Bestimmung der Lebensfähigkeit einer Rautendosis für Probiotika

Gingivitis ist eine Erkrankung des Munderkrankung, die weltweit 50% bis 90% der Erwachsenen betrifft (Albandar und Rams, 2002). Die Pathologie der Gingivitis kann durch Reduktion oder Entfernung von mikrobieller Plaque umgekehrt werden, die sich an hartem und Weichgeweben ansammelt und als Standard der Versorgung in der Branche gilt (Berezow Alex und Darveau Richard, 2010, Van der Weijden und Slot, 2011). Es wird angenommen, dass regelmäßige Mundhygiene in Kombination mit Therapeutika, die einen antimikrobiellen Nutzen bieten, den Beginn von Gingivitis abschwächen (van der Weijden und Slot, 2011, Gunsolley, 2006). Das Testen von Therapeutika auf Prophylaxegültig zur Minderung der Entwicklung von Gingivitis wurde jedoch nicht vollständig untersucht.

Neutrophile, eine Art weißer Blutkörperchen (Leukozyten), stellen eine Schlüsselkomponente des angeborenen Verteidigungssystems dar, das das parodontale Gewebe sowohl vor Gingivitis als auch vor Parodontitis schützt. Sie sind nicht nur die erste Zellverteidigungslinie, sondern gehören auch zu den am häufigsten vorkommenden Leukozyten innerhalb der parodontalen Gewebe (Hirschfeld, 2020). Zum Beispiel ist Gingivitis mit einem signifikanten Anstieg der Anzahl der Neutrophilen verbunden, die auf Parodontalgewebe wandern. Im Gegensatz dazu haben Personen mit zu wenigen Neutrophilen entweder durch angeborene Mängeln in Neutrophilenzahlen oder durch Transit (Lad 1 und 2) eine induzierte Neutropenie durch chemische Induktion mit antimitotischen Wirkstoffen wie Cyclophosamid auf, die sich anhaltend Parodontitis entwickeln. Ebenso entwickeln Studien an KO -Mäusen, die im Neutrophilen -Transit defekt sind, auch Parodontitis. In Übereinstimmung mit dem Schlüsselbeitrag von Neutrophilen sowohl zur Gingivitis als auch zur Parodontitis ist der Neutrophilen -Transit zum Gingivalgewebe stark reguliert. Das Parodontium enthält eine stark orchestrierte Expression ausgewählter angeborener Wirtsverteidigungsmediatoren, die den Transit von Neutrophilen vom stark vaskularisierten Gingivalgewebe zum Gingivalspalten, bei dem sie eine "Wand" zwischen dem Wirtsgewebe und dem Dental -Plaque -Biofilm formulieren, erleichtern.

Gingivitis ist eine reversible entzündliche Erkrankung, die durch die Ansammlung von Zahnplaque und die damit verbundene Störung der mikrobiellen Homöostase des Wirts verursacht wird. Während der Gingivitis wechselt die mikrobielle Gemeinschaft von grampositiven, gesundheitsassoziierten Bakterien wie Streptococcus-Arten zu gramnegativen Periopathogenen, einschließlich Arten der Gattungen der Gattungen Porphyromonas, Tannerella, Treponema und Prevotella. Diese dysbiotische Verschiebung löst Entzündungsreaktionen aus und führt zu Gewebeschäden und in einigen Fällen Fortschritte bei Parodontitis.

In einer kürzlich durchgeführten Studie (Kerns, 2023) über humane experimentelle Gingivitis wurde drei verschiedene Phänotypen, niedrige und langsame Responder-Wirt-Reaktions-Reaktions-Phänotypen identifiziert, die auf klinischen, entzündlichen und mikrobiellen Parametern basieren:

1. Hohe Responder: Schnelle Plaqueakkumulation begleitet von einem signifikanten Anstieg der gramnegativen Periopathogene und erhöhten Entzündungsmarker wie Interleukin-1β (IL-1β).
2. Niedrige Responder: Eine ähnliche Plaqueakkumulation wie hohe Responkel, aber niedrigere Entzündungen, was auf eine mehr gedämpfte Reaktion der Wirts auf bakterielle Dysbiose hinweist.
3. Langsame Responder: Verzögerte Plaqueakkumulation und mikrobielle Nachfolge mit längerer dominierter dominierter Gesundheits-assoziiertes Streptokokkenspezies. Diese Gruppe zeigte verzögerte oder verringerte Entzündungen und zeigte eine widerstandsfähigere mikrobielle Gemeinschaft und die Reaktion des Wirts.

