Determinare la vitalità un dosaggio di losanga per i probiotici

La gengivite è una condizione di malattia orale che colpisce il 50% al 90% degli adulti a livello globale (Albandar e Rams, 2002). La patologia della gengivite può essere invertita mediante riduzione o rimozione della placca microbica che si accumula su tessuti duri e molli ed è considerata standard di cura nel settore (Berezow Alex e Darveau Richard, 2010, van der Weijden e Slot, 2011). Si pensa che l'igiene orale regolare in combinazione con terapie che offre un beneficio anti-microbico per mitigare l'inizio della gengivite (van der Weijden e Slot, 2011, Gunsolley, 2006). Tuttavia, testare terapie per la profilassi benefica per mitigare lo sviluppo della gengivite non è stato completamente esaminato.

I neutrofili, un tipo di globuli bianchi (leucociti), rappresentano una componente chiave del sistema di difesa innato che protegge il tessuto parodontale sia dalla gengivite e dalla parodontite. Non solo sono la prima linea di difesa cellulare, ma sono tra i leucociti più abbondanti all'interno dei tessuti parodontali (Hirschfeld, 2020). Ad esempio, la gengivite è associata a un aumento significativo del numero di neutrofili che migrano nel tessuto parodontale. Al contrario, gli individui con troppo pochi neutrofili causati da carenze congenite in numero di neutrofili, o transito (LAD 1 e 2) o hanno una neutropenia indotta mediante induzione chimica con agenti antimitotici come la ciclofosamide sviluppano invariabilmente la periodonite. Allo stesso modo, anche gli studi sui topi KO difettosi nel transito dei neutrofili sviluppano la parodontite. Coerentemente con il contributo chiave dei neutrofili sia alla gengivite che alla parodontite, il transito dei neutrofili al tessuto gengivale è altamente regolato. Il parodonzio contiene un'espressione altamente orchestrata di selezionati mediatori della difesa dell'ospite innata che facilitano il transito dei neutrofili dal tessuto gengivale altamente vascolarizzato alla fessura gengivale, dove formano un "muro" tra il tessuto ospite e il biofilm dentale.

La gengivite è una condizione infiammatoria reversibile causata dall'accumulo di placca dentale e dall'interruzione associata dell'omeostasi ospite-microbica. Durante la gengivite, le transizioni della comunità microbica dall'essere dominate da batteri associati alla salute Gram-positivi, come le specie di streptococco, a periopatoghe gram-negative, comprese le specie dei generi porfiromonas, tannellella, treponema e prevotella. Questo spostamento disbiotico innesca le risposte infiammatorie, portando a danni ai tessuti e, in alcuni casi, progressione alla parodontite.

Un recente studio (Kerns, 2023) sulla gengivite sperimentale umana ha identificato tre distinti fenotipi di risposta dell'ospite alti, bassi e lenti basati sui rispondenti su parametri clinici, infiammatori e microbici:

1. Alti soccorritori: accumulo rapido della placca accompagnato da un aumento significativo dei periopatogeni Gram-negativi e di marcatori infiammatori elevati, come l'interleuchina-1β (IL-1β).
2. Ai bassi soccorritori: accumulo di placca simile agli alti soccorritori ma infiammazione più bassa, suggerendo una risposta dell'ospite più silenziosa alla disbiosi batterica.
3. Spegnanti lenti: accumulo ritardato della placca e successione microbica, con il prolungato dominio delle specie di streptococcus associate alla salute. Questo gruppo ha mostrato un'infiammazione ritardata o ridotta, dimostrando una comunità microbica più resiliente e una risposta dell'ospite.

L'analisi microbica ha rivelato che la persistenza di specie benefiche di streptococco, come S. sanguinis e S. oralis, in soccorritori lenti e bassi si correla con un effetto protettivo contro l'emergere di periopatogeni e la cascata infiammatoria associata. Al contrario, la perdita di questi batteri benefici negli alti soccorritori è stata legata a un'infiammazione più grave, evidenziando il ruolo critico del microbioma orale nel modulare la gravità della gengivite.

