Intervención probiótica sobre la microbiota intestinal y el funcionamiento cognitivo en adultos mayores con deterioro cognitivo leve

El estudio de 18 semanas consta de un período de intervención de 12 semanas y un período de seguimiento de 6 semanas. Los adultos mayores chinos de entre 60 y 90 años de edad que se sabe que tienen un deterioro cognitivo leve y aceptan participar en este estudio serán evaluados para determinar su elegibilidad y luego serán aleatorizados en 2 brazos. Los sujetos serán reclutados de los estudios en curso actuales de NUS bajo el registro NUS-IRB y los carteles del estudio en la clínica del Hospital de la Universidad Nacional. Aquellos participantes que aceptaron ser contactados por el equipo del estudio para participar en actividades de investigación adicionales y con un diagnóstico de deterioro cognitivo leve serán contactados primero por miembros del equipo de investigación de ese estudio. A todos ellos se les informará brevemente sobre este estudio de intervención y se les preguntará si aceptan ser contactados para obtener más información. Se tomará el consentimiento informado por escrito para los grupos de intervención. El equipo de estudio documentará la selección y la inscripción de los sujetos mediante un registro de selección. Se documentarán los abandonos y las fallas en la pantalla.

Las botellas de bebida de probiótico y placebo serán codificadas por la empresa fabricante y entregadas con un sobre cerrado que contiene el código. Los sujetos que cumplan con los criterios de elegibilidad del estudio serán asignados aleatoriamente utilizando un software de aleatorización de estudios en línea a uno de los grupos codificados correspondientes a los grupos de estudio de probióticos o placebo. Tanto los miembros del equipo del estudio como los sujetos estarán cegados a la intervención. Los códigos de producto/cegamiento del estudio se interrumpirán: (1) al final del estudio para el análisis, o (2) en caso de que se produzca un evento adverso grave según lo considere necesario el equipo del estudio.

Los sujetos deben beber el producto del estudio (probiótico intervencionista activo o placebo según la aleatorización) 1 botella por día en el desayuno durante 12 semanas. Los sujetos recibirán el producto del estudio a intervalos de 2 semanas hasta que finalice el estudio. Los sujetos que hayan completado con éxito el período de consumo del producto ingresarán al período de seguimiento, durante el cual continuarán con su dieta normal con la excepción de los productos lácteos fermentados (como yogur, bebidas de Lactobacillus y suplementos probióticos). El parámetro de seguridad y tolerabilidad serán los informes de cualquier evento adverso relacionado con la intervención del estudio entre el inicio en la Semana 0 hasta el final del estudio en la Semana 18. Estos incluirán informes de eventos leves como molestias (vómitos, sensación de hinchazón, cambios en la frecuencia de defecación, etc.). El cumplimiento basado en el producto de estudio consumido y la ingesta de otra leche fermentada láctea se realizará en cada visita programada para todos los sujetos. El equipo de estudio revisará los diarios de los sujetos junto con los sujetos para verificar el cumplimiento. También se les pedirá a los sujetos que traigan botellas vacías cada 2 semanas cuando vengan a recoger otras 2 semanas del producto de intervención. El cumplimiento se reforzará en cada visita de estudio.

El parámetro principal es el cambio en la composición de la microbiota intestinal desde antes hasta después de 12 semanas de consumo de probióticos y después de suspender el uso de probióticos durante 6 semanas (en las semanas 0, 6, 12 y 18 del período de estudio). Los parámetros secundarios del estudio serán los cambios en la cognición a las 0, 12 y 18 semanas del período de estudio, y los marcadores sanguíneos inmunológicos e inflamatorios, y los niveles de cortisol y los cambios en los niveles de ácidos grasos de cadena corta fecales a las 0, 6, 12 y 18 del periodo de estudio. Se evaluarán datos demográficos básicos, historial médico, medicamentos y consumo de dietas antes del consumo de probióticos.

La recolección de muestras fecales por parte de un sujeto será en recipientes especiales en su domicilio. Se requerirán dos tubos en cada punto de tiempo. El equipo de estudio proporcionará el equipo de muestreo. Las instrucciones para la recolección de muestras fecales serán proporcionadas a los sujetos por el equipo de estudio en la Visita 1 (detección) para las visitas posteriores. Las muestras individuales serán pesadas y registradas. La extracción del ADN fecal y la secuenciación del ARNr 16s se realizarán con las muestras fecales del tubo OMNIgene GUT. El análisis se realizará mediante el método de secuenciación de amplicón NovaSeq 16srRNA. El análisis de SCFA fecales se realizará mediante cromatografía de gases-espectrómetro de masas de triple cuadrupolo con las muestras fecales del tubo OMNI-MET.

Se recolectarán dos tubos de sangre de cada sujeto en cada punto de tiempo: un tubo con 3 ml de sangre para la estimación del cortisol sérico y 3 ml de sangre para los ensayos de activación inmune en sangre total y para el análisis de marcadores inflamatorios circulantes. Se requiere sangre en ayunas para la estimación del cortisol, por lo que la recolección de sangre se programará entre las 9:00 y las 11:00 a. m. para minimizar la variación diurna del cortisol. El nivel de cortisol sérico se evaluará mediante el inmunoensayo de electroquimioluminiscencia. Las muestras de sangre entera se centrifugarán a 1650 × g durante 25 min a temperatura ambiente para obtener plasma. A continuación, las muestras de plasma se almacenarán en alícuotas a -80 °C hasta su posterior análisis. Toda la sangre será estimulada por los agonistas de los receptores tipo Toll TLR2 y TLR4 durante 48 horas. El sobrenadante se recogerá y se dividirá en alícuotas y se almacenará a -80 °C. Una vez completadas las tomas de muestras de todos los puntos de tiempo, todas las muestras de los mismos participantes de diferentes puntos de tiempo se medirán el mismo día y en las mismas placas, para evitar efectos por lotes. Las citoquinas analizadas serán IL-1β, IL-6, IL-10, IL-8 y TNF-alfa utilizando kits de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) disponibles comercialmente. Todos los experimentos se realizarán según las instrucciones de los respectivos fabricantes de los kits. El plasma almacenado se analizará en busca de 45 biomarcadores (citocinas y quimiocinas) mediante el ensayo de extensión de proximidad.

Esta batería de pruebas neurocognitivas se ha utilizado y validado en la población de Singapur. Las pruebas evalúan varias funciones cognitivas, incluida la atención, el aprendizaje, la memoria, la velocidad y la función ejecutiva. Las pruebas incluyeron la prueba de aprendizaje verbal auditivo de Rey (RAVLT), la tarea de extensión de dígitos, las pruebas de senderos de color, el diseño de Blcok y la prueba de fluidez verbal semántica, y la prueba de Stroop.

Los datos recopilados de datos demográficos, cuestionarios, pruebas neuropsicológicas y muestras recopiladas se resumirán utilizando técnicas descriptivas. Se presentarán estadísticas de resumen (media, desviación estándar) para las variables continuas (y sus cambios desde la línea de base y los valores absolutos en cada punto de tiempo). Se presentarán conteos y porcentajes para variables categóricas. Cuando corresponda, la presentación de los resultados incluirá gráficos e intervalos de confianza. Los análisis de datos multivariados de los resultados cognitivos y de biomarcadores se realizarán utilizando SPSS y R.