Влияние добавок железа на уровень B-Phe у пациентов с фенилкетонурией в течение 3 лет исследования (ISPEK)

Введение: Фенилкетонурия (ФКУ) (OMIM 261600) — аутосомно-рецессивное врожденное метаболическое заболевание, встречающееся в среднем около 1:10 000 новорожденных, характеризующееся накоплением фенила в организме вследствие дефицита ЛАГ. В большинстве случаев (98%) ФКУ/ HPA возникает в результате мутаций гена фенилаланингидроксилазы (PAH), который расположен на хромосоме e. 12q24.1, что приводит к недостаточной или отсутствующей активности фермента ФАГ (EC 1.14.16.1). Остальные случаи (2%) возникают из-за блокады метаболизма тетрагидробиоптерина (ВН4) – кофактора ФАГ. Нормальный уровень Phe в крови составляет <120 ммоль/л. В зависимости от концентрации Phe в крови дефицит ФАГ можно разделить на классическую ФКУ (Phe >1200 мкмоль/л), легкую ФКУ (Phe = 600-1200 мкмоль/л) и легкую гиперфенилаланинемию. (МХП) (Phe = 120 - <600 мкмоль/л). Высокая концентрация Phe в крови (>360 мкмоль/л) в неонатальном возрасте может привести к необратимому повреждению головного мозга, но его можно предотвратить путем ранней диагностики благодаря скринингу новорожденных и началу диеты с ограничением Phe.

Основным источником натуральных питательных веществ, особенно железа (Fe), витамина В12 (вит В12) и витамина D (вит Д), в обычном детском питании являются продукты, содержащие белки; таким образом, его ограничение при диетическом лечении ФКУ может привести к дефициту необходимых элементов, анемии, необратимым неврологическим дефектам и задержке в развитии. В настоящее время эти элементы можно дополнить с помощью специальной диетотерапии. Диагноз HPA ставится на основании повышенной концентрации Phe в крови в повторном образце крови, подтвержденной генетически. Верхний референсный предел содержания фена в цельной крови или плазме у новорожденных составляет 120 мкмоль/л(9). Всем пациентам при скрининге новорожденных с уровнем Phe в плазме более 360 мкмоль/л необходимо как можно раньше начать ограниченную и контролируемую диетотерапию с низким содержанием Phe (RLCPDT), чтобы предотвратить вышеупомянутые осложнения. Диетическая схема включает также другие добавки докозагексаеновой кислоты (DHA), витаминов и других питательных веществ. Fe пока не считается рекомендуемой добавкой для пациентов с ФКУ, хотя большинству наших пациентов заменяют этот микроэлемент из-за выявления анемии. Исследователи отметили, что у пациентов, получавших заместительную терапию железом, уровень Phe в плазме соответственно снизился. Это можно предположить, учитывая тот факт, что исследователи провели это исследование, чтобы подтвердить связь добавок железа с уровнями P-Phe.

Фермент PAH является тетрамерным и содержит три основных домена, включая регулятор, небольшую тетрамеризацию и каталитический домен, который содержит активное место, которое включает в себя протезную группу железного железа (FE), связанную с тремя заряженными аминоцидными остатками. Таким образом, что фермент PAH выполняет свою функцию гидроксилирования правильно, это требует присутствия железа, кислорода и кофактора, тетрагидробиоптерина (BH4) до гидроксилазы PHE в тире.

На основании этих структурных и функциональных соображений предполагается, что добавки железа у пациентов с фенилкетонурией могут повысить активность фермента ФАГ, следовательно, снижая уровень Phe в крови. По мнению исследователя, это исследование является первым, которое было применено к пациентам с ФКУ.

Лекционные исследования, касающиеся железа и фенилкетонурии: Дж. Л. Бодли в ретроспективном исследовании выявил высокую частоту низких запасов железа у 53 пациентов с фенилаланиновой диетой. Эти результаты позволяют предположить, что современное диетическое лечение ФКУ связано с повышенным риском истощения запасов железа.

