軽度認知障害におけるプロバイオティクス配合の効果 (PROBIOMIND)

現在、アルツハイマー病（AD）の症例数は流行の規模に達しています。 欧州連合では、アルツハイマー病の有病率は65～69歳の2％から85～89歳の22％に増加しており、人口高齢化によりこの数字は2040年までに2倍になると予想されており、社会に対する前例のない負担（Jané-Llopis & Gabilondo、2008）。 これらの統計は、特に軽度認知障害（MCI）の初期段階において、疾患の進行を阻止し、最も衰弱させる臨床症状の発現を遅らせる介入戦略が緊急に必要であることを浮き彫りにしている。

よく知られているように、認知機能低下の病因生理学は多因子的であり、変更不可能な要因（性別、遺伝など）と変更可能な要因（ライフスタイルなど）の両方が関与しています。 後者の中には、質の悪い食事、運動不足、喫煙、睡眠パターンの変化などが含まれており、これらは高血圧、高コレステロール血症、肥満などの認知機能低下の主要な危険因子に直接影響を与えます。 さらに、最近の研究では、食事やその他のライフスタイル要因が腸内細菌叢の構成に大きな影響を与えているようであり、それが腸-脳軸や認知症の病因に直接影響を与える可能性があることが観察されています（Kesika et al., 2021）。 これにより、微生物叢を改変する戦略に基づいた新しい治療選択肢への扉が開かれます。

これに関連して、プロバイオティクスは、腸内細菌叢、ひいては腸-脳軸を有益に調節する能力により、認知障害管理の有望な代替品として浮上しています。 ただし、プロバイオティクスの特性は菌株特異的であることに注意することが重要です。これは、そのような特性が帰属する前に、特定の菌株を徹底的に調査する必要があることを意味します (Hill et al., 2014)。

特に 3 つのプロバイオティクス株は、主に in vitro でのこれまでの研究で、腸脳軸の調節と腸管バリアの強化に対して潜在的なプラスの効果を示しています。 これらの株は **L です。 ブレビス** CECT 7480、**L. プランタルム** CECT 7485、および **L. プランタルム** CECT 7481 (L. プランタルム DR7™)。 具体的には：

• L. brevis CECT 7480 は、インビトロ実験研究において高い GABA 産生能力と、日和見病原体に対する広範な拮抗作用を実証しました (Bosch et al., 2012; Ferrés-Amat et al., 2020)。
• L. plantarum CECT 7485は、腸の透過性を改善し、アセチルコリン（ACh）産生の増加を通じて腸-脳軸を調節すると思われ、日和見腸病原体に対する拮抗作用を示しています（Perez et al.、2020）。
• さらに、L. plantarum CECT 7485およびL. brevis CECT 7480は最近、ストレス、不安、うつ病に関連する2つの臨床試験で研究され、有益な効果が示されています（Denysov et al.、2023）。 しかし、これまでのところ、これらの株は、高齢者集団における MCI など、中枢神経系 (CNS) や認知に影響を与える他の病態では研究されていません。
• L. プランタルム CECT 7481 (L. plantarum DR7™) は、in vitro 研究と臨床試験の両方で、セロトニン、キヌレニン、ノルエピネフリンなどの神経伝達物質経路に関与する酵素の制御を介した、プラスの神経調節効果を示しています。 メタボローム分析では、ACh レベルが増加することも実証されています。 さらに、成人におけるL. plantarum Dの投与後、血漿コルチゾールレベルの大幅な低下（Chong et al., 2019）、および酸化ストレスと血漿過酸化の減少（Chong et al., 2019a）が検出されました。 腸-脳軸経路の変化は、成人の腸内細菌組成の変化と相関していた(Liu et al., 2020)。 臨床証拠は、L. plantarum DR7 がストレスや不安に対してプラスの影響を及ぼし、副次的結果として認知機能の改善を示した。 ただし、これらの所見は健康な成人を対象に評価されたものであり、MCI患者に使用するには、その効果を検証するための特別な臨床試験が必要です。

MCI および AD に関与する神経伝達物質回路の重要性を考慮し (Solas et al., 2015)、この臨床試験は、前述の 3 つのプロバイオティクス株の組み合わせを含む栄養補助食品の投与が、認知機能を強化することにより認知機能を改善する大きな可能性があるという仮説を立てています。腸関門を修復し、腸内細菌叢の異常を防ぎ、そして最も重要なことに、腸-脳軸を調節します。

臨床試験は、選択フェーズと実験フェーズの 2 つのフェーズに分かれます。

選択段階 さらに、3 つの菌株は安全性の前提条件 (in vitro、in vivo、および臨床研究で検証済み) を満たしており、EFSA からの QPS (安全性の限定推定) ステータスを取得しているため、臨床研究で肯定的な結果が見つかった場合、選択が容易になります。認知機能低下の進行を防ぐために、MCI患者を対象とした栄養補助食品の将来の商品化が予定されています。

この研究への参加に関心があり、クリニコ・サン・カルロス病院の老年病棟および関連コミュニティセンター（モンクロアおよびチャマルティン）でその特徴について事前に説明を受けている個人は、コンプルテンセ大学薬学部に招待されます。マドリード (訪問 0、V0) 以下を通じて資格基準を評価します。

