Bestemmelse af levedygtigheden af ​​en sugedosis for probiotika

Gingivitis er en oral sygdomstilstand, der påvirker 50% til 90% af voksne globalt (Albandar og Rams, 2002). Gingivitis -patologien kan vendes ved reduktion eller fjernelse af mikrobiel plak, der akkumuleres på hårdt og blødt væv og betragtes som standard for pleje i industrien (Berezow Alex og Darveau Richard, 2010, Van Der Weijden og Slot, 2011). Regelmæssig mundhygiejne i kombination med terapeutika, der leverer en anti-mikrobiel fordel, menes at afbøde indtræden af ​​gingivitis (Van der Weijden og Slot, 2011, Gunsolley, 2006). Testning af terapeutika til profylakse fordel for at afbøde udvikling af gingivitis er imidlertid ikke blevet undersøgt fuldt ud.

Neutrofiler, en type hvide blodlegemer (leukocyt), repræsenterer en nøglekomponent i det medfødte forsvarssystem, der beskytter periodontalt væv mod både gingivitis og periodontitis. Ikke kun er de den første linje af cellulært forsvar, men de er blandt de mest rigelige leukocytter inden for de periodontale væv (Hirschfeld, 2020). F.eks. Er gingivitis forbundet med en signifikant stigning i antallet af neutrofiler, der migrerer til periodontalt væv. I modsætning hertil er personer med for få neutrofiler, der er skabt af enten medfødte mangler i neutrofilnumre, eller transit (LAD 1 og 2) eller har en induceret neutropeni ved kemisk induktion med antimitotiske midler, såsom cyclophosamid, der altid udvikler periodontitis. Ligeledes udvikler undersøgelser i KO -mus, der er defekte i neutrofil transit, også periodontitis. I overensstemmelse med det centrale bidrag fra neutrofiler til både gingivitis og periodontitis er neutrofil transit til tandkødsvæv meget reguleret. Periodontium indeholder et meget orkestreret ekspression af udvalgte medfødte værtsforsvarsmediatorer, der letter transit af neutrofiler fra det stærkt vaskulariserede tandkødsvæv til tandkødets spalte, hvor de danner en "væg" mellem værtsvævet og den tandplakbiofilm.

Gingivitis er en reversibel inflammatorisk tilstand forårsaget af akkumulering af tandplaque og den tilhørende forstyrrelse af den værtsmikrobielle homeostase. Under gingivitis overgår det mikrobielle samfund fra at blive domineret af gram-positive sundhedsassocierede bakterier, såsom Streptococcus-arter, til gram-negative periopatogener, herunder arter af slægterne Porphyromonas, Tannerella, Treponema og Prevotella. Dette dysbiotiske skift udløser inflammatoriske responser, hvilket fører til vævsskade og i nogle tilfælde progression til periodontitis.

En nylig undersøgelse (Kerns, 2023) om human eksperimentel gingivitis identificerede tre forskellige værtsrespons-fænotyper-høje, lave og langsomme respondere-baserede på kliniske, inflammatoriske og mikrobielle parametre:

1. Høje respondere: hurtig plakakkumulering ledsaget af en signifikant stigning i gram-negative periopatogener og forhøjede inflammatoriske markører, såsom interleukin-1β (IL-1β).
2. Lav respondere: Lignende plakakkumulering til høje respondere, men lavere betændelse, hvilket antyder et mere dæmpet værtsrespons på bakteriel dysbiose.
3. Langsomme respondere: Forsinkede plakets akkumulering og mikrobiel rækkefølge med langvarig dominans af sundhedsassocierede Streptococcus-arter. Denne gruppe udviste forsinket eller reduceret betændelse og demonstrerede et mere elastisk mikrobielt samfund og værtsrespons.

