만성 B형 간염 간암의 생물학적 기초

2) 목표

간세포 암종(HCC)은 전 세계적으로 암 관련 사망의 두 번째 주요 원인입니다(Jemel et al CA Cancer J Clin 2011). API(아시아인 및 태평양 섬 주민) 미국인은 만성 B형 간염(CHB)의 높은 유병률로 인해 HCC 발병률 및 HCC 관련 사망률과 관련하여 지속적으로 가장 큰 영향을 받는 인종 그룹입니다. API는 CHB 관련 HCC의 가장 큰 부담을 짊어지지만 아시아 인종 그룹에 따라 결과의 차이가 존재합니다. 연구자들은 이전에 1998년에서 2007년 사이에 HCC로 진단된 아시아계 조상의 캘리포니아 주민 6,068명의 인종적으로 세분화된 데이터를 분석했습니다(Ryerson et al Cancer 2016). 원인별 사망률은 라오스/몽족에서 유의하게 더 높았습니다(위험비, 2.08; 95% CI, 1.78-2.44). 캄보디아 환자(위험비 1.26; 95% CI, 1.06-1.51). 특히, 라오스/몽족 환자는 어린 나이에 더 진행된 간세포암종 단계를 나타냈는데, 이는 이러한 차이가 진단이나 발표의 지연과 관련이 있는 것이 아니라 오히려 간세포암종 행동의 생물학적 차이와 관련이 있음을 시사합니다. 사실, 바이러스 요인과 숙주 면역 반응은 모두 CHB 관련 HCC의 예후와 관련이 있습니다. 현재 조사관은 B형 간염 바이러스(HBV)에 감염된 몽족/라오스인, 중국인, 베트남인을 대상으로 이러한 잠재적 메커니즘을 조사하고 있습니다. 일단 HCC가 발생하면 불량한 결과와 관련된 메커니즘을 평가하는 것과는 대조적으로, 현재 제안은 HCC 발생 마커를 식별하기 위한 목적으로 조사관이 수집한 데이터를 기반으로 합니다.

중심 가설은 HBV 관련 HCC가 발생하기 전에 HCC가 있거나 없는 CHB 환자를 구별할 수 있는 전혈의 유전자 발현 프로필에 반영된 특정 생물학적 반응이 있다는 것입니다.

이 가설을 테스트하기 위해 조사자는 다음과 같은 특정 목표를 수행합니다.

파트 1(목표 #1): 아시아계 미국인의 확립된 HCC 위험 인자와 바이러스 서열 및 숙주 유전자 발현 시그니처를 연결합니다.

이 목적을 달성하기 위해 동의한 10명의 피험자로부터 혈액 샘플을 채취합니다. 이 샘플에서 추출한 DNA는 아시아 인종 그룹에 걸쳐 바이러스 서열과 유전자 발현 프로파일을 비교하는 진행 중인 연구의 일부로 사용될 것이며 조사관은 HCC 위험 요인이 높거나 낮은 개인(즉, 간경화, 높은 HBV 바이러스 부하, 남성과 성관계를 가진 남성).

파트 2(목표 #2): HCC 관련 바이러스 서열 및 인간 단백질에 대해 HBV 관련 HCC 조직을 조사합니다. 개인 건강 정보가 없는 슬라이드의 HCC 조직 섹션은 UC Davis Cancer Center Biorepository(CCB) 및 Cooperative Human Tissue Network를 포함하되 이에 국한되지 않는 기타 바이오뱅크에서 얻을 수 있습니다. 이전에 저장한 HCC 조직에서 조사관은 1) 종양 조직에서 HBV DNA를 추출 및 시퀀싱하고 비 HCC HBV 시퀀스 컬렉션과 비교하고 2) 전혈 유전자 발현 분석에서 식별된 유전자에 해당하는 단백질에 대해 조직을 염색합니다.

3) 배경

SEER(Surveillance Epidemiology and End Results) 데이터베이스의 분석에 따르면 API는 2006-2010년에 100,000명당 4.7명으로 연령 조정 간암 발생률이 가장 높았고 히스패닉(3.2), 흑인(2.5), 백인(1.4)이 그 뒤를 이었습니다. ). 가장 높은 연령별 HCC 발병률은 65세 이상의 API에서 100,000명당 54.7명이었습니다. 이 분석에서 API의 HCC 관련 사망률은 다른 인종 그룹에 비해 가장 높았습니다(100,000명당 2.8명, 백인의 경우 100,000명당 0.9명)(Altekruse et al. AJG 2014). HCC에 대한 이러한 증가된 위험과 API 중 합병증은 만성 B형 간염(CHB)에 기인합니다(El Sarag et al. 소화기학 2012). CHB 환자의 경우 B형 간염 바이러스(HBV) DNA 수치 증가와 HCC 및 간경화 발병률 증가 사이에 강한 연관성이 있습니다(Chen et al. JAMA 2006). HBV 전파의 가장 일반적인 경로는 감염된 산모에서 영아에게 수직적이며 HBV 풍토병이 높은 지역에 사는 사람들 사이에서 유아기에는 수평적입니다(Nguyen et al. J Cancer Educ 2007) 예방 백신의 가용성에도 불구하고 전 세계 백신 적용 범위는 75%에 불과하며 전 세계적으로 HBV에 감염된 약 3억 5천만 명의 질병 부담을 해결하지 못합니다(Meireles et al. 세계 J Hepatol 2015).

