Określenie żywotności dawki pada na probiotyki

Zapalenie dziąseł jest doustnym chorobą wpływającą na 50% do 90% dorosłych na całym świecie (Albandar i Rams, 2002). Patologię zapalenia dziąseł można odwrócić poprzez zmniejszenie lub usunięcie płytki drobnoustrojowej, która kumuluje się na twardych i miękkich tkankach i jest uważana za standard opieki w branży (Berezow Alex i Darveau Richard, 2010, Van der Weijden i Slot, 2011). Uważa się, że regularna higiena jamy ustnej w połączeniu z terapeutykami zapewniająca korzyść przeciwdrobnoustrojową łagodzi zapalenie dziąseł (van der Weijden i Slot, 2011, Gunsolley, 2006). Jednak testowanie terapeutyków pod kątem profilaktyki korzyści w celu złagodzenia rozwoju zapalenia dziąseł nie zostało w pełni zbadane.

Neutrofile, rodzaj białych krwinek (leukocyt), stanowią kluczowy składnik wrodzonego układu obronnego, który chroni tkankę przyzębia zarówno przed zapaleniem dziąseł i zapalenia przyzębia. Są nie tylko pierwszą linią obrony komórkowej, ale należą do najliczniejszych leukocytów w tkankach przyzębia (Hirschfeld, 2020). Na przykład zapalenie dziąseł wiąże się ze znacznym wzrostem liczby neutrofili, które migrują do tkanki przyzębia. Natomiast osoby z zbyt małą neutrofilami wywołane przez wrodzone niedobory liczby neutrofili lub tranzytu (LAD 1 i 2) lub mają indukowaną neutropenię przez indukcję chemiczną ze środkami antymitotycznymi, takimi jak cyklofozamid niezmiennie rozwijający się zapalenie przyzębia. Podobnie badania u myszy KO, które są wadliwe w tranzycie neutrofili, również rozwijają zapalenie przyzębia. Zgodnie z kluczowym wkładem neutrofili w zapaleniu dziąseł i zapaleniu przyzębia, tranzyt neutrofili do tkanki dziąseł jest wysoce regulowany. Periodontium zawiera wysoce zaaranżowaną ekspresję wybranych mediatorów wrodzonych obrony gospodarza, które ułatwiają tranzyt neutrofili z wysoce unaczynionej tkanki dziąseł do szczeliny dziąseł, gdzie tworzą „ścianę” między tkanką żywicielską a biofilmem płytki zębowej.

Zapalenie dziąseł jest odwracalnym stanem zapalnym spowodowanym gromadzeniem się płytki zębowej i związanym z tym zakłóceniem homeostazy gospodarza. Podczas zapalenia dziąseł środka mikrobiologiczne przechodzą od dominowania przez bakterie związane z Gram-dodatnie, takie jak gatunki Streptococcus, na gram-ujemne okołopatogeny, w tym gatunki rodzajów porfiromonów, Tannerella, Treponema i Prevotella. Ta dysbiotyczna zmiana wyzwala reakcje zapalne, prowadząc do uszkodzenia tkanek, aw niektórych przypadkach progresji do zapalenia przyzębia.

Ostatnie badanie (Kerns, 2023) na ludzkim eksperymentalnym zapaleniu dziąseł zidentyfikowało trzy odrębne fenotypy odpowiedzi gospodarza, wysokie, niskie i powolne oparte na parametrach klinicznych, zapalnych i mikrobiologicznych:

1. Wysokie respondenci: Szybka akumulacja płytki nazębnej, któremu towarzyszy znaczny wzrost liczby okołopatogenów Gram-ujemnych i podwyższonych markerów zapalnych, takich jak interleukina-1β (IL-1β).
2. Niscy odpowiada: podobna akumulacja płytki nazębnej do wysokich odpowiadających, ale niższe zapalenie, co sugeruje bardziej stonowaną odpowiedź gospodarza na dysbiozę bakteryjną.
3. Powolni respondenci: opóźniona akumulacja płytki nazębnej i sukcesja drobnoustrojów, z przedłużoną dominacją gatunków Streptococcus związanych ze zdrowiem. Ta grupa wykazywała opóźnione lub zmniejszone zapalenie, wykazując bardziej odporną społeczność drobnoustrojów i reakcję gospodarza.

