Mutación del oncogén K-RAS en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas avanzado asociado con la exposición al humo de leña y el tabaquismo: implicaciones terapéuticas (007/055/OMI)

Fondo:

El cáncer de pulmón es la principal causa de muerte relacionada con el cáncer entre hombres y mujeres en todo el mundo (1). En 2007 se registraron 213.380 nuevos casos de cáncer de pulmón; de estos casos se reportaron 160,390 muertes. Este número representa el 15% del total de casos y el 29% de las muertes relacionadas con el cáncer en el mundo. Solo el 13% de los pacientes con cáncer de pulmón sobreviven 5 años [epidemiología de vigilancia y estadísticas de resultados finales (seer) http://seer. cancer.gov/], por lo que sigue siendo un grave problema de salud (2). Clínicamente hablando, el cáncer de pulmón se divide en dos categorías principales que cubren el cáncer de pulmón de células pequeñas y el cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP). Alrededor del 75 % de todos los tumores de pulmón son NSCLC, incluidos el carcinoma de células escamosas, el adenocarcinoma y el carcinoma de células grandes (1). A pesar del tratamiento multimodal con quimioterapia, radioterapia y cirugía, el CPNM localmente avanzado tiene un mal pronóstico. Las tasas de supervivencia para el estadio clínico IIIA son del 64 % al año y entre el 23 % y el 30 % después de cinco años; para el estadio clínico IIIB 32% y 3% después de uno y cinco años, respectivamente (3). Si bien se han realizado avances en el tratamiento del NSCLC, se han logrado pocas mejoras en la tasa de supervivencia.

El tabaquismo se considera la principal causa del NSCLC, pero también existen otros factores de riesgo, como la exposición al amianto, el radón, los metales pesados ​​y el humo de leña. Este último ha sido descrito como un carcinógeno humano y un importante factor de riesgo para el desarrollo de NSCLC. La frecuencia de exposición al humo de leña en pacientes con NSCLC es del 28% (2). Los datos actuales indican que el cáncer de pulmón asociado con el tabaquismo y el cáncer de pulmón asociado con la exposición al humo de leña presentan características clínicas diferentes, lo que sugiere que también pueden tener diferentes alteraciones genéticas, que son consecuencia de la etiología del tumor. Sin embargo, no existen investigaciones moleculares significativas que permitan determinar las diferencias en el patrón de mutaciones en los oncogenes implicados en la tumorigénesis pulmonar, en relación con los factores de riesgo que presenta el paciente. Los avances recientes en el conocimiento de la biología del cáncer han llevado a la identificación de varios objetivos moleculares potenciales que juegan un papel importante en el desarrollo y la progresión de la enfermedad. Una de las vías de señalización implicadas en la proliferación y supervivencia celular más investigadas es la activada por el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR). Cuando el factor de crecimiento epidérmico (EGF) se une al dominio extracelular de EGFR, la propiedad quinasa del receptor se activa regulando la activación de diferentes vías de señalización. Una de estas vías conduce a la activación de K-RAS, que a su vez activa la vía de la MAP quinasa, implicada en la proliferación, diferenciación, migración y supervivencia de la célula (eventos fundamentales en la oncogénesis). Los informes indican que las mutaciones en EGFR se pueden encontrar en el 51 % de los pacientes no fumadores (4) y en el 10 % de los pacientes fumadores, mientras que las mutaciones en K-RAS ocurren en el 30 % al 50 % de los adenocarcinomas de pulmón asociados con el tabaco.

