Stanovení životaschopnosti dávkování konic pro probiotika

Gingivitida je stav perorálního onemocnění postihující 50% až 90% dospělých po celém světě (Albandar a Rams, 2002). Patologii gingivitidy lze zvrátit snížením nebo odstraněním mikrobiálního plaku, který se hromadí na tvrdých a měkkých tkáních a je v průmyslu považován za standard péče (Berezow Alex a Darveau Richard, 2010, van der Weijden a slot, 2011). Předpokládá se, že pravidelná perorální hygiena v kombinaci s terapeutiky, která přináší antimikrobiální přínos, zmírňuje nástup gingivitidy (van der Weijden a slot, 2011, Gunsolley, 2006). Testování terapeutik pro profylaxi výhod pro zmírnění vývoje gingivitidy však nebylo plně prozkoumáno.

Neutrofily, typ bílých krvinek (leukocyt), představují klíčovou složku vrozeného obranného systému, který chrání periodontální tkáň před gingivitidou a periodontitidou. Nejen, že jsou první řadou buněčné obrany, ale patří mezi nejhojnější leukocyty v periodontálních tkáních (Hirschfeld, 2020). Například gingivitida je spojena s významným zvýšením počtu neutrofilů, které migrují do periodontální tkáně. Naproti tomu jedinci s příliš malým množstvím neutrofilů způsobených buď vrozenými nedostatky v číslech neutrofilů, nebo tranzitu (LAD 1 a 2), nebo mají indukovanou neutropenii chemickou indukcí s antimitotickými látkami, jako je cyklofosamid, ne vždy se vyvinou parodontitidu. Podobně se také studie u KO myší, které jsou vadné u neutrofilního tranzitu, rozvíjejí také do periodontitidy. V souladu s klíčovým přínosem neutrofilů k gingivitidě i periodontitidě je vysoce regulován neutrofilní tranzit do gingivální tkáně. Periodontium obsahuje vysoce organizovanou expresi vybraných vrozených mediátorů obrany hostitele, které usnadňují tranzit neutrofilů z vysoce vaskularizované gingivální tkáně do gingivální štěrbiny, kde tvoří „zeď“ mezi hostitelskou tkáň a biofilmem zubního plaku.

Gingivitida je reverzibilní zánětlivý stav způsobený akumulací zubního plaku a souvisejícím narušením hostitelské homeostázy hostitele. Během gingivitidy přecházejí mikrobiální komunity z dominantních bakterií asociovaných na zdraví, jako jsou druhy Streptococcus, na gram-negativní periopatogeny, včetně druhů rodů porfyromonas, Tannerella, Treponema a Prewrotella. Tento dysbiotický posun spustí zánětlivé reakce, což vede k poškození tkáně a v některých případech k progresi k parodontitidě.

Nedávná studie (Kerns, 2023) o experimentální gingivitidě člověka identifikovala tři odlišné fenotypy odezvy hostitele vysoké, nízké a pomalé respondenty založené na klinických, zánětlivých a mikrobiálních parametrech:

1. Vysoký respondenti: Rychlá akumulace plaku doprovázená významným zvýšením gramnegativních periopatogenů a zvýšených zánětlivých markerů, jako je interleukin-lp (IL-lp).
2. Nízká respondenti: Podobná akumulace plaku jako vysoce respondenty, ale snižující zánět, což naznačuje tlumičtější reakci hostitele na bakteriální dysbiózu.
3. Pomalé respondenti: Zpožděná akumulace plaku a mikrobiální posloupnost, s prodlouženou dominancem druhů Streptococcus spojených se zdravím. Tato skupina vykazovala zpožděný nebo snížený zánět, což prokazuje odolnější mikrobiální komunitu a reakci hostitele.