Die mikrobielle Analyse ergab, dass die Persistenz nützlicher Streptokokkenspezies wie S. sanguinis und S. oralis bei langsamen und niedrigen Respondern mit einer Schutzwirkung gegen die Entstehung von Periopathogenen und der damit verbundenen entzündlichen Kaskade korreliert. Umgekehrt war der Verlust dieser vorteilhaften Bakterien bei hohen Respondern mit schwererer Entzündungen in Verbindung gebracht, was die kritische Rolle des oralen Mikrobioms bei der Modulation der Schwere der Gingivitis hervorhob.

Lantibiotische Salivaricine sind polyzyklische Peptide, die Lanthionin- und/oder β-Methyllanthioninreste enthalten, die durch bestimmte Stämme von Streptococcus salivius produziert werden, die sich fast ausschließlich in der menschlichen Mundhöhle befinden. Diese Bedeutung der Moleküle beruht auf ihrer antimikrobiellen Aktivität zu relevanten oralen Krankheitserregern, die durch die Entwicklung von probiotischen Stämmen des Speichels angewendet wurden. Salivaricine können sich jedoch auch als von großem Wert in der Entwicklung neuer und neuer antibakterieller Therapien in dieser Zeit der aufkommenden Antibiotikaresistenz erweisen (Barbour, Wescombe & Smith, 2020). In einer Studie von Barbour & Philip 2014 stellten sie fest, dass die Produktion von Bakteriocin, Levan-Skrase und grundlegende Sicherheitsmerkmale von S. Speichel-Stämmen, die aus gesunden malaysischen Probanden isoliert wurden, die ihr Potenzial für die Verwendung als Probiotika demonstrieren. Ein neues Bakteriocin -Produktionsmedium wurde mit potenzieller Skala -Anwendung für Pharmazeutika und Probiotika aus S. salivarius entwickelt, das verschiedene Lantibiotika erzeugt. Dies ist relevant für das klinische Management von Mundhöhlen und die obere Atemwege in der menschlichen Bevölkerung. Anhang 1 enthält eine Zusammenfassungstabelle, in der die relevanten klinischen Studien aufgeführt sind, in denen S. Salivarius verwendet wurde.

Vorgeschlagene Lösung: S. Salivarius sali-10

Wir schlagen vor, einen neuartigen Stamm, Streptococcus salivarius sali-10, als gezielte mikrobielle Intervention zur Modulation des oralen Mikrobioms und zur Verhinderung von Gingivitis. S. salivarius sali-10 ist hypotheziert zu:

• Halten Sie eine stabile Population von positiven Streptokokken während der Plaqueakkumulation bei.
• Hemmen Sie das Wachstum von Periopathogenen wie Porphyromonas, Tannerella und Prevotella durch Wettbewerb und Produktion von Speichelicin 10.
• Verzögern oder unterdrücken Sie die dysbiotische Verschiebung auf gramnegative Dominanz, wodurch die Entzündungsreaktion verringert wird.

Durch die Erhaltung der mikrobiellen Homöostase kann Sali-10 die bei langsamen Respondern beobachtete mikrobielle Widerstandsfähigkeit nachahmen und eine neue Strategie zur Prävention von Gingivitis bieten.

Bevor der therapeutische Wert von Streptococcus salivarius sali-10 bewertet werden kann, muss das Dosierungsformular validiert werden. Die klassische Methode zur Bereitstellung von oralen Probiotika ist in einer Rautenform, die den Einzelnen an der Raute saugt, bis sie sich auflöst. Sobald überprüft wird, dass diese Dosierungsform für Streptococcus salivarius sali-10 funktioniert, kann eine vollständige klinische Studie zur Bestimmung der therapeutischen Lebensfähigkeit durchgeführt werden.

2. Studieren Sie Ojektive

1. Ziel dieser Studie ist es, die kurzfristige Fähigkeit des Streptococcus salivarius sali-10-Lutschenabgabesystems zu bestimmen, um die Zusammensetzung des menschlichen oralen Mikrobioms und die orale Entzündungslast (Öl) zu verändern. Insbesondere wollen wir:

   • Bewerten Sie die Veränderung der Speichelspiegel an parodontaler Krankheit (z. B. P. Gingivalis, T. Forsythia, T. Denticola und P. Micra).
   • Bestimmen Sie die Änderung der nützlichen Bakterienspiegel (z. B. S. Salivarius, S. parasanguinis).
   • Bewerten Sie die Änderung der oralen Entzündung (Öl) durch Messung der oralen Neutrophilenzahlen.
2. Überwachung der kurzfristigen Einhaltung der 8-10 Teilnehmer an das klinische Protokoll

3.. Studienübersicht

Diese Studie wurde als offene, einarmige, explorative Pilotstudie ausgelegt, die über 7 Tage mit 8 bis 10 Teilnehmern abgeschlossen sein wird. Die Teilnehmer werden sich jede Nacht nach dem Bürsten und vor dem Schlafengehen eine Raute mit S. salivarius sali-10 (10 Milliarden Kfu/Rauten) selbst verabreichen. Die Teilnehmer vervollständigen zwei (2) Probenkits vor und einen nach den 7 Tagen.

