軽度認知障害のある高齢者の腸内微生物叢と認知機能に対するプロバイオティクスの介入

18 週間の研究は、12 週間の介入期間と 6 週間の追跡期間で構成されます。 軽度認知障害があることが知られ、この研究への参加に同意する60歳から90歳までの中国の高齢者は、適格性についてスクリーニングされ、無作為に2群に分けられる。 被験者は、NUS-IRB登録および国立大学病院の診療所での研究ポスターに基づいてNUSから現在進行中の研究から募集されます。 さらなる研究活動に参加するために研究チームから連絡を受けることに同意し、軽度認知障害と診断された参加者には、まずその研究の研究チームメンバーから連絡が行われます。 全員にこの介入研究について簡単に説明し、詳細について連絡することに同意するか尋ねられます。 介入グループには書面によるインフォームドコンセントが取られます。 被験者のスクリーニングと登録は、研究チームによってスクリーニングログを使用して文書化されます。 ドロップアウトと画面の障害は文書化されます。

プロバイオティクスおよびプラセボのドリンクボトルは製造会社によってコード化され、コードが記載された封印された封筒とともに配送されます。 研究適格基準を満たす被験者は、オンライン研究ランダム化ソフトウェアを使用して、プロバイオティクスまたはプラセボ研究グループに対応するコード化されたグループの 1 つにランダムに割り当てられます。 研究チームのメンバーと被験者の両方が介入を知らされません。 研究製品のコード/ブラインドは、(1) 分析のための研究終了時、または (2) 研究チームが必要と判断した重篤な有害事象が発生した場合のいずれかに破られます。

被験者は、研究製品（無作為化に応じて活性介入プロバイオティクスまたはプラセボ）を朝食時に1日1本、12週間摂取する必要があります。 被験者には、研究が終了するまで 2 週間の間隔で研究製品が投与されます。 製品摂取期間を無事に完了した被験者は追跡期間に入り、発酵乳製品（ヨーグルト、乳酸菌飲料、プロバイオティクスサプリメントなど）を除いて通常の食事を続けます。 安全性および忍容性パラメーターは、0 週目の開始から 18 週目の研究終了までの間の研究介入に関連する有害事象の報告になります。 これらには、不快感 (嘔吐、膨満感、排便回数の変化など) などの軽度の事象の報告が含まれます。 消費された研究製品および他の乳発酵乳の摂取に基づく遵守は、すべての被験者に対して予定された各訪問時に実行されます。 研究チームは、コンプライアンスをチェックするために被験者と一緒に被験者の日記をレビューします。 被験者はまた、さらに 2 週間の介入製品を受け取りに来るときに、2 週間ごとに空のボトルを持参するように求められます。 研究訪問のたびにコンプライアンスが強化されます。

主なパラメーターは、12週間のプロバイオティクス摂取前から後、および6週間プロバイオティクスの使用を中止した後（研究期間の0、6、12、18週目）の腸内微生物叢組成の変化です。 二次研究パラメータは、研究期間の0、12、18週間での認知の変化、免疫および炎症性血液マーカー、0、6、12、18週でのコルチゾールレベルと糞便短鎖脂肪酸レベルの変化となります。勉強期間の。 プロバイオティクスを摂取する前に、基本的な人口統計データ、病歴、投薬および食事の摂取量が評価されます。

被験者による糞便サンプルの採取は、自宅の特別な容器に入れられます。 各時点で 2 本のチューブが必要になります。 サンプリングキットは研究チームによって提供されます。 糞便サンプルの収集に関する指示は、訪問 1 (スクリーニング) で研究チームによって被験者に提供され、その後の訪問に備えて行われます。 個々のサンプルの重量が測定され、記録されます。 糞便 DNA 抽出と 16s rRNA シーケンスは、OMNIgene GUT チューブからの糞便サンプルを使用して行われます。 分析は、NovaSeq 16srRNA アンプリコン配列決定法によって実行されます。 糞便 SCFA 分析は、OMNI-MET チューブからの糞便サンプルを使用して、ガスクロマトグラフィー - トリプル四重極質量分析計によって実行されます。

各時点で各被験者から 2 本の血液チューブを採取します。1 本のチューブには血清コルチゾール推定用に 3 ml の血液が入り、全血免疫活性化アッセイおよび循環炎症マーカー分析用に 3 ml の血液が入ります。 コルチゾールの推定には空腹時の血液が必要であるため、コルチゾールの日内変動を最小限に抑えるために採血は午前9時から11時の間にスケジュールされます。 血清コルチゾールレベルは、電気化学発光イムノアッセイによって検査されます。 全血サンプルを室温で 1650 × g で 25 分間遠心分離し、血漿を取得します。 血漿サンプルはその後、さらなる分析までアリコートに分けて-80℃で保存されます。 全血は、Toll 様受容体 TLR2 および TLR4 アゴニストによって 48 時間刺激されます。 上清を収集し、アリコートにして、-80℃で保存します。 すべての時点からのサンプル収集が完了した後、バッチ効果を避けるために、異なる時点からの同じ参加者のすべてのサンプルが同じ日に同じプレートで測定されます。 分析されるサイトカインは、市販の酵素結合免疫吸着検定法 (ELISA) キットを使用して、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-8、および TNF-α です。 すべての実験は、キットの各メーカーの指示に従って実行されます。 保存された血漿は、近接伸長アッセイを使用して 45 のバイオマーカー (サイトカインとケモカイン) について分析されます。

この一連の神経認知テストはシンガポール国民で利用され、検証されています。 このテストでは、注意、学習、記憶、速度、実行機能などのさまざまな認知機能が評価されます。 テストには、レイ聴覚言語学習テスト (RAVLT)、ディジット スパン タスク、カラー トレイル テスト、ブロック デザインおよび意味論的言語流暢性テスト、ストループ テストが含まれます。

人口統計、アンケート、神経心理学的検査、および収集されたサンプルから収集されたデータは、記述的手法を使用して要約されます。 連続変数 (および各時点でのベースラインおよび絶対値からの変化) の要約統計量 (平均、標準偏差) が表示されます。 カテゴリ変数の数とパーセンテージが表示されます。 必要に応じて、結果の表示にはプロットと信頼区間が含まれます。 認知およびバイオマーカーの結果の多変量データ分析は、SPSS と R を使用して実行されます。