바이러스 요인에는 바이러스 부하, 유전자형 및 특정 돌연변이가 포함됩니다. 특히 유전자형 B는 HCC의 조기 발병 및 불량한 예후와 관련이 있습니다(Yin et al. Carcinogenesis 2008) A1762T/G1764A 기저 코어 프로모터 돌연변이 및 Pre-S 영역 결실을 포함한 바이러스 돌연변이는 또한 불량한 HCC 결과와 관련이 있으며 숙주 면역 반응에 의한 선택 및 전염증성 사이토카인에 의한 내인성 시티딘 데아미나제 활성화의 결과일 수 있습니다. 예를 들어 TNF-알파) NFkappa-B에 의해 유도되어 G-to-A 과돌연변이(Chen et al. Eur J 암 2012). 다른 면역 반응 경로는 자연 살해 세포, CD8+ T 세포, 조절 T 세포의 존재뿐만 아니라 종양 미세 환경(Bowlus CL, Tumor Immunology 2007)

HBV 시퀀싱에 대한 NGS의 적용 가능성:

NGS는 시티딘 데아미나제 활성의 가능한 지표로서 유전자형 및 돌연변이의 빈도, 바이러스 다양성 및 돌연변이 비율을 포함하여 여러 수준에서 바이러스 요인을 조사할 수 있게 합니다. 또한 이 기술은 전사체 프로파일링을 기반으로 면역 반응을 탐색하는 데 사용될 것입니다. 또한 HBV 관련 결과 및 전사 프로필 내 SNV의 연관성 분석과 관련된 T 세포 수용체 사용 및 HLA 대립 유전자에 대한 분석도 수행할 수 있습니다.

예비 데이터:

R21에 따라 조사관은 치료 경험이 없는 중국인, 베트남인, 라오스인/몽족 환자의 혈액 샘플에 NGS를 활용하여 라오스인/몽족 기원으로 분리될 수 있는 전혈의 바이러스 서열과 발현 프로필을 식별하고 따라서 가난한 사람들을 설명하는 후보가 될 수 있습니다. 이 모집단의 HCC 결과. 또한, 이 데이터는 알려진 HCC 위험 인자와 관련된 바이러스 서열 및 발현 패턴을 식별하는 데 사용될 수 있으며 HBV 감염자 사이에서 HCC 감시를 위한 잠재적인 바이오마커로 개발될 수 있습니다. 이 바이오마커 개발 프로세스의 첫 번째 단계는 HBV 관련 HCC 환자 집단에서 테스트가 필요하며 이 프로토콜의 추진력입니다. 이 연구에 대한 등록이 완료되었으며(n = 99) 현재 혈액 샘플을 분석하고 있습니다.

연구자들은 특정 질병 상태와 관련된 분자 프로파일을 식별하고 HBV 병인과 관련된 분자 경로의 초고감도 검출을 제공하기 위한 혈액 유전체학의 힘을 입증하기 위해 전혈 샘플의 전사체 프로파일링을 위해 NGS를 사용하는 파일럿 연구를 수행했습니다(Caruccio et al. 방법 Mol Bol 2011). 건강한 개인 3명(중국인 2명, 필리핀인 1명), HCC가 없는 HBsAg 양성 피험자 6명(중국인 5명) , 베트남인 1명), HCC가 있는 HBsAg 양성 라오스 피험자 1명. HCC 환자는 634개의 차별적으로 발현되는 유전자로 정의되는 독특한 발현 시그니처를 가지고 있었습니다. 면역 세포 트랜스크립톰 데이터를 사용한 173개 유전자 과발현 클러스터의 메타 분석(Li et al. Bioinformatics 2009)는 이 "HBV 관련 HCC 시그니처"가 두드러진 호중구 및 대식세포 구동 구성요소뿐만 아니라 HCC에 대한 더 나쁜 예후와 관련된 조절 T 세포(TReg) 관련 유전자의 상향 조절된 발현을 포함하고 있음을 밝혔습니다. Tepper et al ICG Americas 2012 국제 컨퍼런스). 유전자 온톨로지 분석은 염증을 포함하여 HCC 병인과 일치하는 과도하게 표현된 프로세스를 나타냅니다. 연구자들은 HBV 관련 HCC 환자의 더 큰 코호트에서 이 "HBV 관련 HCC 시그니처"를 검증할 계획입니다.

예비 데이터에 대한 추가 정보는 이 제출에 첨부된 보조금에서 찾을 수 있습니다.