Den mikrobielle analyse afslørede, at persistensen af ​​fordelagtige streptococcus -arter, såsom S. Sanguinis og S. oralis, i langsomme og lave respondere korrelerer med en beskyttende virkning mod fremkomsten af ​​periopatogener og den tilhørende inflammatoriske kaskade. Omvendt var tabet af disse fordelagtige bakterier hos høje respondere knyttet til mere alvorlig betændelse, hvilket fremhævede den kritiske rolle af det orale mikrobiome i modulering af gingivitis sværhedsgrad.

Lantibiotiske spytarikaner er polycykliske peptider, der indeholder lanthionin og/eller ß-methyllanthioninrester, der produceres af visse stammer af Streptococcus spyt, som næsten udelukkende bor i det menneskelige mundhulrum. Disse molekyler betydning stammer fra deres antimikrobielle aktivitet mod relevante orale patogener, der er blevet anvendt gennem udviklingen af ​​spyt-producerende probiotiske stammer. Imidlertid kan spyt kan også vise sig at være af stor værdi i udviklingen af ​​nye og nye antibakterielle terapier i denne æra med nye antibiotikaresistens (Barbour, Wescombe, & Smith, 2020). I en undersøgelse af Barbour & Philip 2014 fandt de, at bakteriocin, levan-sucraseproduktion og grundlæggende sikkerhedsfunktioner af S. spytarius-stammer isoleret fra sunde malaysiske individer, der demonstrerer deres potentiale til brug som probiotika. Et nyt bakteriocinproduktionsmedium blev udviklet med potentiel opskaleringsanvendelse til farmaceutiske stoffer og probiotika fra S. spørgenerius, der genererede forskellige lantibiotika. Dette er relevant for klinisk håndtering af mundhulrum og øvre luftvej i den menneskelige befolkning. Tillæg 1 inkluderer en oversigtstabel, der viser de relevante kliniske forsøg, der anvendte S. spytarius.

Foreslået løsning: S. Salivarius Sali-10

Vi foreslår at bruge en ny stamme, Streptococcus spytaus Sali-10, som en målrettet mikrobiel intervention til at modulere det orale mikrobiom og forhindre gingivitis. S. spytius Sali-10 er hypotheziseret til:

• Oprethold en stabil population af fordelagtige streptokokker under plakkens akkumulering.
• Inhiberer væksten af ​​periopatogener såsom Porphyromonas, Tannerella og Prevotella gennem konkurrence og produktion af spytaricin 10.
• Forsink eller undertrykker det dysbiotiske skift til Gram-negativ dominans og reducerer derved den inflammatoriske respons.

Ved at bevare mikrobiel homeostase kan SALI-10 muligvis efterligne den mikrobielle modstandsdygtighed, der er observeret hos langsomme respondere, hvilket tilbyder en ny strategi til forebyggelse af gingivitis.

Inden den terapeutiske værdi af Streptococcus spytius Sali-10 kan vurderes, skal dens doseringsform valideres. Den klassiske metode til levering af oral probiotika er i en sugform, der har den enkelte sutte på sugen, indtil den opløses. Når det først er verificeret, at denne doseringsform fungerer for Streptococcus spyt-sali-10, kan der udføres et fuldt klinisk forsøg til bestemmelse af dens terapeutiske levedygtighed.

2. Undersøg ojektiv

1. Formålet med denne undersøgelse er at bestemme den kortvarige evne af Streptococcus Salivarius Sali-10 Lozenges leveringssystem til at modificere den humane orale mikrobiomsammensætning og oral inflammatorisk belastning (olie). Specifikt sigter vi mod at:

   • Evaluer ændringen i spytniveauer af periodontal-sygdom-associerede bakterier (f.eks. P. gingivalis, T. forsythia, T. denticola og P. micra).
   • Bestem ændringen i fordelagtige bakterieniveauer (f.eks. S. spytarius, S. parasanguinis).
   • Evaluer ændringen i oral inflammatorisk belastning (olie) ved at måle orale neutrofile tællinger.
2. For at overvåge den kortsigtede overholdelse af 8-10-deltagerne til den kliniske protokol

3. Undersøgelsesoversigt

Denne undersøgelse er designet som en open-label, enkeltarms, efterforskende pilotundersøgelse, der skal afsluttes over 7 dage med 8-10 deltagere. Deltagerne vil selv administrere en sugetilstand indeholdende S. Salivarius Sali-10 (10 milliarder CFU/LOZENGE) hver nat efter børstning og før sengetid. Deltagerne afslutter to (2) hjemmeprøvesæt, et før og en efter de 7 dage.