Le salivaricine lentibiotiche sono peptidi policiclici contenenti lanteonina e/o residui β-metillantionina che sono prodotti da alcuni ceppi di streptococcus salivarius, che risiedono quasi esclusivamente nella cavità orale umana. Queste molecole importanti derivano dalla loro attività antimicrobica verso patogeni orali rilevanti che è stata applicata attraverso lo sviluppo di ceppi probiotici che producono salivaricina. Tuttavia, le salivaricine possono anche rivelarsi di grande valore nello sviluppo di nuove e nuove terapie antibatteriche in questa era di resistenza agli antibiotici emergenti (Barbour, Wescombe e Smith, 2020). In uno studio di Barbour & Philip 2014, hanno scoperto che la batteriocina, la produzione di levan-sucrasi e le caratteristiche di sicurezza di base dei ceppi di S. salivarius isolati da soggetti malesi sani che dimostrano il loro potenziale per l'uso come probiotici. È stato sviluppato un nuovo mezzo di produzione di batteriocina con una potenziale applicazione di ampliamento per prodotti farmaceutici e probiotici di S. salivarius che generano diversi lantibiotici. Ciò è rilevante per la gestione clinica della cavità orale e del tratto respiratorio superiore nella popolazione umana. L'Appendice 1 include una tabella di riepilogo che elenca gli studi clinici pertinenti che hanno utilizzato S. salivarius.

Soluzione proposta: S. salivarius sali-10

Proponiamo di usare un nuovo ceppo, Streptococcus salivarius Sali-10, come intervento microbico mirato per modulare il microbioma orale e prevenire la gengivite. S. salivarius sali-10 è ipotizzato di:

• Mantenere una popolazione stabile di streptococchi benefici durante l'accumulo di placca.
• Inibire la crescita di periopatogeni come Porfiromonas, Tannella e Prevotella attraverso la concorrenza e la produzione di salivaricina 10.
• Ritardare o sopprimere lo spostamento disbiotico al dominio Gram-negativo, riducendo così la risposta infiammatoria.

Preservando l'omeostasi microbica, Sali-10 può emulare la resilienza microbica osservata nei soccorritori lenti, offrendo una nuova strategia per la prevenzione della gengivite.

Prima che il valore terapeutico di Streptococcus salivarius sali-10 possa essere valutato, la sua forma di dosaggio deve essere convalidata. Il metodo classico di consegna di probiotici orali è in forma di losanga, avere l'individuo succhiare la losanga fino a quando non si dissolve. Una volta verificata che questa forma di dosaggio funzioni per Streptococcus salivarius Sali-10, è possibile condurre uno studio clinico completo per determinarne la vitalità terapeutica.

2. Studia oiettivi

1. Lo scopo di questo studio è di determinare la capacità a breve termine del sistema di rilascio di losanna Streptococcus salivarius Sali-10 di modificare la composizione del microbioma orale umano e il carico infiammatorio orale (olio). In particolare, miriamo a:

   • Valutare il cambiamento nei livelli salivari di batteri associati alla malattia parodontale (ad esempio, P. gingivalis, T. forsythia, T. denticola e P. micra).
   • Determinare il cambiamento nei livelli di batteri benefici (ad es. S. salivarius, S. parasanguinis).
   • Valutare la variazione del carico infiammatorio orale (olio) misurando i conteggi dei neutrofili orali.
2. Per monitorare l'adesione a breve termine degli 8-10 partecipanti al protocollo clinico

3. Panoramica dello studio

Questo studio è progettato come uno studio pilota esplorativo a braccio aperto, a braccio singolo da completare per 7 giorni con 8-10 partecipanti. I partecipanti auto-somministrano un losange contenente S. salivarius Sali-10 (10 miliardi di CFU/losanga) ogni notte dopo aver spazzolato e prima di andare a letto. I partecipanti completeranno due (2) kit di campioni di casa, uno prima e uno dopo i 7 giorni.

