경미한 인지 장애가 있는 노인의 장내 미생물군과 인지 기능에 대한 프로바이오틱스 중재

18주간의 연구는 12주간의 개입 기간과 6주간의 추적 기간으로 구성됩니다. 60세에서 90세 사이의 경도 인지 장애가 있는 것으로 알려지고 이 연구에 참여하는 데 동의하는 중국 노인은 적격성을 선별한 다음 무작위로 2개의 팔로 배정됩니다. 피험자는 NUS-IRB 등록에 따라 NUS에서 현재 진행 중인 연구와 국립 대학 병원 클리닉의 연구 포스터에서 모집됩니다. 추가 연구 활동에 참여하기 위해 연구 팀의 연락을 받는 데 동의하고 경도 인지 장애 진단을 받은 참가자는 해당 연구의 연구팀 구성원이 먼저 연락을 취할 것입니다. 그들 모두에게 이 개입 연구에 대한 간략한 정보를 제공하고 더 많은 정보를 얻기 위해 연락하는 데 동의하는지 묻습니다. 중재 그룹에 대해 서면 동의서를 받습니다. 피험자 선별 및 등록은 선별 로그를 사용하여 연구 팀에 의해 문서화됩니다. 드롭아웃 및 화면 오류가 문서화됩니다.

프로바이오틱 및 플라시보 음료수 병은 제조 회사에서 코드를 작성하고 코드가 포함된 밀봉된 봉투와 함께 배송됩니다. 연구 적격성 기준을 충족하는 피험자는 온라인 연구 무작위화 소프트웨어를 사용하여 프로바이오틱 또는 위약 연구 그룹에 해당하는 코딩된 그룹 중 하나에 무작위로 배정됩니다. 연구 팀 구성원과 피험자 모두 개입에 대해 눈이 멀게 됩니다. 연구 제품 코드/눈가림은 (1) 분석을 위한 연구 종료 시 또는 (2) 연구 팀이 필요하다고 간주하는 심각한 부작용의 경우에 해제됩니다.

피험자는 12주 동안 아침 식사 시 연구 제품(무작위화에 따라 활성 개입 생균제 또는 위약)을 하루 1병 마셔야 합니다. 피험자는 연구가 끝날 때까지 2주 간격으로 연구 제품을 받게 됩니다. 제품 소비 기간을 성공적으로 마친 피험자는 후속 기간에 들어가 발효 유제품(요구르트, 락토바실러스 음료 및 프로바이오틱스 보충제 등)을 제외하고 정상적인 식사를 계속합니다. 안전성 및 내약성 매개변수는 0주 시작부터 18주 연구 종료까지 연구 개입과 관련된 모든 부작용에 대한 보고입니다. 여기에는 불편함(구토, 팽만감, 배변 빈도의 변화 등)과 같은 가벼운 사건에 대한 보고가 포함됩니다. 소비된 연구 제품 및 다른 낙농 발효유의 섭취에 기초한 준수는 모든 피험자에 대해 각각의 예정된 방문에서 수행될 것입니다. 연구팀은 준수 여부를 확인하기 위해 주제와 함께 주제 일기를 검토합니다. 피험자는 또한 개입 제품의 추가 2주를 수집하기 위해 올 때 2주마다 빈 병을 가져오도록 요청받을 것입니다. 각 연구 방문 시 규정 준수가 강화됩니다.

1차 매개변수는 프로바이오틱스 소비 12주 전과 6주 동안 프로바이오틱스 사용을 중단한 후(연구 기간의 0주, 6주, 12주 및 18주차) 장내 미생물 구성의 변화입니다. 2차 연구 매개변수는 연구 기간의 0주, 12주 및 18주에서의 인지 변화, 면역 및 염증성 혈액 마커, 코티솔 수치 및 0, 6, 12 및 18주에서의 분변 단쇄 지방산 수치의 변화입니다. 연구 기간의. 기본 인구통계학적 데이터, 병력, 약물 및 식이 섭취는 프로바이오틱스 섭취 전에 평가됩니다.

피험자가 수집한 배설물 샘플은 집에 있는 특수 용기에 보관됩니다. 각 시점마다 두 개의 튜브가 필요합니다. 샘플링 키트는 연구 팀에서 제공합니다. 배설물 샘플 수집에 대한 지침은 후속 방문을 위해 방문 1(스크리닝)에서 연구 팀에 의해 피험자에게 제공될 것입니다. 개별 샘플의 무게를 측정하고 기록합니다. 분변 DNA 추출 및 16s rRNA 시퀀싱은 OMNIgene GUT 튜브의 분변 샘플로 진행됩니다. 분석은 NovaSeq 16srRNA amplicon 시퀀싱 방법으로 수행됩니다. 대변 ​​SCFA 분석은 OMNI-MET 튜브의 대변 샘플을 사용하여 가스 크로마토그래피-삼중 사중극자 질량 분석기로 수행됩니다.

각 시점에서 각 피험자로부터 2개의 혈액 튜브를 수집합니다: 혈청 코티솔 추정을 위한 3ml의 혈액이 있는 튜브 1개와 전혈 면역 활성화 분석 및 순환 염증 마커 분석을 위한 3ml의 혈액이 있는 튜브. 코티솔 추정에는 공복 혈액이 필요하므로 코티솔의 일중 변동을 최소화하기 위해 오전 9시에서 11시 사이에 채혈 일정을 잡을 것입니다. 혈청 코르티솔 수치는 전기화학발광 면역측정법으로 테스트합니다. 전혈 샘플을 실온에서 25분 동안 1650 x g에서 원심분리하여 혈장을 얻습니다. 혈장 샘플은 추가 분석이 있을 때까지 -80°C에서 분취량으로 보관됩니다. 전혈은 48시간 동안 Toll 유사 수용체 TLR2 및 TLR4 작용제에 의해 자극됩니다. 상청액을 수집하고 분취하여 -80°C에서 보관합니다. 모든 시점에서 샘플 수집이 완료된 후 다른 시점에서 동일한 참가자에 대한 모든 샘플은 배치 효과를 피하기 위해 같은 날 같은 플레이트에서 측정됩니다. 시판되는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 키트를 사용하여 분석된 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-10, IL-8 및 TNF-알파입니다. 모든 실험은 각 키트 제조업체의 지침에 따라 수행됩니다. 저장된 혈장은 Proximity Extension Assay를 사용하여 45개의 바이오마커(사이토카인 및 케모카인)에 대해 분석됩니다.

이 신경인지 테스트 배터리는 싱가포르 인구에서 활용되고 검증되었습니다. 이 테스트는 주의력, 학습, 기억력, 속도 및 실행 기능을 포함한 다양한 인지 기능을 평가합니다. 테스트에는 RAVLT(Rey Auditory Verbal Learning Test), Digit Span 작업, Color trails 테스트, Blcok 디자인 및 Semantic Verbal 유창성 테스트, Stroop 테스트가 포함되었습니다.

인구 통계, 설문지, 신경심리학적 검사 및 수집된 샘플에서 수집된 데이터는 설명 기술을 사용하여 요약됩니다. 요약 통계(평균, 표준 편차)는 연속 변수(및 각 시점에서 기준선 및 절대값으로부터의 변화)에 대해 표시됩니다. 범주형 변수에 대해 개수와 백분율이 표시됩니다. 적절한 경우 결과 표시에는 플롯과 신뢰 구간이 포함됩니다. 인지 및 바이오마커 결과의 다변량 데이터 분석은 SPSS 및 R을 사용하여 수행됩니다.