5. Testprodukte/Interventionen Jeder Teilnehmer erhält sieben (7) Münz-Flavour-Sali-10-Lutschen. Sie werden angewiesen, täglich eine Raute nach dem Bürsten zu nehmen, indem sie sich im Mund auflösen lassen. Die Teilnehmer werden die SALI-10-Lutschen während der gesamten Studie verwenden. Jeder Teilnehmer erhält außerdem vier (4) in den häuslich verabreichte Testkits: zwei (2) Speichel -Sammelkits und zwei (2) Saline Rinse Collection Kits.

5.2 Abgabe, Speicherung und Rechenschaftspflicht Sobald vorgefertigt ist, erhalten alle Teilnehmer alle Studienmaterialien per Post. Dazu gehören die sieben (7) Lutschen und die vier (4) häuslichen Testkits: zwei (2) Speichel -Sammelkits und zwei (2) Salzspülen -Sammlungs -Kits. Die Probanden folgen den Anweisungen, wann und wie sie ihre Zähne putzen können. Diese Anweisungen werden im Abschnitt "Verfahren" erläutert.

Die Testkits sind in sich geschlossene im Handel erhältliche Kits, die alle Gebrauchsanweisungen enthalten. Die Teilnehmer erhalten Anweisungen, wie die Proben an Ostia Sciences Inc in der Edward St. 124, Toronto, Anzug 463, auf Kanada M5G 1G6 abgebrochen werden.

Die Teilnehmer werden angewiesen, alle Studienmaterialien zu werfen, die das Ende des 7-Tage-Versuchs.

6. Studienverfahren

6.2 Produktabgabe und Verwendung zu Hause

Das Produkt wird an den Teilnehmer in einer versiegelten Box verschickt, die Anweisungen für die Verwendung von Nutzung und Sicherheit zu Hause, einschließlich Notfallkontaktdaten, enthält. Um die Einhaltung der Patienten zu überwachen, beantragt der klinische Studienmanager eine E -Mail -Bestätigung am Ende der Studie, dass alle 7 Lutschenversorgung konsumiert wurden. Die Probanden erhalten eine eindeutige Identifikationsnummer in chronologischer Reihenfolge (z. B. von 1 bis 10), wenn sie sich in die Studie einschreiben. Die Probanden werden angewiesen, andere Mundhygieneprodukte zu vermeiden. Während der Studie wird es keine Ernährungsbeschränkungen geben.

Die Probanden werden angewiesen, jedes Mal zwei Minuten täglich (Morgen und Abend) mit Zahnpasta, Zahnbürste und Zahnseide zwei Minuten lang die Zähne zu putzen.

Die Sali-10-Lutschen werden vorverpackt, wenn sie jedem Teilnehmer übergeben werden.

6.3 TELECHTEN PRECREENING Potenzielle Studienteilnehmer, die sich an den Koordinator für klinische Studien wenden, um weitere Informationen über die Studie per E-Mail zu erhalten, werden dann telefonisch kontaktiert. Zu diesem Zeitpunkt wird der Rekrutierungsfragebogen (Anhang 3) ausgefüllt, um festzustellen, ob sie für die Screening -Phase der Studie in Frage kommen. Wenn das Thema als förderfähig eingestuft wird, erhalten sie das Formular für die Einverständniserklärung zum Lesen und Stellen von Fragen, die sie möglicherweise haben und unterschreiben. Das Screening wird durchgeführt, bis zehn (10) Probanden eingeschrieben sind.

Es wird keine persönlichen Besuche. Die Studienteilnehmer erhalten alle Studienmaterialien, zu denen die sieben (7) Lutschen und die vier (4) häuslichen Testkits gehörten: zwei (2) Speichel -Sammel -Kits und zwei (2) Saline Rinse Collection Kits. Die Probanden erhalten das Studienprodukt auch zur Verwendung zu Hause mit Anweisungen.