5. Prodotti di prova/Interventi che ogni partecipante riceverà sette (7) losanghe Sali-10 con fusto della menta. Verranno istruiti a prendere una losanga ogni giorno dopo aver spazzolato lasciando che si dissolva in bocca. I partecipanti useranno le losanghe Sali-10 durante lo studio. Ogni partecipante riceverà anche quattro (4) kit di test amministrati nella casa: due (2) kit di raccolta della saliva e due (2) kit di raccolta del risciacquo salina.

5.2 Disposizione, stoccaggio e responsabilità una volta pre-screening, tutti i partecipanti riceveranno tutti i materiali di studio per posta. Ciò includerà i sette (7) losanghe e i quattro (4) kit di test somministrati in casa: due (2) kit di raccolta delle saliva e due (2) kit di raccolta salina risciacquo. I soggetti seguiranno le istruzioni fornite su quando e come lavarsi i denti. Queste istruzioni sono spiegate nella sezione Procedura.

I kit di test sono kit disponibili in commercio autonoma che includono tutte le istruzioni di utilizzo. Ai partecipanti verranno fornite istruzioni su come abbandonare i campioni a Ostia Sciences Inc a 124 Edward St., Toronto, Suit 463, sul Canada M5G 1G6.

Ai partecipanti verrà chiesto di eliminare tutti i materiali di studio che la fine della prova di 7 giorni.

6. Procedure di studio

6.2 Distribuzione e utilizzo del prodotto a casa

Il prodotto verrà inviato al partecipante in una scatola sigillata che includerà istruzioni per l'uso a domicilio e le informazioni sulla sicurezza, inclusi i dettagli di contatto di emergenza. Per monitorare la conformità dei pazienti, il gestore dello studio clinico richiederà una conferma e -mail alla fine dello studio che sono state consumate tutte le 7 losanghe. Ai soggetti verrà assegnato un numero di identificazione univoco in ordine cronologico (ad esempio, da 1 a 10) mentre si iscrivono allo studio. I soggetti saranno istruiti a evitare di utilizzare altri prodotti di igiene orale. Non ci saranno restrizioni dietetiche durante lo studio.

Ai soggetti verrà chiesto di lavarsi i denti due volte al giorno (mattina e sera) per due minuti ogni volta con un dentifricio, spazzolino da denti e filo interdentale.

Le losanghe Sali-10 saranno preparate quando vengono assegnate a ciascun partecipante.

6.3 I potenziali partecipanti allo studio di pre-screening telefonici che contattano il coordinatore della sperimentazione clinica per ulteriori informazioni sullo studio via e-mail saranno quindi contattati via telefono. In questa fase il questionario sul reclutamento (Appendice 3) sarà completato per determinare se sono idonei per la fase di screening dello studio. Se l'argomento è ritenuto idoneo, verrà dato il modulo di consenso informato per leggere e porre qualsiasi domanda che possano avere e firmare. Lo screening verrà eseguito fino a quando non saranno iscritti dieci (10) soggetti.

Non ci saranno visite di persona. I partecipanti allo studio verranno inviati tutti i materiali di studio, tra cui i sette (7) losanghe, e i quattro (4) kit di test amministrati per la casa: due (2) kit di raccolta della saliva e due (2) kit di raccolta risciacquo salina. I soggetti riceveranno anche il prodotto di studio per l'uso a casa con le direzioni.

