斯洛文尼亚孕妇的酒精和大麻使用情况

本研究旨在确定斯洛文尼亚孕妇中酒精和大麻使用的流行情况。 孕期饮酒和吸毒对胎儿有显著影响，并导致短期和长期健康后果。 最严重的后果之一是胎儿酒精综合征（FAS），其特征为先天性异常、认知障碍和生长缺陷。 产前酒精暴露的另一个健康影响是胎儿酒精谱系障碍（FASD），其特征为中枢神经系统受损，导致行为和认知问题、注意力缺陷障碍、执行功能障碍和记忆问题。 因此，受母亲酗酒影响的儿童学业表现较差、受教育程度较低、精神障碍、酒精和药物使用率较高、犯罪率较高、失业率较高以及其他给个人和社会带来负担的问题。 孕期吸毒影响母亲和胎儿，并与围产期问题、流产、早产、低出生体重、小头围和先天性畸形密切相关。 孕期母亲吸毒会导致新生儿戒断综合征；还会影响胎儿大脑发育，可能导致长期的神经精神问题。 斯洛文尼亚孕妇中酒精和药物使用的流行情况此前尚未得到研究。

成人胃肠道中微生物密集分布。 微生物群代表了当前微生物属和物种（主要是细菌）的分类清单，而在更广泛的意义上，微生物组涵盖了肠道中所有微生物（细菌、古菌、真菌、原生动物、病毒、可移动遗传元件）及其功能基因和代谢物，其组成在个体间差异很大，取决于观察的分辨率。 出生时，儿童的胃肠道微生物细胞密度较低，因为选择性压力网络仅在接触母体分泌物、食物和环境后才开始发展。 这些压力包括来自母乳或婴儿配方奶的微生物发酵产物、基因表达和微生物竞争，从而促进微生物组的动态发展。 出生后，多种因素影响婴儿肠道微生物组的发展，包括分娩方式、喂养类型、早产、抗生素使用和其他环境因素。 越来越多的证据也指向产前因素的影响，如妊娠期糖尿病和肥胖、感染、压力和母亲饮食。 越来越多的研究进一步表明，孕期和幼儿期微生物群的改变可以通过肠脑轴影响大脑发育和未来行为。 饮酒对肠道微生物群的影响主要在成人中研究，观察到微生物群α多样性降低。 产前酒精暴露可能主要通过酒精诱导的母体微生物群改变以及随之而来的营养吸收影响新生儿的微生物群。 胎粪分析代表了专门研究影响微生物组的产前因素的独特机会，因为产后因素不影响胎粪微生物组。 Wang及其同事通过分析母亲孕晚期粪便样本和新生儿出生后48小时内的样本，研究了母婴对。 他们证明，饮酒母亲的微生物群组成及其新生儿的微生物群与母亲不饮酒的母婴对相比存在显著差异。 仅有少数动物模型研究证实，孕期母亲摄入含酒精饮食的成年后代的肠道微生物群存在差异。 迄今为止，尚未有已发表的研究描述母亲吸食大麻的新生儿胎粪微生物组特征。

方法：将与斯洛文尼亚国家公共卫生研究所、卢布尔雅那大学医学院法医学研究所（IFM）、约瑟夫·斯特凡研究所和卢布尔雅那大学医学中心儿科诊所新生儿科临床部门合作，使用三种不同方法调查孕期酒精和大麻使用的流行情况：

1. 将在全国代表性胎粪样本中进行横断面研究。 胎粪样本将从斯洛文尼亚的产科医院收集。 将在胎粪样本中测定酒精和非法药物的生物标志物。 研究样本量将根据斯洛文尼亚人口、每年出生人数以及孕期酒精和药物使用的估计流行率计算。 胎粪样本将匿名收集。 出生后第一天，由照顾新生儿和母亲的专业人员将含有胎粪的尿布收集在特殊废物袋中。 用于胎粪取样的尿布将从袋子中随机取出；样本将标有序列号。 新生儿性别、胎龄（足月/早产）、出生方式（阴道/剖腹产）、分娩期间抗生素使用和母亲慢性疾病的数据将匿名收集，不含任何其他个人或时间数据。 将有一个来自一家产科医院的100个胎粪样本的特殊组，我们将配对母亲的问卷和胎粪样本。 为此，我们将征求母亲的许可。 此处也将不收集个人数据，胎粪样本和母亲问卷将通过代码配对。 样本将在IFM毒理学实验室分析。 本研究将在斯洛文尼亚引入一种新的胎粪检查分析方法。
2. 将在斯洛文尼亚产科医院进行全国性生活方式调查，包括孕期酒精和药物使用问题。 调查将匿名进行，与胎粪取样无关；参与调查为自愿。 在收到关于研究目的、确保匿名性的方法和收集方法的信息后，女性将获得在线调查的访问权限。
3. 微生物组分析：所有酒精和大麻代谢物检测呈阳性的胎粪样本，以及每个阳性胎粪样本对应的两个阴性胎粪样本，将纳入胎粪微生物组组成分析。 在研究的最后部分——微生物组比较中，所有酒精或大麻代谢物阳性的胎粪样本将被纳入。 微生物组分析将在研究的最后阶段，在人类百万微生物组项目联盟和斯洛文尼亚代谢组学数据库（筹备中）框架内进行。 从宏基因组测序获得的分子数据将在斯洛文尼亚超级计算基础设施（Vega, Maister）上，使用跨学科小组在超级计算网络上开发和使用的工具进行分析。 我们将生成细菌、古菌、真菌、原生动物和DNA病毒的分类矩阵；多样性矩阵（35个多样性指数）；功能基因矩阵（2000万组）；酶反应矩阵（50万类别）；代谢通路矩阵（10万变量）；和代谢物矩阵（1000变量）。 收集的数据及其从分子格式转换为数值格式，将作为机器学习（标准化、归一化、使用不同算法和超参数评估样本分离和分类性能）、生物标志物网络识别（n > 100）和肠道微生物组的非参数统计分析的基础。

统计分析：将使用IBM SPSS Statistics 25软件包进行统计数据分析。 将使用描述性统计方法描述参与调查的产后妇女群体并总结收集的数据。 孕妇中酒精或大麻使用的流行率将根据酒精或大麻代谢物阳性的胎粪样本数量计算。 基于自我报告的酒精和大麻使用流行率将单独计算。 从微生物组分析获得的分子数据将转换为数值数据，用于机器学习（标准化、归一化、使用不同算法和超参数评估样本分离和分类性能）、生物标志物网络识别（n > 100）和肠道微生物组的非参数统计分析，由跨学科小组进行。 然后，将在酒精和大麻代谢物阳性的胎粪样本组与这些代谢物不存在的胎粪样本组之间进行统计比较。

预期结果：我们旨在确定斯洛文尼亚孕妇中酒精和药物使用的流行情况。 从胎粪样本获得的酒精和药物代谢物数据将与调查结果进行比较，调查中酒精和药物使用流行率将通过自我报告确定。 通过这种方式，我们可以评估自我报告的可靠性。 研究结果将使我们能够评估斯洛文尼亚FAS和FASD的流行情况，帮助我们制定策略，提高专业人员和公众对孕期酒精和药物使用的流行情况和后果的认识，规划针对孕妇目标群体的预防措施和干预，建立FAS和FASD诊断团队。 关于微生物组，我们预计酒精或大麻检测呈阳性的胎粪样本与阴性样本的微生物组组成存在显著差异（考虑性别、胎龄、分娩期间抗生素暴露和慢性疾病的存在）。