Intervenção probiótica na microbiota intestinal e funcionamento cognitivo em idosos com comprometimento cognitivo leve

O estudo de 18 semanas consiste em um período de intervenção de 12 semanas e um período de acompanhamento de 6 semanas. Idosos chineses entre 60 e 90 anos de idade e sabidamente portadores de Comprometimento Cognitivo Leve e que concordam em participar deste estudo serão selecionados para elegibilidade e então randomizados em 2 braços. Os indivíduos serão recrutados a partir de estudos em andamento do NUS sob o registro NUS-IRB e os pôsteres do estudo na clínica do National University Hospital. Os participantes que consentiram em ser contatados pela equipe do estudo para participar de outras atividades de pesquisa e com diagnóstico de Comprometimento Cognitivo Leve serão contatados primeiro pelos membros da equipe de pesquisa desse estudo. Todos eles serão brevemente informados sobre este estudo de intervenção e questionados se aceitam ser contactados para mais informações. O consentimento informado por escrito será obtido para os grupos de intervenção. A triagem e a inscrição do sujeito serão documentadas pela equipe do estudo usando um registro de triagem. Falhas de desistência e tela serão documentadas.

Os frascos de bebida probiótica e placebo serão codificados pela empresa fabricante e entregues com um envelope lacrado contendo o código. Os indivíduos que atenderem aos critérios de elegibilidade do estudo serão designados aleatoriamente usando o software de randomização do estudo online para um dos grupos codificados correspondentes aos grupos de estudo probiótico ou placebo. Tanto os membros da equipe de estudo quanto os sujeitos estarão cegos para a intervenção. Os códigos/ocultação do produto do estudo serão quebrados: (1) no final do estudo para análise ou (2) no caso de um evento adverso grave considerado necessário pela equipe do estudo.

Os indivíduos devem beber o produto do estudo (probiótico intervencionista ativo ou placebo, dependendo da randomização) 1 garrafa por dia no café da manhã por 12 semanas. Os indivíduos receberão o produto do estudo em intervalos de 2 semanas até o final do estudo. Os indivíduos que concluíram com sucesso o período de consumo do produto entrarão no período de acompanhamento, durante o qual continuarão sua dieta normal, com exceção de produtos lácteos fermentados (como iogurte, bebidas Lactobacillus e suplementos probióticos). O parâmetro de segurança e tolerabilidade serão relatórios de quaisquer eventos adversos relacionados à intervenção do estudo entre o início na Semana 0 até o final do estudo na Semana 18. Isso incluirá relatos de eventos leves, como qualquer desconforto (vômito, sensação de inchaço, mudanças na frequência de defecação, etc.). A adesão com base no produto do estudo consumido e na ingestão de outros leites fermentados lácteos será realizada em cada visita agendada para todos os indivíduos. A equipe do estudo revisará os diários dos participantes junto com os participantes para verificar a conformidade. Os participantes também serão solicitados a trazer frascos vazios a cada 2 semanas quando vierem coletar mais 2 semanas do produto de intervenção. A conformidade será reforçada em cada visita de estudo.

O parâmetro primário é a mudança na composição da microbiota intestinal de antes para depois de 12 semanas de consumo de probióticos e após a interrupção do uso de probióticos por 6 semanas (nas semanas 0, 6, 12 e 18 do período de estudo). Os parâmetros secundários do estudo serão as mudanças na cognição em 0, 12 e 18 semanas do período de estudo, e marcadores sanguíneos imunológicos e inflamatórios, e níveis de cortisol e mudanças nos níveis fecais de ácidos graxos de cadeia curta em 0, 6, 12 e 18 do período de estudo. Dados demográficos básicos, histórico médico, medicamentos e consumo de dietas serão avaliados antes do consumo de probióticos.

A coleta de amostra fecal por um sujeito será em recipientes especiais em casa. Dois tubos serão necessários em cada ponto de tempo. O kit de amostragem será fornecido pela equipe de estudo. Instruções para coleta de amostras fecais serão fornecidas aos sujeitos pela equipe do estudo na Visita 1 (triagem) para as visitas subsequentes. Amostras individuais serão pesadas e registradas. A extração de DNA fecal e o sequenciamento de 16s rRNA prosseguirão com as amostras fecais do tubo OMNIgene GUT. A análise será realizada pelo método de sequenciamento de amplicon NovaSeq 16srRNA. A análise dos SCFAs fecais será realizada por espectrômetro de massa de cromatografia gasosa triplo quadrupolo com as amostras fecais do tubo OMNI-MET.

Dois tubos de sangue serão coletados de cada sujeito em cada ponto de tempo: Um tubo com 3ml de sangue para estimativa de cortisol sérico e 3mls de sangue para os ensaios de ativação imune em sangue total e para análise de marcadores inflamatórios circulantes. O sangue em jejum é necessário para a estimativa do cortisol e, portanto, a coleta de sangue será agendada entre 9:00 e 11:00 da manhã para minimizar a variação diurna do cortisol. O nível de cortisol sérico será testado pelo imunoensaio de Eletroquimioluminescência. As amostras de sangue total serão centrifugadas a 1650 × g por 25 min em temperatura ambiente para obtenção do plasma. As amostras de plasma serão então armazenadas em alíquotas a -80° C até novas análises. O sangue total será estimulado pelos receptores Toll-like TLR2 e agonistas TLR4 por 48 horas. O sobrenadante será coletado e alíquotado e armazenado a -80°C. Depois que as coletas de amostras de todos os pontos de tempo forem concluídas, todas as amostras dos mesmos participantes de diferentes pontos de tempo serão medidas no mesmo dia e nas mesmas placas, para evitar efeitos de lote. As citocinas analisadas serão IL-1β, IL-6, IL-10, IL-8 e TNF-alfa utilizando kits de ensaio imunoenzimático (ELISA) comercialmente disponíveis. Todos os experimentos serão realizados de acordo com as instruções dos respectivos fabricantes dos kits. O plasma armazenado será analisado para 45 biomarcadores (citocinas e quimiocinas) usando o Ensaio de Extensão de Proximidade.

Esta bateria de testes neurocognitivos foi utilizada e validada na população de Singapura. Os testes avaliam várias funções cognitivas, incluindo atenção, aprendizado, memória, velocidade e função executiva. Os testes incluíram Rey Auditory Verbal Learning Test (RAVLT), tarefa Digit Span, testes Color trails, teste Blcok e teste de fluência verbal semântica e teste Stroop.

Dados coletados de dados demográficos, questionários, testes neuropsicológicos e amostras coletadas serão resumidos usando técnicas descritivas. Estatísticas resumidas (média, desvio padrão) serão apresentadas para variáveis ​​contínuas (e suas mudanças desde a linha de base e valores absolutos em cada ponto no tempo). Contagens e porcentagens serão apresentadas para variáveis ​​categóricas. Quando apropriado, a apresentação dos resultados incluirá gráficos e intervalos de confiança. Análises multivariadas de dados de resultados cognitivos e de biomarcadores serão realizadas usando SPSS e R.