晚期非小细胞肺癌患者的 K-RAS 致癌基因突变与暴露于木烟和吸烟相关：治疗意义 (007/055/OMI)

背景：

肺癌是全世界男性和女性癌症相关死亡的主要原因 (1)。 2007年登记肺癌新发病例213380例；据报告，这些病例中有 160,390 人死亡。 这个数字占全世界总病例数的 15% 和癌症相关死亡人数的 29%。 只有 13% 的肺癌患者存活了 5 年[监测流行病学和最终结果（seer）统计 http://seer. 癌症.gov/]， 因此它仍然是一个严重的健康问题 (2)。 临床上，肺癌分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大类。 大约 75% 的肺癌是 NSCLC，包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌 (1)。 尽管采用化疗、放疗和手术等多模式治疗，但局部晚期 NSCLC 的预后仍很差。 临床 IIIA 期的一年生存率为 64%，五年后生存率为 23% 至 30%；对于临床 IIIB 期，一年和五年后分别为 32% 和 3% (3)。 尽管在 NSCLC 的治疗方面取得了进展，但几乎没有实现生存率的提高。

吸烟被认为是 NSCLC 的主要原因，但还有其他风险因素，例如接触石棉、氡、重金属和木头烟雾。 后者已被描述为人类致癌物和 NSCLC 发展的重要危险因素。 NSCLC 患者接触木烟的频率为 28% (2)。 目前的数据表明，与吸烟相关的肺癌和与木烟暴露相关的肺癌具有不同的临床特征，这表明它们也可能具有不同的基因改变，这是肿瘤病因学的结果。 然而，没有重要的分子研究可以确定与患者所考虑的风险因素相关的肺肿瘤发生中癌基因突变模式的差异。 癌症生物学知识的最新进展导致鉴定了各种潜在的分子靶标，这些靶标在疾病的发展和进展中起着重要作用。 涉及细胞增殖和存活的最广泛研究的信号通路之一是由表皮生长因子受体 (EGFR) 激活的信号通路。 当表皮生长因子 (EGF) 与 EGFR 的细胞外结构域结合时，受体的激酶特性被激活，从而调节不同信号通路的激活。 这些途径之一导致 K-RAS 激活，同时激活 MAP 激酶途径，参与细胞的增殖、分化、迁移和存活（这些是肿瘤发生中的基本事件）。 报告表明，EGFR 突变可在 51% 的非吸烟患者 (4) 和 10% 的吸烟患者中发现，而 K-RAS 突变发生在 30% 至 50% 的与烟草相关的肺腺癌中。

K-RAS 中的活性突变不仅发生在 NSCLC 中，而且还发生在 >50% 的结直肠腺癌、75% 的胰腺癌、48% 的肺癌和 44% 的肾上腺皮质肿瘤中 (5)。 这些突变似乎是恶性肿瘤预后的独立危险因素，因为其中超过 90% 发生在 K-RAS 基因的密码子 12 (6-8)，并且它们与对厄洛替尼缺乏反应有关(9)，一种酪氨酸激酶抑制剂。 我们的研究团队最近报告说，木烟是厄洛替尼治疗的生存和反应的独立因素 (10)。 该信息强烈支持这样的假设，即根据吸烟者的阶段 (11) 或与恶性肿瘤的出现相关的其他致癌因素，如木烟暴露，肺癌的肿瘤发生是由不同的分子机制引起的。 因此，我们认为，与吸烟患者中报道的情况相比，木头烟雾可能导致 K-RAS 致癌基因发生不同频率和模式的突变。 确定暴露于木烟的 NSCLC 患者是否在 K-RAS 基因突变的频率和类型方面与吸烟和不吸烟患者存在任何差异具有临床意义。

实际上，正在研究许多潜在的生物标志物，目的是选择将接受更具体治疗的患者，从而在治疗反应和总体生存方面取得更好的结果。 这就是为什么检测与 NSCLC 危险因素相关的 K-RAS 突变的能力可以代表提出不同治疗方法并根据每种肿瘤的具体特征使患者受益的起点。

总体目标：

确定在有木烟暴露或吸烟背景的非小细胞肺癌患者中发生的 K-RAS 致癌基因密码子 12 突变的频率和类型。

材料和方法：

将在 50 名有木烟暴露背景的晚期 NSCLC 患者和 50 名有吸烟背景的 NSCLC 患者中回顾性评估 K-RAS 致癌基因突变的存在。 此外，将对 50 名有或没有暴露于任何这些肺癌危险因素背景的 NSCLC 患者进行前瞻性评估。 对于前瞻性研究的患者，纳入标准如下：诊断为晚期NSCLC IIIB / IV期的患者，既往未接受过化学疗法，放射疗法或两者均接受过，并且具有石蜡包埋或福尔马林固定的肿瘤组织；这些患者必须签署知情同意书。 排除标准为：拒绝参加研究或决定退出研究的患者、无肿瘤组织或样本质量差的患者。 用于患者组织学诊断的福尔马林固定或石蜡包埋的肿瘤样本将从国家癌症研究所和国家呼吸系统疾病研究所的病理科获得；这些样本将用于收集 DNA 以分析 K-RAS 突变。 患者的临床数据将从他们的医疗档案中获得。

DNA提取：

根据制造商的说明，使用 QIAamp DNAFFPE 组织试剂盒 (QIAGEN)，通过标准程序从含有 >50% 肿瘤的石蜡载玻片区域提取基因组 DNA。

K-RAS 致癌基因突变分析 根据制造商的说明，通过 Therascreen RGQ PCR 试剂盒（QUIAGEN，Scorpions ARMS 方法）检测样品中的 KRAS 基因突变。

对于结果的统计分析，连续变量将以算术平均值、中位数和标准差表示，而分类变量将以比例和 95% 置信区间表示。 根据由 Kolmogorov-Smirnov 检验确定的数据分布（正常和异常），将通过 Student's t 检验和 Mann-Whitney U 检验进行推理比较。 将执行卡方检验或 Fisher 精确检验以评估分类变量之间的显着性。 统计显着性将通过双尾检验确定为 p<0.05 值。 显着变量和具有临界显着性 (p<0.1) 的变量都将包括在多变量逻辑回归分析中。 组间比较采用对数秩检验。