Mackler et al. Проанализировали преклиническое исследование наблюдения, свидетельствующие о том, что концентрации фенилаланина в плазме (P-PHE) были заметно повышены у крыс с дефицитом железа и, по-видимому, варьировались непосредственно со степенью дефицита железа. Концентрации PHE в плазме вернулись к контрольным уровням в течение одной недели после обработки железа с дефицитом железа. Повышенные уровни P-PHE, вероятно, не были выявлены дефицитом ПАУ печени, поскольку было обнаружено, что уровни активности фермента являются нормальными в печени анализируемых животных.

Gropper SS и др. Продемонстрировали, что концентрации P-PHE связаны с содержанием железа печени в мышиной модели для фенилкетонурии.

Комбинация железа бисглицината (FB) и альгината натрия (SA) является первым выбором в качестве добавления железа: исследователь провел прочные исследования по различным типам добавок железа, доступных в коммерции. После глубокого анализа были проведены хелаты аминокислот железа, поскольку группа железных глицинатных хелатов (IGC) разработана для использования в качестве укреплений пищи и терапевтических средств при профилактике и лечении анемии дефицита железа. Поглощение железа из железа бисглицината (FB) регулируется с помощью тех же физиологических механизмов, что и другие неорганические формы железа. После перорального введения FB вносит вклад в кишечный внутрипросветный пул неорганического не-гемового железа и поглощается в целости клетки слизистой оболочки кишечника. Впоследствии он гидролизуется в его железо и компоненты глицина. Его безопасность и максимальное допустимое потребление были рассмотрены и оценены несколькими научными комитетами.

Важным фактором, который помогает нам выбрать FB, является то, что он использовался в укреплении продуктов, обеспечивающих от 23 до 23 мг/день дополнительного пищевого железа без каких -либо сообщений о побочных эффектах. Кроме того, FB был хорошо переносится в качестве пищевой добавки железа, обеспечивающей приблизительно от 15 до 120 мг железа в день, в различных группах населения, включая взрослых мужчин, беременных, не беременных женщин с нормальным уровнем железа и особенно среди железа. -Дефицитные маленькие дети.

Стабильность FB (добавлением продукта к молоку, йогурту, кукурузной муке и маргарину) и отсутствия потенциала для взаимодействия FB с этими продуктами (перекисное окисление липидов) была протестирована в разное время/температуру. Нет никаких доказательств, указывающих на возникновение реакций FB с компонентами этих продуктов, и подтверждается, что FB обеспечивает очень доступный и стабильный источник железа.

FB защищен от взаимодействия с диетическими ингибиторами поглощения железа, такими как фитат, а поглощение железа в этой молекуле обычно понижается по мере увеличения запасов железа.

Было продемонстрировано, что комбинация пероральных добавок (FB + SA) является более биодоступной, безопасной и вкусной по сравнению с одной FB. Поскольку (FB + SA) присутствуют в соотношении 1:1, каждая маленькая частица порошка имеет одинаковую морфологию и количество двух разных совместно обрабатываемых веществ. Новое «совместно обработанное соединение», полученное с помощью технологии распылительной сушки, придает железному порошку увеличенную и однородную поверхность и, следовательно, быстрое и более обширное всасывание железа вместе с повышенной защитой желудочно-кишечного тракта. В то же время равномерное присутствие СК в этом продукте позволяет FBC высвобождаться более постоянно и медленно, когда он противостоит одному FB, и позволяет рецепторам двухвалентного переносчика металлов 1 (DMT-) лучше усваивать железо. Насыщение рецептора DMT1 может быть пределом биодоступности железа при пероральном приеме, который может быть превышен ФЕРАЛГИНОМ (FB + SA). Фактически, медленная доступность железа при введении FB+ SA может привести к ненасыщенности ДМТ-1, что приведет к увеличению биодоступности железа.