6,5 Tag 0 (Grundlinie)

Die Teilnehmer verwenden ein (1) Speichelkollektionskit und ein (1) Salzspülungskollektionskit. Sie werden die Proben gemäß den angegebenen Anweisungen in Ostia Sciences abgeben. Nach der Probenentnahme beginnen die Teilnehmer 7 Tage lang täglich die Lutschenjagen. Die Teilnehmer nehmen nach dem Bürsten eine Raute. Sie ermöglichen es den Lutschen, sich aufzulösen, ohne zu beißen oder zu schlucken, und vermeiden Sie es, eine Stunde lang zu essen und zu trinken. Die Teilnehmer werden für die ordnungsgemäße Mundhygiene angewiesen und werden angewiesen, ihre häusliche Mundhygiene zusätzlich zur Verwendung ihres zugewiesenen Produkts für 7 Tage (1 Woche) fortzusetzen. Die Teilnehmer werden angewiesen, den Container der Lutschen am Ende der Studie zu verwerfen.

6.6 Tag 7 (Fertigstellung)

24 Stunden nach der Verwendung des siebten (7.) Rautens verwenden die Teilnehmer ein (1) Speichel -Sammelkit und ein (1) Saline Rinse Collection Kit. Sie werden die Proben gemäß den angegebenen Anweisungen in Ostia Sciences abgeben. Studienteilnehmer verwerfen verbleibende Studienmaterialien, die sie möglicherweise haben. Per E-Mail bestätigt der Studienmanager die Einhaltung des Protokolls und gibt Anweisungen nach dem Studium an. Die Probanden werden informiert, dass dies das Ende der Studie ist. Sie werden mitgeteilt, dass sie ihre reguläre Mundhygiene wieder aufnehmen können. Anschließend werden wir die Teilnehmer um ihr Feedback in Bezug auf ihre Erfahrungen bitten.

7. Studienverfahren und klinische Registrierungen

7.7 Speichel- und Oralspülungsproben

Das Speichelkollektionskit ist das Supersal2 Universal Speichel Collection Kit, die Anweisungen finden Sie in Anhang 10. Die Speichelproben werden verarbeitet und von DNA analysiert

DNA -Extraktion und dann werden qPCR verwendet, um die volle Änderung spezifischer Bakterien in den Speichelproben, insbesondere pathogenen Bakterien, zu quantifizieren (P. Gingivalis, T. Forsythia, T. Denticola, P. Micra) und nützliche Bakterien (S. Salivarius, S. parasanguinis).

Das orale Spülenkollektionskit wird von Ostia Sciences mit Anweisungen in Anhang 11 hergestellt. Es werden orale Spülenproben auf orale Neutrophilenzahlen als Marker für orale Entzündungslast (Öl) analysiert.

Da alle Forschungsprojekte auf festgelegten Stichproben durchgeführt werden, ist es nicht möglich, die einzelnen Ergebnisse an die Teilnehmer zurückzugeben. Alle Proben werden unmittelbar nach dem Test zerstört. Da alle Untersuchungen zu de-identifizierten, aggregierten Daten durchgeführt werden, ist es nicht möglich, die Daten von einem bestimmten Teilnehmer zurückzuziehen, wenn Stichproben aus der Studie zurückgezogen werden.

8.0 Statistische Analysen

Für die statistische Analyse werden die vollständige Änderung der Mikroben und des Öls zwischen Basislinie und Tag 7 mit dem gepaarten Wilcoxon -Test verglichen.

9.0 Bericht über unerwünschte Ereignisse

Probanden werden mögliche Nebenwirkungen oder Nebenwirkungen aus der Exposition gegenüber dieser Methode oder dem Produkt erzählt. Orale Reizung ist möglich. Wenn Nebenwirkungen auftreten, wird erwartet, dass es mild und vorübergehend ist. Jedes Ereignis hört auf, wenn das Subjekt nicht mehr dem Instrument ausgesetzt ist oder zu seiner normalen Mundhygiene zurückkehrt. Die Ermittler werden alle negativen Reaktionen aufzeichnen und diese Dokumentation an die Abteilung für Produktsicherheitssicherung melden. Die Art der Reaktion und jegliche Korrelation mit der Produktnutzung wird bewertet. Wenn die Nachweise darauf hinweisen, dass die nachteilige Reaktion möglicherweise auf die Produktverwendung zurückzuführen ist, wird das Subjekt angewiesen, die Produktkonsum einzustellen, und eine angemessene Behandlung wird bereitgestellt. Im Falle einer nachteiligen Erfahrung, eines Notfalls oder anderer Probleme oder Fragen zu Ihrer Teilnahme an dieser Studie können Sie die folgenden Ermittler wenden:

Dr. Michael Glogauer unter (905) 973-0664. Bei medizinischer Notfall wenden Sie sich bitte an Ihren Arzt.