Mikrobiální analýza odhalila, že přetrvávání prospěšných druhů Streptococcus, jako jsou S. sanguinis a S. oralis, u pomalých a nízkých respondentů koreluje s ochranným účinkem proti vzniku periopatogenů a přidružené zánětlivé kaskády. Naopak ztráta těchto prospěšných bakterií u vysokých respondentů byla spojena s závažnějším zánětem, což zdůraznilo kritickou roli perorálního mikrobiomu při modulaci závažnosti gingivitidy.

Lantibiotické slinariciny jsou polycyklické peptidy obsahující lanthionin a/nebo p-methyllanthioninové zbytky, které jsou produkovány určitými kmeny Streptococcus Salivarius, které téměř výhradně sídlí v lidské ústní dutině. Tyto molekuly jsou důležité vyplývat z jejich antimikrobiální aktivity na relevantní perorální patogeny, které byly aplikovány vývojem probiotických kmenů produkujících slinaricin. Salivariciny se však mohou také ukázat jako velká hodnota při vývoji nových a nových antibakteriálních terapií v této éře vznikající rezistence na antibiotika (Barbour, Wescombe, & Smith, 2020). Ve studii Barbour & Philip 2014 zjistili, že bakteriocin, produkce Levan-Sucrase a základní bezpečnostní rysy kmenů S. slinarius izolované od zdravých malajských subjektů, které prokazují jejich potenciál pro použití jako probiotika. Bylo vyvinuto nové médium produkce bakteriocinu s možným rozšiřováním aplikace pro léčiva a probiotika od S. slinarius generující různá lantibiotika. To je relevantní pro klinické řízení ústní dutiny a horních cest dýchacích v lidské populaci. Dodatek 1 obsahuje souhrnnou tabulku, která uvádí relevantní klinické hodnocení, které využívají S. Salivarius.

Navrhované řešení: S. Salivarius Sali-10

Navrhujeme pomocí nového kmene Streptococcus Salivarius Sali-10, jako cíleného mikrobiálního zásahu k modulaci perorálního mikrobiomu a zabránění gingivitidě. S. Salivarius Sali-10 je hypotéza na:

• Udržujte stabilní populaci prospěšných streptokoků během akumulace plaku.
• Inhibují růst periopatogenů, jako jsou porfyromonas, tannerella a prevotella prostřednictvím konkurence a produkce slinaricinu 10.
• Zpožďovat nebo potlačit dysbiotický posun na gramnegativní dominanci, čímž se snižuje zánětlivá odpověď.

Zachováním mikrobiální homeostázy může Sali-10 napodobovat mikrobiální odolnost pozorovanou u pomalých respondentů a nabízí novou strategii pro prevenci gingivitidy.

Předtím, než lze posoudit terapeutickou hodnotu Streptococcus Salivarius Sali-10, musí být jeho dávková forma ověřena. Klasická metoda dodávání ústních probiotik je ve formě konice, která má jednotlivce sát na kosmetickém komiření, dokud se nerozpustí. Jakmile je ověřeno, že tato forma dávkování funguje pro Streptococcus Salivarius Sali-10, může být provedena úplná klinická hodnocení pro stanovení jeho terapeutické životaschopnosti.

2. studium ojektivy

1. Cílem této studie je stanovit krátkodobé schopnosti dodávacího systému Salivarius Salivarius Salivarius Salivarius Salivarius Salivarius Salivarius Salius Sali-10 a modifikovat složení lidského perorálního mikrobiomu a perorální zánětlivé zatížení (olej). Konkrétně se snažíme:

   • Posoudit změnu v hladinách slinných bakterií asociovaných s periodontálním onemocněním (např. P. gingivalis, T. forsythia, T. denticola a P. micra).
   • Určete změnu hladin prospěšných bakterií (např. S. Salivarius, S. Parasanguinis).
   • Vyhodnoťte změnu perorálního zánětlivého zatížení (oleje) měřením počtu orálních neutrofilů.
2. Sledovat krátkodobé dodržování 8-10 účastníků klinického protokolu

3. přehled studie

Tato studie je navržena jako otevřená, průzkumná pilotní studie s jednou rukou, která má být dokončena po dobu 7 dnů s 8-10 účastníky. Účastníci se po podávání a před spaním a před spaním budou každou noc podávat jeden pastitel obsahující S. Salivarius Sali-10 (10 miliard CFU/Lozenge). Účastníci dokončí dvě (2) domácí vzorkové sady, jedna před a jedna po 7 dnech.