Analiza drobnoustrojów ujawniła, że ​​trwałość korzystnych gatunków Streptococcus, takich jak S. sanguinis i S. oralis, w powolnych i niskich respondentach koreluje z ochronnym działaniem przed pojawieniem się okołopatogen i związanej z nią kaskady zapalnej. I odwrotnie, utrata tych korzystnych bakterii u wysokich respondentów była powiązana z cięższym stanem zapalnym, podkreślając kluczową rolę doustnego mikrobiomu w modulowaniu nasilenia zapalenia dziąseł.

Saliwarycyny lantibiotyczne są wielopierplicznymi peptydami zawierającymi reszty lantioniny i/lub β-metylantioniny, które są wytwarzane przez niektóre szczepy Streptococcus salivarius, które prawie wyłącznie mieszkają w ludzkiej jamie jamy ustnej. Cząsteczki te znaczenie wynikają z ich aktywności przeciwdrobnoustrojowej w stosunku do odpowiednich doustnych patogenów, które zostały zastosowane poprzez rozwój szczepów probiotycznych wytwarzających ślinę. Jednak śliny mogą również okazać się bardzo cenne w rozwoju nowych i nowych terapii przeciwbakteryjnych w erze powstającej oporności na antybiotyki (Barbour, Wescombe i Smith, 2020). W badaniu przeprowadzonym przez Barbour i Filip 2014 odkryli, że bakteriocyna, produkcja lewańsko-sukrzy i podstawowe cechy bezpieczeństwa szczepów S. salivarius izolowane od zdrowych osób malezyjskich wykazujące ich potencjał stosowania jako probiotyki. Opracowano nowe pożywkę produkcyjną bakteriocyny z potencjalnym zastosowaniem skali w farmaceutykach i probiotykach z S. salivarius wytwarzających różne lantibiotyki. Jest to istotne dla klinicznego leczenia jamy ustnej i górnych dróg oddechowych w populacji ludzkiej. Dodatek 1 zawiera tabelę podsumowującą, która zawiera odpowiednie badania kliniczne, które wykorzystały S. salivarius.

Proponowane rozwiązanie: S. salivarius sali-10

Proponujemy zastosowanie nowego szczepu, Streptococcus salivarius Sali-10, jako ukierunkowanej interwencji drobnoustrojów w celu modulowania doustnego mikrobiomu i zapobiegania zapaleniu dziąseł. S. salivarius sali-10 jest hipoteza do:

• Utrzymuj stabilną populację korzystnych paciorkowców podczas akumulacji płytki.
• Hamować wzrost okołopatogen, takich jak porfiromonas, tannerella i prevotella poprzez konkurencję i produkcję saliwarycyny 10.
• Opóźnij lub tłumią dysbiotyczną przesunięcie do dominacji Gram-ujemnej, zmniejszając w ten sposób odpowiedź zapalną.

Zachowując homeostazę drobnoustrojów, Sali-10 może naśladować odporność drobnoustrojów obserwowaną u powolnych respondentów, oferując nową strategię zapobiegania zapaleniu dziąseł.

Zanim można ocenić wartość terapeutyczną Streptococcus saliius Sali-10, należy zatwierdzić jego formę dawkowania. Klasyczna metoda dostarczania doustnych probiotyków jest w postaci ssania, mając jednostkę do ssania pastylki, dopóki się nie rozpuści. Po sprawdzeniu, że ta forma dawkowania działa na Streptococcus salivarius Sali-10, można przeprowadzić pełne badanie kliniczne w celu ustalenia jej żywotności terapeutycznej.