Железный бисглицинатный анализ продукта: с учетом нашего предыдущего клинического опыта только с FB в предыдущие годы и наш опыт работы с новым соединением, содержащим вещество, высыхающее на распыление, (FB + SA название Felergine) в соотношении 1-1, поддерживающей большую биоализованность. и меньше желудочно -кишечных побочных эффектов для этого исследования, которые исследователи решили использовать только шипучих пакетиков для леса.

Наш клинический опыт также был подтвержден опубликованной литературой. Исследователь решил исключить пероральные формы капсул и таблеток, поскольку детям трудно глотать эти препараты, и исключить пероральные капли, поскольку они не адаптированы для подростков и взрослых пациентов, что приводит к низкой соблюдению режима лечения на дому, особенно при длительном применении. пакетики, содержащие Фералгин (FB + SA), соединение более биодоступное, с высокой желудочно-кишечной переносимостью, более вкусное и способное повысить соблюдение режима лечения на дому, особенно при длительном применении, решили исследователи. использовать только доступный препарат Фералгин, содержащий шипучие пакетики с 14 мг элементарного железа в зависимости от возраста и веса пациента.

Пациенты и методы:

• Исследовательская популяция Исследование было проведено в виде 3 -летнего продольного интервенционного рандомизированного параллельного клинического исследования с участием 84 пациентов с пку (Группа B) Без добавок железа.
• Размер выборки и рандомизация Размер выборки рассчитывался с учетом продолжительности исследования, доступности, гетерогенности пациентов и наших ресурсов. Обнаружить изменение средних уровней Phe в плазме на 20% или более в конце периода вмешательства в группе, получавшей железо, по сравнению с контрольной группой. Для этого было набрано 84 ребенка (по 42 на группу).

Сгенерированная компьютером последовательность блоков распределяла случайно распределенных субъектов по двум разным группам по 42 пациента в каждой. Независимый исследователь разработал последовательность рандомизации отдельно от исследователя. https://www.sealedenvelope.com использовался для создания списков рандомизации. Дети были распределены в группу вмешательства (А) или в контрольную группу (Б) по спискам, стратифицированным по полу и возрасту (3-6, 7-10, 11-14, 15-25 лет), блоками по 4 единицы.

Установка участников: исследование было одобрено итальянским комитетом по этике (Asst -Santi Paolocarlo), протокол №: 43183/2019 в дату 10.10.2019 -и все участники или их юридический представитель одобрили и подписали информированное письменное согласие День регистрации. Все участники исследования удовлетворили право на участие в исследовании.

Все экспериментальные процедуры соответствовали Хельсинкской декларации, а все оценки проводились обученным медицинским персоналом. В настоящем исследовании были обследованы пациенты с фенилкетонурией в возрасте от 3 до 25 лет, диагностированные и наблюдаемые ASST Санти Паоло и Карло, педиатрическое отделение больницы Сан-Паоло в Милане, Региональный центр Ломбардии.

Продолжительность приема препаратов железа длилась 3 последовательных месяца для каждого пациента в группе А. 3 клинических и гематологических контроля проводились в Т0 (день включения), Т3 (3 месяца от Т0) и Т6 (6 месяцев от Т0). В это исследование вошли 84 ребенка (A = 42) из ​​железной группы и (B = 42) из ​​контрольной группы. Согласно нашему активному протоколу в Метаболическом центре, пациент должен каждый месяц сдавать один образец крови / карту Гатри для измерения только уровней Phe, Tyr и соотношения Phe/Tyr с помощью стандартизированных методов. Это позволяет исследователю добавлять 4 образца капель крови, собранных с помощью карты Гатри (Т1, Т2, Т4 и Т5) для каждого пациента в течение длительного исследования. Теперь ясно, что у каждого участника были взяты образцы крови на Т0, Т3 и Т6, а также взяты образцы капель крови на Т1, Т2, Т4 и Т5 с использованием карты Гатри (TG). Сгенерированная компьютером последовательность блоков уравновесила случайно распределенных субъектов на две разные группы по 42 пациента. Исследователь, создавший последовательность рандомизации, был независим от исследовательского персонала. Расчет калорий и составление диеты производятся в соответствии с «Справочными уровнями потребления питательных веществ и энергии для населения Италии (LARN)» и RDA (Рекомендуемая суточная норма США). Пациенты были проинформированы через форму согласия обо всех деталях исследования. Исследователь пояснил, что добавки железа давались пациентам с целью изучения уровней «Phe», окислительного стресса и воспалительных реакций, а не для лечения анемии до включения в это исследование.

