Probiotikus beavatkozás a bél mikrobiotára és a kognitív működésre enyhe kognitív károsodással rendelkező idősebb felnőtteknél

A 18 hetes vizsgálat egy 12 hetes beavatkozási időszakból és egy 6 hetes követési időszakból áll. A 60 és 90 év közötti kínai idősebb felnőtteket, akikről ismert, hogy enyhe kognitív károsodásban szenvednek, és beleegyeznek, hogy részt vegyenek ebben a vizsgálatban, átvizsgálják a jogosultságot, majd véletlenszerűen 2 karba osztják. Az alanyokat a NUS jelenlegi, folyamatban lévő tanulmányaiból veszik fel a NUS-IRB regisztrációval és a tanulmányi plakátokkal az Országos Egyetemi Kórház klinikáján. Azokkal a résztvevőkkel, akik hozzájárultak ahhoz, hogy a vizsgálati csoport felvegye velük a kapcsolatot további kutatási tevékenységekben való részvétel céljából, és enyhe kognitív károsodást diagnosztizáltak, először a vizsgálat kutatócsoportjának tagjai veszik fel a kapcsolatot. Mindannyiukat röviden tájékoztatják erről a beavatkozási tanulmányról, és megkérdezik, hogy beleegyeznek-e abba, hogy további információért felvegyék velük a kapcsolatot. Az intervenciós csoportok írásos beleegyezését kérik. Az alany szűrését és beiratkozását a vizsgálati csoport szűrési napló segítségével dokumentálja. A lemorzsolódást és a képernyőhibákat dokumentálni kell.

A probiotikus és placebo italos üvegeket a gyártó cég kódolja, és a kódot tartalmazó lezárt borítékban szállítja ki. Azokat az alanyokat, akik megfelelnek a vizsgálati alkalmassági kritériumoknak, véletlenszerűen besorolják az online vizsgálati randomizációs szoftver segítségével a probiotikus vagy placebo vizsgálati csoportoknak megfelelő kódolt csoportok egyikébe. Mind a vizsgálati csoport tagjai, mind az alanyok vakok lesznek a beavatkozásra. A vizsgálati termék kódjai/vakítása megszakad: (1) a vizsgálat végén elemzés céljából, vagy (2) a vizsgálati csoport által szükségesnek ítélt súlyos nemkívánatos esemény esetén.

Az alanyoknak napi 1 üveggel kell inniuk a vizsgálati készítményt (aktív intervenciós probiotikum vagy placebó a randomizációtól függően) reggeli közben 12 héten keresztül. Az alanyok 2 hetes időközönként kapják a vizsgálati terméket a vizsgálat végéig. Azok az alanyok, akik sikeresen teljesítették a termékfogyasztási időszakot, belépnek a követési időszakba, amely során folytatják a szokásos étrendjüket, kivéve az erjesztett tejtermékeket (például joghurt, Lactobacillus italok és probiotikus kiegészítők). A biztonságossági és tolerálhatósági paraméter a vizsgálati beavatkozással összefüggő nemkívánatos események jelentései a 0. hét kezdete és a 18. heti vizsgálat vége között. Ezek közé tartoznak az enyhe események, például bármilyen kellemetlen érzés (hányás, felfúvódás, a székletürítés gyakoriságának változása stb.) kapcsolatos jelentések. Az elfogyasztott vizsgálati terméken és az egyéb tejtermékekben erjesztett tej fogyasztásán alapuló megfelelést minden egyes tervezett látogatás alkalmával minden alany esetében elvégezzük. A vizsgálati csoport a tantárgyi naplókat a tantárgyakkal együtt átnézi a megfelelőség ellenőrzése érdekében. Az alanyokat arra is felkérik, hogy 2 hetente hozzanak magukkal üres palackokat, amikor újabb 2 hét intervenciós terméket gyűjtenek. A megfelelést minden tanulmányút alkalmával megerősítik.