5. Zkušební produkty/intervence Každý účastník obdrží sedm (7) pastivých paliček Sali-10 s mincovnou. Budou pořízeni, aby si po kartáčování denně pořídili pastint a nechali jej rozpustit v ústech. Účastníci budou v průběhu studie používat Lozenge Sali-10. Každý účastník také obdrží čtyři (4) domácí testované soupravy: dvě (2) soupravy sběru slin a dvě (2) sběrné soupravy pro oplachování fyziologického roztoku.

5.2 Výdej, skladování a odpovědnost Jakmile jsou všichni účastníci předem prověřeni, obdrží všechny studijní materiály v poště. To bude zahrnovat sedm (7) paličkových a čtyř (4) domů spravovaných testovacích souprav: dvě (2) sběrné soupravy slin a dvě (2) soupravy pro sběr solného oplachování. Subjekty budou následovat poskytnuté pokyny, kdy a jak si čistit zuby. Tyto pokyny jsou vysvětleny v části postupu.

Testovací soupravy jsou samostatné komerčně dostupné soupravy, které obsahují všechny pokyny k použití. Účastníkům budou poskytnuty pokyny o tom, jak odkládat vzorky do Ostia Sciences Inc na 124 Edward St., Toronto, oblek 463, na Kanadě M5G 1G6.

Účastníci budou instruováni, aby vyhodili všechny studijní materiály, které konec 7denního procesu.

6. Postupy studia

6.2 Vydávání a používání produktu doma

Produkt bude zaslán účastníkovi v uzavřené schránce, která bude zahrnovat pokyny pro domácí a bezpečnostní informace, včetně nouzových kontaktních údajů. Pro sledování dodržování pacienta si na konci pokusu požádá manažer klinické studie, že bylo spotřebováno všech 7 pastinek. Subjektům bude přihlášeno jedinečné identifikační číslo v chronologickém pořadí (např. Od 1 do 10), když se zapisují do studie. Subjekty budou instruovány, aby se vyhnuly používání jiných produktů ústní hygieny. Během studie nebudou existovat žádná dietní omezení.

Subjekty budou mít pokyny, aby si čistily zuby dvakrát denně (ráno a večer) pokaždé pokaždé dvě minuty pomocí zubní pasty a zubního kartáčku a nití.

Lázence SALI-10 budou při podávání každému účastníkovi předem zabaleny.

6.3 Telefonní předběžnou screeningovou potenciální účastníci studie, kteří kontaktují koordinátora klinického hodnocení, aby získali další informace o studii prostřednictvím e-mailu, budou poté kontaktováni telefonicky. V této fázi bude vyplněn dotazník náboru (dodatek 3), aby se určilo, zda jsou způsobilí pro fázi screeningu studie. Pokud je subjekt považován za způsobilý, bude jim dán formulář informovaného souhlasu a bude si přečíst a položit jakékoli dotazy, které mohou mít, a podepsat. Screening bude prováděn až do zapsání deseti (10) subjektů.

Nebudou žádné osobní návštěvy. Účastníkům studie budou zaslány všechny studijní materiály, které zahrnovaly sedm (7) pastingů, a čtyři (4) domácí testované soupravy: dvě (2) soupravy sběru slin a dvě (2) sběrné soupravy pro oplachování. Subjekty také obdrží studijní produkt pro použití doma s pokyny.