6,5 giorni 0 (basale)

I partecipanti utilizzeranno un (1) kit di collezione di saliva e uno (1) kit di raccolta risciacquo salina. Lasciaranno i campioni alle scienze di Ostia secondo le istruzioni indicate. Dopo la raccolta dei campioni, i partecipanti inizieranno a utilizzare i losanghe ogni giorno per 7 giorni. I partecipanti prendono una losanga dopo aver spazzolato. Permetteranno alle losanghe di dissolversi senza mordere o deglutire ed evitare di mangiare e bere per un'ora. I partecipanti verranno istruiti sull'igiene orale e verranno istruiti a continuare la loro igiene orale domestica oltre all'uso del loro prodotto assegnato per 7 giorni (1 settimana). Ai partecipanti verrà chiesto di scartare il contenitore dei losanghe alla fine dello studio.

6.6 Giorno 7 (completamento)

24 ore dopo l'uso del settimo (7 °) losanga, i partecipanti utilizzeranno un (1) kit di raccolta della saliva e un (1) kit di raccolta risciacquo salina. Lasciaranno i campioni alle scienze di Ostia secondo le istruzioni indicate. I partecipanti allo studio scarteranno tutti i materiali di studio rimanenti che potrebbero avere. Tramite e-mail, il gestore dello studio confermerà l'adesione al protocollo e fornirà istruzioni post-studio. I soggetti saranno informati che questa è la fine dello studio. Gli verrà detto che possono riprendere la loro regolare igiene orale. Successivamente, chiederemo ai partecipanti il ​​loro feedback per quanto riguarda la loro esperienza.

7. Procedure di studio e registrazioni cliniche

7.7 campioni di risciacquo della saliva e orali

Il kit di collezione di saliva è il kit di raccolta SUSSAL2 Universal Saliva, le istruzioni si trovano nell'Appendice 10. I campioni di saliva saranno elaborati e saranno analizzati dal DNA

Estrazione del DNA, quindi QPCR verrà utilizzato per quantificare il pieno cambiamento di batteri specifici nei campioni di saliva, in particolare batteri patogeni (P. Gingivalis, T. forsythia, T. denticola, P. micra) e batteri benefici (S. salivarius, S. parasanguinis).

Il kit di raccolta di risciacquo orale è prodotto da Ostia Sciences, con istruzioni trovate nell'Appendice 11. I campioni di risciacquo orale saranno analizzati per i conteggi di neutrofili orali come marcatore di carico infiammatorio orale (olio).

Poiché tutti i progetti di ricerca saranno realizzati su campioni de-identificati, non sarà possibile restituire i singoli risultati ai partecipanti. Tutti i campioni verranno distrutti immediatamente dopo il test. Poiché tutte le ricerche verranno condotte su dati de-identificati e aggregati, non sarà possibile ritirare i dati da un partecipante specifico quando i campioni vengono ritirati dallo studio.

8.0 Analisi statisiche

Per l'analisi statistica, il pieno cambio dei microbi e l'olio verranno confrontati tra il completamento di base e il giorno 7 utilizzando il test di Wilcoxon accoppiato.

9.0 Rapporto di eventi avversi

Ai soggetti verrà raccontato di eventuali reazioni avverse o effetti collaterali dall'esposizione a questo metodo o prodotto. L'irritazione orale è possibile. Se si verificano effetti collaterali, si prevede che sia lieve e temporaneo. Qualsiasi evento si fermerà quando l'argomento smette di essere esposto allo strumento o ritorna alla loro normale igiene orale. Gli investigatori registreranno tutte le reazioni avverse e riferiranno questa documentazione al dipartimento di garanzia della sicurezza del prodotto. Verranno valutate la natura della reazione e qualsiasi correlazione con l'utilizzo del prodotto. Se l'evidenza indica che la reazione avversa può essere dovuta all'utilizzo del prodotto, il soggetto verrà chiesto di interrompere l'uso del prodotto e il trattamento adeguato. In caso di esperienza avversa, emergenza o altri problemi o domande relative alla partecipazione a questo studio, è possibile contattare i seguenti investigatori:

Dr. Michael Glogauer al numero (905) 973-0664. In caso di emergenza medica, contattare il medico.