Consumo de Álcool e Cannabis entre Mulheres Grávidas Eslovenas

O objetivo do estudo é determinar a prevalência do consumo de álcool e canábis entre as grávidas eslovenas. O consumo de álcool e drogas durante a gravidez tem efeitos significativos no feto e consequências para a saúde a curto e longo prazo. Uma das consequências mais graves é a síndrome alcoólica fetal (SAF), caracterizada por anomalias congénitas, comprometimento cognitivo e défices de crescimento. Outro efeito na saúde da exposição pré-natal ao álcool é o espectro de perturbações do desenvolvimento relacionadas com o álcool (EPDAA), caracterizado por comprometimento do sistema nervoso central, levando a problemas comportamentais e cognitivos, perturbação de défice de atenção, disfunção executiva e problemas de memória. Consequentemente, as crianças afetadas pelo abuso de álcool materno têm pior desempenho escolar, menor nível de educação, perturbações psiquiátricas, taxas mais elevadas de consumo de álcool e drogas, taxas de criminalidade mais altas, desemprego e outros problemas que representam um fardo para os indivíduos e a sociedade. O consumo de drogas durante a gravidez afeta tanto a mãe como o feto e está intimamente associado a problemas perinatais, abortos espontâneos, partos prematuros, baixo peso ao nascer, perímetro cefálico pequeno e malformações congénitas. O consumo de drogas materno durante a gravidez causa síndrome de abstinência neonatal; também afeta o desenvolvimento cerebral fetal, o que pode levar a problemas neuropsiquiátricos a longo prazo. A prevalência do consumo de álcool e drogas entre as grávidas na Eslovénia ainda não foi estudada.

O trato gastrointestinal adulto é densamente povoado por microrganismos. A microbiota, que representa um inventário taxonómico dos géneros e espécies microbianos presentes - principalmente bactérias - e, num sentido mais amplo, o microbioma, que abrange todos os microrganismos (bactérias, arqueias, fungos, protozoários, vírus, elementos genéticos móveis) juntamente com os seus genes funcionais e metabolitos presentes no intestino, varia consideravelmente na sua composição entre indivíduos, dependendo da resolução da observação. No nascimento, o trato gastrointestinal de uma criança tem uma densidade mais baixa de células microbianas, pois uma rede de pressões seletivas começa a desenvolver-se apenas após o contacto com secreções maternas, alimentos e o ambiente. Estas pressões incluem produtos fermentativos microbianos derivados do leite materno ou fórmula infantil, expressão genética e competição microbiana, levando ao desenvolvimento dinâmico do microbioma. Vários fatores influenciam o desenvolvimento do microbioma intestinal infantil após o nascimento, incluindo o modo de parto, o tipo de alimentação, prematuridade, uso de antibióticos e outros fatores ambientais. Evidências crescentes também apontam para a influência de fatores pré-natais, como diabetes gestacional e obesidade, infeções, stress e dieta materna. Um número crescente de estudos demonstra ainda que uma microbiota alterada durante a gravidez e a primeira infância pode afetar o desenvolvimento cerebral e o comportamento mais tarde na vida através do eixo intestino-cérebro. O impacto do consumo de álcool na microbiota intestinal tem sido estudado principalmente em adultos, nos quais foi observada uma redução na diversidade α da microbiota. A exposição pré-natal ao álcool pode influenciar a microbiota do recém-nascido principalmente através de alterações induzidas pelo álcool na microbiota materna e, consequentemente, na absorção de nutrientes. A análise do mecónio representa uma oportunidade única para estudar exclusivamente fatores pré-natais que afetam o microbioma, uma vez que fatores pós-natais não influenciam o microbioma do mecónio. Wang e colegas estudaram pares mãe-recém-nascido analisando amostras de fezes maternas no terceiro trimestre e amostras neonatais nas primeiras 48 horas após o nascimento. Eles demonstraram diferenças significativas na composição da microbiota das mães que consumiam álcool e na microbiota dos seus recém-nascidos em comparação com pares mãe-recém-nascido em que as mães não consumiam álcool. Existem apenas alguns estudos em modelos animais que confirmaram diferenças na microbiota intestinal da prole adulta cujas mães foram alimentadas com uma dieta contendo álcool durante a gravidez. Até à data, não foram publicados estudos que caracterizem o microbioma do mecónio de recém-nascidos cujas mães consumiram canábis.

Métodos: A prevalência do consumo de álcool e canábis durante a gravidez será investigada em colaboração com o Instituto Nacional de Saúde Pública, o Instituto de Medicina Forense (IMF) da Faculdade de Medicina da Universidade de Liubliana, o Instituto Jožef Stefan e o Departamento Clínico de Neonatologia da Clínica Pediátrica do Centro Clínico Universitário de Liubliana, utilizando três métodos diferentes:

1. Um estudo transversal será realizado numa amostra nacionalmente representativa de amostras de mecónio. As amostras de mecónio serão recolhidas em maternidades na Eslovénia. Biomarcadores para álcool e drogas ilícitas serão determinados nas amostras de mecónio. O tamanho da amostra do estudo será calculado considerando a população da Eslovénia, o número de nascimentos por ano e a prevalência estimada do consumo de álcool e drogas durante a gravidez. As amostras de mecónio serão recolhidas anonimamente. As fraldas com mecónio serão recolhidas em sacos especiais para resíduos por profissionais que cuidam dos recém-nascidos e das mães no primeiro dia após o nascimento. As fraldas para a amostragem de mecónio serão retiradas aleatoriamente dos sacos; a amostra será etiquetada com um número de série. Dados sobre o sexo do neonato, idade gestacional (maduro/prematuro), tipo de parto (vaginal/cesariana), uso de antibióticos durante o parto e doenças crónicas maternas serão recolhidos anonimamente sem quaisquer outros dados pessoais ou temporais. Haverá um grupo especial de 100 amostras de mecónio de uma maternidade, onde emparelharemos o questionário da mãe e a amostra de mecónio. Para isso, pediremos a permissão da mãe. Aqui também não haverá recolha de dados pessoais; a amostra de mecónio e o questionário da mãe serão emparelhados através de um código. As amostras serão analisadas no laboratório de toxicologia do IMF. Para o estudo, será introduzido na Eslovénia um novo método analítico para o exame do mecónio.
2. Um inquérito nacional sobre o estilo de vida será realizado em maternidades eslovenas, incluindo questões sobre o consumo de álcool e drogas durante a gravidez. O inquérito será anónimo e não relacionado com a amostragem de mecónio; a participação no inquérito será voluntária. As mulheres terão acesso ao inquérito online, após receberem informações sobre o objetivo do estudo, o método utilizado para garantir o anonimato e os métodos de recolha.
3. Análise do microbioma: todas as amostras de mecónio que testarem positivo para metabolitos de álcool e canábis, bem como duas amostras de mecónio negativas por cada amostra de mecónio positiva, serão incluídas na análise da composição do microbioma do mecónio. Na parte final do estudo - a comparação do microbioma - serão incluídas todas as amostras de mecónio positivas para metabolitos de álcool ou canábis. A análise do microbioma será realizada na fase final do estudo no âmbito do consórcio do Projeto Milhão de Microbiomas de Humanos e da Base de Dados de Metabolómica Eslovena (em preparação). Os dados moleculares obtidos a partir do sequenciamento metagenómico serão analisados na infraestrutura de supercomputação eslovena (Vega, Maister) utilizando ferramentas desenvolvidas e empregues na rede de supercomputação pelo grupo interdisciplinar. Geraremos matrizes taxonómicas de bactérias, arqueias, fungos, protozoários e vírus de ADN; matrizes de diversidade (35 índices de diversidade); matrizes de genes funcionais (20 milhões de grupos); matrizes de reações enzimáticas (500.000 categorias); matrizes de vias metabólicas (100.000 variáveis); e matrizes de metabolitos (1.000 variáveis). Os dados recolhidos e a sua transformação de formatos moleculares em numéricos servirão de base para aprendizagem automática (normalização, avaliação da separação de amostras e desempenho de classificação utilizando diferentes algoritmos e hiperparâmetros), identificação de redes de biomarcadores (n > 100) e análise estatística não paramétrica do microbioma intestinal.

Análise estatística: A análise estatística dos dados será realizada utilizando o pacote de software IBM SPSS Statistics 25. Métodos estatísticos descritivos serão utilizados para caracterizar a população de mulheres no pós-parto que participam no inquérito e para resumir os dados recolhidos. A prevalência do consumo de álcool ou canábis entre as grávidas será calculada com base no número de amostras de mecónio positivas para metabolitos de álcool ou canábis. A prevalência do consumo de álcool e canábis com base na autorreferência será calculada separadamente. Os dados moleculares obtidos da análise do microbioma serão convertidos em dados numéricos e utilizados para aprendizagem automática (normalização, avaliação da separação de amostras e desempenho de classificação utilizando diferentes algoritmos e hiperparâmetros), identificação de redes de biomarcadores (n > 100) e análise estatística não paramétrica do microbioma intestinal, conforme realizado pelo grupo interdisciplinar. Os dados obtidos serão então comparados estatisticamente entre o grupo de amostras de mecónio positivas para metabolitos de álcool e canábis e o grupo de amostras de mecónio em que estes metabolitos não estavam presentes.

Resultados esperados: Pretendemos determinar a prevalência do consumo de álcool e drogas entre as grávidas eslovenas. Os dados sobre metabolitos de álcool e drogas obtidos a partir de amostras de mecónio serão comparados com os resultados do inquérito, no qual a prevalência do consumo de álcool e drogas será determinada por autorreferência. Desta forma, podemos avaliar a fiabilidade da autorreferência. Os resultados do estudo permitir-nos-ão avaliar a prevalência da SAF e do EPDAA na Eslovénia, ajudar-nos-ão a desenvolver uma estratégia para sensibilizar profissionais e o público sobre a prevalência e consequências do consumo de álcool e drogas durante a gravidez, a planear medidas preventivas e intervenções no grupo-alvo de grávidas, e a estabelecer equipas de diagnóstico para a SAF e o EPDAA. Quanto ao microbioma, esperamos uma diferença significativa na composição do microbioma das amostras de mecónio que testam positivo para álcool ou canábis em comparação com amostras que testam negativo (tendo em conta o sexo, idade gestacional, exposição a antibióticos durante o parto e presença de doenças crónicas).