• 病歴：家族歴、治療、神経疾患/精神疾患、その他の疾患（がんなど）、アルコール依存症の病歴など、選択基準を満たしていることを確認するための健康関連データに焦点を当てた半構造化臨床面接。
• 選択基準を検証するための認知機能評価アンケート: MoCA (Nasreddine et al., 2005)、CDR (Morris, 1993)、および (I)ADL。

適格性が確認されると、参加者には研究のデザインと特徴に関する詳細情報を記載した患者情報シートが渡されます。 主任研究者も口頭で研究の概要を説明します。 質問に答えて理解を確認した後、参加に関心のある人はインフォームドコンセントフォームに署名します。

さらに、参加者は、インフォームド・コンセント・フォームに記載されているように、王政令 1716/2011 に従って、残りの生体サンプルを国立バイオバンク・レジストリーに保管するためのインフォームド・コンセントを提供することも選択できます。

インフォームドコンセントに署名すると、参加者は次のアンケートと資料を受け取り、記入して次回の訪問時に返送する必要があります (V1)。

• 食事研究アンケート（食事頻度アンケート、地中海食の遵守）
• 採便用の容器と説明書
• 加速度計と説明書

V0 の終了時に、初回訪問 (V1) で実行されるさまざまな検査の予約がスケジュールされ、すべてが最長 7 日以内に完了します。

• 血液検査の予約
• MRIの予約
• 脳磁図および神経心理学的検査の予約
• V0で提供されるアンケートや資料の収集、ガイドラインの提供を含むライフスタイル調査の予約。

実験段階

選択訪問 (V0) に続いて、参加者は研究の実験段階の 16 週間の介入期間を開始します。 この期間中、彼らは以下の訪問に参加します。

訪問 1 (V1 (介入期間の最初の訪問))

この訪問中に、研究者は次の研究のための一連の変数を収集します (セクション 7.2.4 で説明)。

• 認知機能研究 (UCM 心理学部): 研究チームの心理学者は、認知機能に関連するデータを収集します。
• 脳磁図・脳波検査、MRI検査が行われます。
• V0 で完了したテスト (MoCA および CDR) に加えて、次のテストが実施されます。
• 認知予備力の評価
• 代表的な認知機能検査
• 機能的能力テスト
• 精神症状検査
• 記憶、言語、実行機能の低下に対する主観的な認識の評価
• 心理社会的パラメータテスト
• 血液分析 (パートナー検査室): 関連する生化学的パラメーターを決定するために、空腹時血液サンプル (最低 8 時間) が収集されます。
• 微生物叢の研究 (UCM 薬学部): 腸内細菌叢の組成を決定するために、便サンプルが収集されます。
• ライフスタイル研究 (UCM 薬学部): 研究者は次のことを行います。
• 食事研究: V0 中に提出されたアンケートを確認します (食事頻度アンケート、地中海食の遵守)。 最初の 24 時間の食事リコールが実施され、参加者にはこのアンケートが 1 週間以内に電話でさらに 2 回繰り返されることが通知されます。
• 人体測定研究: 身体の測定値と組成が記録されます。
• 身体活動の調査: 身体活動は、検証済みのアンケートと加速度計を使用して評価されます。
• 睡眠習慣の調査: 睡眠の質とクロノタイプは、特定のアンケートと加速度計を使用して評価されます。
• その他の健康指標: 生活の質とバイタルサインが測定されます。

これらの研究から変数を収集した後、研究者はランダム化リストに従って参加者に指示を提供します。 具体的には、参加者は今後 16 週間、朝食時に割り当てられた製品を 1 日あたり 1 カプセル摂取するように指示されます。 また、この期間中は通常の食事とライフスタイル（身体活動、睡眠）を維持するよう指導されます。 必要なカプセルは最後の訪問まで提供されます。

最後に、参加者はアンケートと資料を受け取り、記入して最終訪問時に返却します (V5)。

• 食事研究アンケート（食事頻度アンケート、地中海食の遵守）
• 採便用の容器と説明書
• 加速度計と説明書
• 治療アドヒアランスおよび耐性管理シート
• 副作用管理シート

最終訪問日は、フォローアップの電話と、1 週間前に電話またはメッセージで送信されるリマインダーで確認され、V1 から完成した資料を持参する必要性が強調されます。

V2 (第 4 週); V3 (第 8 週); V4 (第 12 週)

電話によるフォローアップ面接は次の内容で実施されます。

• 製品への密着性と耐性の評価
• 有害事象の記録

訪問 5 (V5) (16 週目) (介入期間の最後の訪問):

この訪問中、研究者らは初回訪問（V1）時に取得したのと同じ変数を収集し、介入期間の終わりに認知機能評価を完了するためにV0中に実施されたMoCAおよびCDRテストも実施します。

さらに、以下のことも実施されます。

• 製品消費の順守と許容度の評価
• 有害事象の記録

データベースは Excel で作成され、二重入力システムと不一致やエラーを防止および検出するためのフィルターが装備されます。 情報はクリーンアップされ、検証されます。 記述分析は、定性的データ (絶対頻度、パーセンテージ) および定量的データ (平均、標準偏差、中央値、四分位範囲、最小値、最大値) に対して実行されます。 グループ間の差異はカイ二乗検定を使用して分析され、定量的データは変数の分布に基づいた適切な検定で分析されます。

データは、マドリードのコンプルテンセ大学の情報技術および技術ユーザー サポート領域の研究支援ユニットと協力して、研究の主任研究者によって盲検法で分析されます。 統計分析は、SPSS バージョン 29.0 (SPSS Inc.) 以降のバージョンを使用して実行されます。