5. Testprodukter/-interventioner, som hver deltager vil modtage syv (7) mynte-smagede Sali-10 pastiller. De vil blive bedt om at tage en sugetag efter at have børstet ved at lade den opløses i munden. Deltagerne bruger Sali-10 pastiller i hele undersøgelsen. Hver deltager vil også modtage fire (4) hjemmeadministrerede testsæt: to (2) spytopsamlingssæt og to (2) saltvandskylleopsamlingssæt.

5.2 Dispensering, opbevaring og ansvarlighed Når de er forhåndsskærmet, vil alle deltagere modtage alt studiemateriale i posten. Dette vil omfatte de syv (7) pastiller og de fire (4) hjemmeadministrerede testsæt: to (2) spytopsamlingssæt og to (2) saltvandskylleopsamlingssæt. Emnerne følger med henblik på at få instruktioner om, hvornår og hvordan man børster tænderne. Disse instruktioner forklares i procedurafsnittet.

Testsætene er selvstændige kommercielt tilgængelige sæt, der inkluderer alle brugsinstruktioner. Deltagerne får instruktioner om, hvordan faldet fra prøverne til Ostia Sciences Inc på 124 Edward St., Toronto, dragt 463, på Canada M5G 1G6.

Deltagerne vil blive bedt om at kaste alle studiemateriale ud, som afslutningen af ​​7-dages retssag.

6. Undersøgelsesprocedurer

6.2 Produktudlevering og brug derhjemme

Produktet sendes til deltageren i en forseglet boks, der vil omfatte instruktioner til hjemmebrug og sikkerhedsoplysninger, herunder nødkontaktoplysninger. For at overvåge patientens overholdelse vil Clinical Study Manager anmode om en e -mail -bekræftelse i slutningen af ​​forsøget om, at alle 7 pastiller blev konsumeret. Personer tildeles et unikt identifikationsnummer i kronologisk rækkefølge (f.eks. Fra 1 til 10), når de tilmelder sig undersøgelsen. Personer vil blive bedt om at undgå at bruge andre mundhygiejneprodukter. Der vil ikke være nogen diætbegrænsninger under undersøgelsen.

Motiver vil blive bedt om at børste deres tænder to gange dagligt (morgen og aften) i to minutter hver gang med en tandpasta og tandbørste og tandtråd.

Sali-10 Lozenges vil blive pakket, når den gives til hver deltager.

6.3 Telefonpræcreenpotentielle undersøgelsesdeltagere, der kontakter den kliniske forsøgskoordinator for mere information om undersøgelsen via e-mail, kontaktes derefter via telefon. På dette tidspunkt afsluttes rekrutteringsspørgeskemaet (tillæg 3) for at afgøre, om de er berettigede til screeningsfasen af ​​undersøgelsen. Hvis emnet anses for at være berettiget, får de den informerede samtykkeformular til at læse og stille spørgsmål, de måtte have, og underskrive. Screeningen udføres, indtil ti (10) personer er tilmeldt.

Der vil ingen personlige besøg. Undersøgelsesdeltagere vil blive sendt alle studiemateriale, der omfattede de syv (7) pastiller, og de fire (4) hjemmeadministrerede testsæt: to (2) spytopsamlingssæt og to (2) saltvandskylleopsamlingssæt. Personer vil også modtage undersøgelsesproduktet til brug derhjemme med retninger.