Нормальные значения анализа крови (Asst-Santi Paolo и Carlo-Milan): фенилаланин phe umol/l (n.v <120), тирозин тир umol/l (N.V 30-120), отношение PHE/Tyr (N.V <0,9) вмешательство и Добавки: количество дополнительного железа было решено для пациентов в соответствии с ежедневными требованиями (8-18 мг / день), согласно LARN 2012 и (RDAS) для железа. Это исследование также учитывало, что рекомендация Национального института здравоохранения железом пищевой добавки листа в качестве ссылки на расчет дозы железа для наших кандидатов, потому что эта доза не против LARN и более практично.

Применяются минимальные значения RDA, которые совпадают в пределах ежедневных ограничений LARN. (7 мг-18 мг железа в день). Применяя минимальную рекомендованную дозу RDA, которая может удовлетворить ежедневную потребность в железе по возрасту, приближая ее к адекватной для клинической дозы, вводимой пероральной точки зрения один раз в день (например, 1,98 г ==> 2 г, 1,53 г ==> 1,5 г). Принимая во внимание железо, добавляемое в диетическую терапию с низкой питанием PHE, чтобы не превышать максимальную ежедневную дозу, требуемую возрастом и полом в соответствии с LARN и RDA.

Пациентам, включенным в группу приема препаратов железа (группа А), бесплатно предоставлялись общие дозы на 3 месяца. Стоимость железа, допускаемая исследователем. Торговое название добавки было сохранено анонимным во избежание конфликта интересов и любой формы рекламы.

Число пациентов в группе А (42 пациента), которые потребляли железо из 1 мешка (14 мг/день), составило 26 пациентов (61,9 %), из которых 18 мужчин и 8 женщин, по сравнению с пациентами, которые потребление 1 мешок. Альтернативный день (14 мг/каждые 2 дня) = (7 мг/день- ½ мешка/день) составляли 16 пациентов (38,1%) из них 9 мужчин и 7 женщин.

Статистический анализ: описательные данные были представлены как среднее значение (стандартное отклонение [SD], медиана (межквартильный диапазон [IQR] 25-й 75-й процентиль) или количество наблюдений и процент. Тест Shapiro Wilk был использован для оценки распределения. Продольные изменения в параметрах PHE и окислительного напряжения, в группе, между и внутри субъектной изменчивости были протестированы с использованием t-критерия студента для парных данных и теста Уилкоксона, когда это необходимо. Были проведены одномерные сравнения между вмешательствами и контрольными группами: для непрерывных переменных с помощью T-критерия непарного студента или теста Манна-Уитни и/или анализа дисперсии для повторных измерений; Чтобы оценить различия между двумя группами для непрерывных переменных, исследователи использовали тест Манна Уитни, ANOVA повторяла меру, когда это необходимо. Был проведен множественный бинарный анализ логистической регрессии для оценки зависимости независимых переменных от зависимых переменных. Тестовая модель Friedman корректируется с учетом смешанных факторов, использовалась для оценки влияния добавки железа на уровни PHE в плазме и для оценки соответствующего отношения шансов (OR) и его 95% доверительного интервала. Был рассмотрен уровень статистической значимости составляет p ≤ 0,05 (двусторонний тест). Статистический анализ был выполнен с помощью SPSS, версия 25.0 (SPSS Inc, Чикаго, Иллинойс) для Windows (Microsoft Corporation, Redmond, WA).