Las mutaciones activas en K-RAS no solo ocurren en el NSCLC, sino que también ocurren en >50 % de los adenocarcinomas colorrectales, 75 % de los tumores pancreáticos, 48 ​​% del cáncer de pulmón y 44 % de los tumores adrenocorticales (5). Estas mutaciones parecen ser un factor de riesgo independiente para el pronóstico de tumores malignos, ya que más del 90% de ellas ocurren en el codón 12 del gen K-RAS (6-8), y se asocian a falta de respuesta a erlotinib (9), un inhibidor de tirosina-quinasa. Nuestro equipo de investigación ha informado recientemente que el humo de la leña es un factor independiente de supervivencia y respuesta al tratamiento con erlotinib (10). Esta información apoya fuertemente la hipótesis de que la tumorigénesis del cáncer de pulmón resulta de diferentes mecanismos moleculares según el estadio del fumador (11) u otros factores cancerígenos asociados con la aparición de la neoplasia maligna, como la exposición al humo de leña. Por lo tanto, creemos que, en comparación con lo que se ha informado en pacientes fumadores, el humo de leña podría causar una frecuencia y un patrón de mutaciones diferentes en el oncogén K-RAS. Es de relevancia clínica determinar si los pacientes con CPNM expuestos al humo de leña presentan diferencias en la frecuencia y el tipo de mutaciones en el gen K-RAS, tanto respecto a pacientes fumadores como no fumadores.

Actualmente, se están investigando una serie de posibles marcadores biológicos con el objetivo de seleccionar pacientes que recibirán terapias más específicas y así conseguir mejores resultados en cuanto a la respuesta al tratamiento y la supervivencia global. Es por esto que la capacidad de detectar mutaciones de K-RAS asociadas a factores de riesgo para NSCLC podría representar un punto de partida para proponer diferentes enfoques de tratamiento y beneficiar a los pacientes según las características específicas de cada tumor.

Objetivo general:

Definir la frecuencia y el tipo de mutaciones en el codón 12 del oncogén K-RAS que ocurren en pacientes con cáncer de pulmón de células no pequeñas que tienen antecedentes de exposición al humo de leña o tabaquismo.

Materiales y métodos:

La presencia de mutaciones en el oncogén K-RAS se evaluará retrospectivamente en 50 pacientes con NSCLC avanzado que tienen antecedentes de exposición al humo de leña y 50 pacientes con NSCLC que tienen antecedentes de tabaquismo. Además, se evaluarán prospectivamente 50 pacientes con NSCLC con o sin antecedentes de exposición a cualquiera de estos factores de riesgo de cáncer de pulmón. Para los pacientes que serán estudiados prospectivamente, los criterios de inclusión serán los siguientes: pacientes con diagnóstico de CPNM avanzado estadio IIIB/IV que no hayan recibido quimioterapia, radioterapia o ambas previamente y que tengan tejido tumoral incluido en bloques de parafina o fijado en formalina; estos pacientes deben firmar una carta de consentimiento informado. Los criterios de exclusión serán: pacientes que se nieguen a participar en el estudio o que decidan retirarse del mismo, pacientes sin tejido tumoral o con muestra de mala calidad. Las muestras tumorales, tanto fijadas en formol como en parafina, que se utilicen para el diagnóstico histológico de los pacientes se obtendrán de los Departamentos de Patología del Instituto Nacional del Cáncer y del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias; estas muestras se utilizarán para recolectar ADN para el análisis de mutaciones de K-RAS. Los datos clínicos de los pacientes se obtendrán de sus historias clínicas.

Extracción de ADN:

El ADN genómico se extrajo mediante un procedimiento estándar de áreas de portaobjetos de parafina que contenían >50 % de tumor utilizando el kit de tejido QIAamp DNAFFPE (QIAGEN), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Análisis de mutaciones del oncogén K-RAS Las mutaciones del gen KRAS de las muestras fueron detectadas mediante el kit Therascreen RGQ PCR (QUIAGEN, método Scorpions ARMS), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Para el análisis estadístico de los resultados, las variables continuas se presentarán como medias aritméticas, medianas y desviaciones estándar, mientras que las variables categóricas se presentarán como proporciones e intervalos de confianza del 95%. Las comparaciones inferenciales se realizarán mediante la prueba t de Student y la prueba U de Mann-Whitney, según la distribución de datos (normales y anormales) determinada por la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Se realizará la prueba de chi cuadrado o la prueba exacta de Fisher para evaluar la importancia entre las variables categóricas. La significación estadística se determinará como un valor de p<0,05 con una prueba de dos colas. Tanto las variables significativas como las variables con significación límite (p<0,1) se incluirán en el análisis de regresión logística multivariante. Las comparaciones entre grupos se realizarán con el log-rank test.