6,5 dag 0 (baseline)

Deltagerne vil bruge et (1) spytopsamlingssæt og et (1) saltvandskylleopsamlingssæt. De vil droppe prøverne til Ostia Sciences i henhold til de givne instruktioner. Efter prøveindsamling vil deltagerne begynde at bruge pastiller dagligt i 7 dage. Deltagerne vil tage en suget efter børstet. De vil lade pastillene opløses uden at bide eller sluge og undgå at spise og drikke i en time. Deltagerne vil blive instrueret om ordentlig mundhygiejne og vil blive bedt om at fortsætte deres mundhygiejne hjem ud over brugen af ​​deres tildelte produkt i 7 dage (1 uge). Deltagerne vil blive bedt om at kassere pastillernes beholder i slutningen af ​​undersøgelsen.

6.6 Dag 7 (færdiggørelse)

24 timer efter at have brugt det syvende (7.) sugetøj, vil deltagerne bruge et (1) spytopsamlingssæt og et (1) saltvandskylleopsamlingssæt. De vil droppe prøverne til Ostia Sciences i henhold til de givne instruktioner. Undersøgelsesdeltagere vil kassere ethvert resterende studiemateriale, de måtte have. Gennem e-mail vil studiechefen bekræfte overholdelse af protokollen og give instruktioner efter studiet. Emnerne vil blive informeret om, at dette er slutningen af ​​undersøgelsen. De får at vide, at de kan genoptage deres regelmæssige mundhygiejne. Bagefter vil vi bede deltagerne om deres feedback med hensyn til deres oplevelse.

7. Undersøgelsesprocedurer og kliniske registreringer

7.7 Spyt- og orale skylleprøver

Spytkollektionssættet er SuperSal2 Universal Syiva Collection Kit, instruktioner findes i tillæg 10. Spytprøverne behandles og analyseres ved DNA

DNA -ekstraktion, derefter vil QPCR blive brugt til at kvantificere den fulde ændring af specifikke bakterier i spytprøverne, specifikt patogene bakterier (P. Gingivalis, T. Forsythia, T. Denticola, P. Micra) og gavnlige bakterier (S. Salivarius, S. Parasanguinis).

Oral Rinse Collection Kit er produceret af Ostia Sciences med instruktioner fundet i tillæg 11. Der vil orale skylleprøver blive analyseret for orale neutrofile tællinger som en markør for oral inflammatorisk belastning (olie).

Da alle forskningsprojekter vil blive udført på de-identificerede prøver, vil det ikke være muligt at returnere individuelle resultater til deltagerne. Alle prøver vil blive ødelagt umiddelbart efter test. Da al forskning vil blive udført på de-identificerede, aggregerede data, vil det ikke være muligt at trække dataene tilbage fra en bestemt deltager, når prøver trækkes tilbage fra undersøgelsen.

8.0 Statisiske analyser

Til statistisk analyse sammenlignes fuld ændring af mikroberne og olien mellem baseline og dag 7 -færdiggørelse ved hjælp af parret Wilcoxon -test.

9.0 Rapport om bivirkninger

Motiver vil blive fortalt om eventuelle bivirkninger eller bivirkninger fra eksponering for denne metode eller produkt. Oral irritation er mulig. Hvis bivirkninger forekommer, forventes det at være milde og midlertidige. Enhver begivenhed stopper, når emnet holder op med at blive udsat for instrumentet eller vender tilbage til deres normale mundhygiejne. Efterforskerne registrerer alle bivirkninger og rapporterer denne dokumentation til produktets sikkerhedssikringsafdeling. Arten af ​​reaktionen og enhver sammenhæng med produktforbruget vil blive vurderet. Hvis beviset tyder på, at den bivirkning kan skyldes produktforbrug, vil emnet blive instrueret om at afbryde produktbrug og passende behandling vil blive tilvejebragt. I tilfælde af en negativ oplevelse, nødsituation eller andre problemer eller spørgsmål vedrørende din deltagelse i denne undersøgelse kan du kontakte følgende efterforskere:

Dr. Michael Glogauer på (905) 973-0664. I tilfælde af en medicinsk nødsituation, bedes du kontakte din læge.