du poumon non à petites cellules (NSCLC). Environ 75% de toutes les tumeurs pulmonaires sont des NSCLC, y compris le carcinome épidermoïde, l'adénocarcinome et le carcinome à grandes cellules (1). Malgré le traitement multimodal utilisant la chimiothérapie, la radiothérapie et la chirurgie, le pronostic du CPNPC localement avancé est sombre. Le taux de survie pour le stade clinique IIIA est de 64 % à un an et entre 23 % et 30 % après cinq ans ; pour le stade clinique IIIB 32 % et 3 % après un et cinq ans, respectivement (3). Bien que des progrès aient été réalisés dans le traitement du NSCLC, peu d'améliorations du taux de survie ont été obtenues.

Le tabagisme est considéré comme la principale cause du NSCLC, mais il existe également d'autres facteurs de risque, tels que l'exposition à l'amiante, au radon, aux métaux lourds et à la fumée de bois. Ce dernier a été décrit comme un cancérigène humain et un facteur de risque important pour le développement du NSCLC. La fréquence d'exposition à la fumée de bois chez les patients atteints de NSCLC est de 28 % (2). Les données actuelles indiquent que le cancer du poumon associé au tabagisme et le cancer du poumon associé à l'exposition à la fumée de bois présentent des caractéristiques cliniques différentes, ce qui suggère qu'ils pourraient également avoir des altérations génétiques différentes, qui sont une conséquence de l'étiologie de la tumeur. Néanmoins, il n'existe pas de recherches moléculaires significatives permettant de déterminer les différences dans le schéma des mutations des oncogènes impliqués dans la tumorigenèse pulmonaire, en relation avec les facteurs de risque représentés par le patient. Les avancées récentes dans la connaissance de la biologie du cancer ont conduit à l'identification de diverses cibles moléculaires potentielles qui jouent un rôle majeur dans le développement et la progression de la maladie. L'une des voies de signalisation les plus étudiées impliquées dans la prolifération et la survie des cellules est celle activée par le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR). Lorsque le facteur de croissance épidermique (EGF) se lie au domaine extracellulaire de l'EGFR, la propriété kinase du récepteur est activée, régulant l'activation de différentes voies de signalisation. L'une de ces voies conduit à l'activation de K-RAS, qui active en même temps la voie de la MAP kinase, impliquée dans la prolifération, la différenciation, la migration et la survie de la cellule (ce sont des événements fondamentaux en oncogenèse). Des rapports indiquent que des mutations dans l'EGFR peuvent être trouvées chez 51 % des patients non-fumeurs (4) et chez 10 % des patients fumeurs, tandis que des mutations dans le K-RAS surviennent dans 30 % à 50 % des adénocarcinomes pulmonaires associés au tabac.

Des mutations actives dans K-RAS se produisent non seulement dans le NSCLC, mais elles se produisent également dans > 50 % des adénocarcinomes colorectaux, 75 % des tumeurs pancréatiques, 48 % des cancers du poumon et 44 % des tumeurs corticosurrénaliennes (5). Ces mutations semblent être un facteur de risque indépendant pour le pronostic des tumeurs malignes, puisque plus de 90% d'entre elles surviennent au niveau du codon 12 du gène K-RAS (6-8), et elles sont associées à une absence de réponse à l'erlotinib (9), un inhibiteur de la tyrosine-kinase. Notre équipe de recherche a récemment rapporté que la fumée de bois est un facteur indépendant de survie et de réponse à un traitement à l'erlotinib (10). Ces informations soutiennent fortement l'hypothèse selon laquelle la tumorigenèse du cancer du poumon résulte de mécanismes moléculaires différents selon le stade du fumeur (11) ou d'autres facteurs cancérigènes associés à l'apparition de la néoplasie maligne, comme l'exposition à la fumée de bois. Par conséquent, nous pensons que, par rapport à ce qui a été rapporté chez les patients fumeurs, la fumée de bois pourrait provoquer une fréquence et un schéma de mutations différents dans l'oncogène K-RAS. Il est cliniquement pertinent de déterminer si les patients atteints de NSCLC exposés à la fumée de bois présentent des différences dans la fréquence et le type de mutations du gène K-RAS, par rapport aux patients fumeurs et non fumeurs.