Az elsődleges paraméter a bél mikrobiota összetételének változása a 12 hetes probiotikum-fogyasztás előtti és 12 hetes probiotikum-fogyasztás utáni állapotok között, valamint a probiotikum-használat 6 hetes leállítása után (a vizsgálati időszak 0., 6., 12. és 18. hetén). A másodlagos vizsgálati paraméterek a kogníció változásai a vizsgálati időszak 0., 12. és 18. hetében, valamint az immun- és gyulladásos vérmarkerek, valamint a kortizolszintek és a széklet rövid szénláncú zsírsavszintjének változásai 0, 6, 12 és 18 hetében. a tanulmányi időszakról. A probiotikumok fogyasztása előtt felmérik az alapvető demográfiai adatokat, a kórtörténetet, a gyógyszereket és a diéták fogyasztását.

Az alany által végzett székletminta speciális otthoni edényekben történik. Minden időpontban két csőre lesz szükség. A mintavételi készletet a vizsgálócsoport biztosítja. A székletminta vételére vonatkozó utasításokat a vizsgálati csoport az 1. látogatáson (szűrés) ad az alanyoknak a következő látogatások alkalmával. Az egyes mintákat lemérik és rögzítik. A széklet DNS extrakciója és a 16s rRNS szekvenálása az OMNIgene GUT csőből származó székletmintákkal folytatódik. Az elemzést a NovaSeq 16srRNS amplikon szekvenálási módszerrel végezzük. A széklet SCFA-elemzését gázkromatográfiás hármas kvadrupólus tömegspektrométerrel végezzük az OMNI-MET csőből származó székletmintákkal.

Minden egyes alanytól minden időpontban két cső vért vesznek: egy cső 3 ml vérrel a szérum kortizol becsléséhez, és 3 ml vér a teljes vér immunaktivációs vizsgálatához és a keringő gyulladásos marker elemzéséhez. A kortizol becsléséhez éhgyomri vér szükséges, ezért a vérvételt 9:00 és 11:00 óra között ütemezzük a kortizol napi ingadozásának minimalizálása érdekében. A szérum kortizol szintjét elektrochemilumineszcenciás immunoassay-vel teszteljük. A teljes vérmintákat 1650 × g-vel centrifugálják 25 percig szobahőmérsékleten, hogy plazmát kapjanak. A plazmamintákat ezután alikvot részekben -80 °C-on tárolják a további elemzésekig. A teljes vért a Toll-szerű receptorok TLR2 és TLR4 agonisták stimulálják 48 órán keresztül. A felülúszót összegyűjtjük, aliquot részekre osztjuk, és -80 °C-on tároljuk. Miután az összes időpontból származó mintagyűjtés befejeződött, ugyanazon résztvevők különböző időpontokból származó összes mintáját ugyanazon a napon és ugyanazokon a lemezeken mérik, hogy elkerüljék a kötegelt hatásokat. Az elemzett citokinek IL-1β, IL-6, IL-10, IL-8 és TNF-alfa, a kereskedelemben kapható enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) kitekkel. Minden kísérletet a készletek gyártóinak utasításai szerint hajtanak végre. A tárolt plazmát 45 biomarkerre (citokinekre és kemokinekre) elemzik a Proximity Extension Assay segítségével.

Ezt a neurokognitív tesztkészletet a szingapúri populációban használták és validálták. A tesztek különféle kognitív funkciókat értékelnek, beleértve a figyelmet, a tanulást, a memóriát, a sebességet és a végrehajtó funkciókat. A tesztek között szerepelt Rey Auditory Verbal Learning Test (RAVLT), Digit Span feladat, Color Trails tesztek, Blcok tervezés és szemantikus verbális fluencia teszt, valamint Stroop teszt.

A demográfiai adatokból, kérdőívekből, neuropszichológiai tesztekből és begyűjtött mintákból gyűjtött adatokat leíró technikák segítségével összegzik. Összefoglaló statisztikát (átlag, szórás) mutatunk be a folytonos változókra (és azok változásaira az alap- és abszolút értékekhez képest minden időpontban). A kategorikus változók számai és százalékai jelennek meg. Adott esetben az eredmények bemutatása diagramot és konfidenciaintervallumot is tartalmaz. A kognitív és biomarker eredmények többváltozós adatelemzését SPSS és R segítségével végzik el.