6,5 den 0 (základní linie)

Účastníci budou využívat jednu (1) soupravu sběru slin a jednu (1) soupravu pro sběr solného oplachování. Podle daných pokynů odejdou vzorky do věd ostia. Po sběru vzorků začnou účastníci používat pastilky denně po dobu 7 dnů. Účastníci si po kartáčování vezmou jednu pastičku. Umožňují pastinganům rozpustit bez kousání nebo polykání a vyhýbat se jídlu a pití po dobu jedné hodiny. Účastníci budou instruováni ve správné ústní hygieně a budou pokynují, aby kromě používání svého přiděleného produktu po dobu 7 dnů (1 týden) pokračovali ve své domácí ústní hygieně. Účastníci budou na konci studie instruováni, aby zlikvidovali kontejner pastinců.

6.6 den 7 (dokončení)

24 hodin po použití sedmého (7.) pastilky budou účastníci využívat jednu (1) sběrnou soupravu na sliny a jednu (1) soupravu pro sběr solného oplachování. Podle daných pokynů odejdou vzorky do věd ostia. Účastníci studie zahodí všechny zbývající studijní materiály, které mohou mít. Prostřednictvím e-mailu potvrdí správce studie dodržování protokolu a poskytne pokyny po studii. Subjekty budou informovány, že se jedná o konec studie. Bude jim řečeno, že mohou obnovit svou pravidelnou ústní hygienu. Poté požádáme účastníky o jejich zpětnou vazbu ohledně jejich zkušeností.

7. Postupy studie a klinické registrace

7.7 Vzorky slin a ústní opláchnutí

Souprava sběru slin je sada pro sběr sběru slin Supersal2, pokyny se nacházejí v dodatku 10. Vzorky slin budou zpracovány a budou analyzovány pomocí DNA

Extrakce DNA, poté QPCR bude použita k kvantifikaci úplné změny specifických bakterií ve vzorcích slin, konkrétně patogenní bakterie (P. Gingivalis, T. Forsythia, T. Denticola, P. Micra) a prospěšné bakterie (S. Salivarius, S. Parasanguinis).

Souprava pro sběr ústního oplachování je produkována společností Ostia Sciences, s pokyny nalezenými v dodatku 11. Vzorky orálního oplachování budou analyzovány na počty orálních neutrofilů jako marker perorálního zánětlivého zatížení (olej).

Vzhledem k tomu, že všechny výzkumné projekty budou prováděny na de-identifikovaných vzorcích, nebude možné účastníkům vrátit individuální výsledky. Všechny vzorky budou zničeny okamžitě po testování. Vzhledem k tomu, že veškerý výzkum bude proveden na de-identifikovaných agregovaných datech, nebude možné odebrat údaje od konkrétního účastníka, když jsou vzorky staženy ze studie.

8.0 Statidické analýzy

Pro statistickou analýzu bude úplná změna mikrobů a oleje porovnána mezi výchozím a den 7. den pomocí párového testu Wilcoxon.

9.0 Zpráva o nežádoucích účincích

Subjektům bude vyprávěno o jakýchkoli možných nežádoucích účincích nebo vedlejších účincích expozice této metodě nebo produktu. Orální podráždění je možné. Pokud dojde k vedlejším účinkům, očekává se, že bude mírný a dočasný. Jakákoli událost se zastaví, když se subjekt přestane být vystaven nástroji nebo se vrátí k jejich normální ústní hygieně. Vyšetřovatelé zaznamenají všechny a všechny nežádoucí účinky a tuto dokumentaci nahlásí oddělení bezpečnosti produktu. Bude hodnocena povaha reakce a jakákoli korelace s využitím produktu. Pokud důkazy naznačují, že nežádoucí reakce může být způsobena využitím produktu, bude subjekt instruován k přerušení používání produktu a bude poskytnuto vhodné ošetření. V případě nepříznivých zkušeností, nouzových nebo jiných problémů nebo otázek týkajících se vaší účasti v této studii můžete kontaktovat následující vyšetřovatele:

Dr. Michael Glogauer na (905) 973-0664. V případě lékařské pohotovosti kontaktujte svého lékaře.