En effet, un certain nombre de marqueurs biologiques potentiels sont étudiés dans le but de sélectionner des patients qui recevront des thérapies plus spécifiques et obtiendront ainsi de meilleurs résultats concernant la réponse au traitement et la survie globale. C'est pourquoi la capacité à détecter les mutations K-RAS associées aux facteurs de risque du NSCLC pourrait représenter un point de départ pour proposer différentes approches de traitement et bénéficier aux patients en fonction des caractéristiques spécifiques de chaque tumeur.

Objectif général:

Définir la fréquence et le type de mutations au niveau du codon 12 de l'oncogène K-RAS qui surviennent chez les patients atteints d'un cancer du poumon non à petites cellules qui ont des antécédents d'exposition à la fumée de bois ou de tabagisme.

Matériels et méthodes:

La présence de mutations au niveau de l'oncogène K-RAS sera évaluée rétrospectivement chez 50 patients atteints de NSCLC avancé ayant des antécédents d'exposition à la fumée de bois et 50 patients atteints de NSCLC ayant des antécédents de tabagisme. De plus, 50 patients atteints de NSCLC avec ou sans antécédents d'exposition à l'un de ces facteurs de risque de cancer du poumon seront évalués de manière prospective. Pour les patients qui feront l'objet d'une étude prospective, les critères d'inclusion seront les suivants : patients diagnostiqués avec un CPNPC avancé de stade IIIB/IV n'ayant pas reçu de chimiothérapie, de radiothérapie ou les deux et qui ont du tissu tumoral inclus dans des blocs de paraffine ou fixés au formol ; ces patients doivent signer une lettre de consentement éclairé. Les critères d'exclusion seront : les patients qui refusent de participer à l'étude ou ceux qui décident de s'en retirer, les patients sans tissu tumoral ou avec un échantillon de mauvaise qualité. Les échantillons de tumeurs, fixés au formol ou inclus en paraffine, utilisés pour le diagnostic histologique des patients seront obtenus auprès des services de pathologie de l'Institut national du cancer et de l'Institut national des maladies respiratoires ; ces échantillons seront utilisés pour recueillir de l'ADN pour l'analyse des mutations K-RAS. Les données cliniques des patients seront obtenues à partir de leurs dossiers médicaux.

Extraction d'ADN :

L'ADN génomique a été extrait par une procédure standard à partir de zones de lames de paraffine contenant > 50 % de tumeur à l'aide du kit de tissus QIAamp DNAFFPE (QIAGEN), conformément aux instructions du fabricant.

Analyse des mutations de l'oncogène K-RAS Les mutations du gène KRAS des échantillons ont été détectées par le kit Therascreen RGQ PCR (QUIAGEN, méthode Scorpions ARMS), conformément aux instructions du fabricant.

Pour l'analyse statistique des résultats, les variables continues seront présentées sous forme de moyennes arithmétiques, de médianes et d'écarts types, tandis que les variables catégorielles seront présentées sous forme de proportions et d'intervalles de confiance à 95 %. Les comparaisons inférentielles seront effectuées par le test t de Student et le test U de Mann-Whitney, selon la distribution des données (normales et anormales) déterminée par le test de Kolmogorov-Smirnov. Le test du chi carré ou le test exact de Fisher sera effectué pour évaluer la signification parmi les variables catégorielles. La signification statistique sera déterminée comme une valeur p<0,05 avec un test bilatéral. Les variables significatives et les variables avec une signification limite (p<0,1) seront incluses dans l'analyse de régression logistique multivariée. Les comparaisons entre les groupes seront effectuées avec le test du log-rank.