2. Studiuj okręty

1. Celem tego badania jest określenie krótkoterminowej zdolności systemu dostarczania streptococcus salivarius sali-10 somenges w celu modyfikacji ludzkiego składu mikrobiomu doustnego i doustnego obciążenia zapalnego (olej). W szczególności staramy się:

   • Oceń zmianę poziomów bakterii związanych z chorobą przyzębia (np. P. gingivalis, T. Forsythia, T. denticola i P. micra).
   • Określ zmianę korzystnych poziomów bakterii (np. S. salivarius, S. parasanguinis).
   • Oceń zmianę doustnego obciążenia zapalnego (olej) poprzez pomiar doustnych liczby neutrofili.
2. Do monitorowania krótkoterminowego przestrzegania 8-10 uczestników do protokołu klinicznego

3. Przegląd badania

To badanie zostało zaprojektowane jako otwarte, jednoramienne badanie pilotażowe, które ma zostać ukończone w ciągu 7 dni z 8-10 uczestnikami. Uczestnicy samodzielnie przyznają jedną ssokę zawierającą S. salivarius Sali-10 (10 miliardów CFU/pastylki) każdej nocy po szczotkowaniu i przed snem. Uczestnicy ukończą dwa (2) domowe zestawy próbek, jeden przed i jeden po 7 dniach.

5. Produkty testowe/interwencje każdy uczestnik otrzyma siedem (7) slaków z sali z mennicami. Zostaną poinstruowani, aby codziennie przyjmować ssanie po szczotkowaniu, pozwalając, by rozpuścił się w ustach. Uczestnicy będą korzystać z ssek ssakowych SALI-10 podczas badania. Każdy uczestnik otrzyma również cztery (4) domowe zestawy testowe: dwa (2) zestawy zbierania śliny i dwa (2) zestawy do zbierania spłukiwania soli fizjologicznej.

5.2 DOSTAWANIE, Mieć i Odpowiedzialność Po wstępnym przetestowaniu wszyscy uczestnicy otrzymają wszystkie materiały do ​​nauki pocztą. Obejmuje to siedem (7) sutków i czterech (4) domowych zestawów testowych: dwa (2) zestawy do zbierania śliny oraz dwa (2) zestawy do zbierania płukania soli fizjologicznej. Przedmioty będą przestrzegać instrukcji, kiedy i jak myć zęby. Instrukcje te wyjaśniono w sekcji procedury.

Zestawy testowe są samodzielnymi zestawami dostępnymi w handlu, które zawierają wszystkie instrukcje użytkowania. Uczestnicy otrzymają instrukcje, w jaki sposób zrzuć próbki do Ostia Sciences Inc przy 124 Edward St., Toronto, garnitur 463, na Kanadzie M5G 1G6.

Uczestnicy zostaną poinstruowani, aby wyrzucić wszystkie materiały do ​​nauki, że koniec 7-dniowej próby.

6. Procedury badań

6.2 Wydawanie produktów i wykorzystanie w domu

Produkt zostanie wysłany do uczestnika w zapieczętowanym polu, który będzie zawierał instrukcje dotyczące korzystania z domu i informacji o bezpieczeństwie, w tym awaryjne dane kontaktowe. Aby monitorować zgodność pacjentów, kierownik ds. Badań klinicznych poprosi o potwierdzenie e -maila na końcu badania, że ​​wszystkie 7 somonów zostało spożytych. Osobnikom przypisano unikalny numer identyfikacyjny w kolejności chronologicznej (np. Od 1 do 10), gdy zapisują się do badania. Badani zostaną poinstruowani, aby uniknąć stosowania innych produktów higieny jamy ustnej. Podczas badania nie będzie ograniczeń dietetycznych.

Badani zostaną poinstruowani, aby myć zęby dwa razy dziennie (rano i wieczorem) przez dwie minuty za każdym razem pasta do zębów i szczoteczką i nioną.

Sali-10 pasengy zostaną wstępnie zapakowane, gdy zostanie przekazane każdemu uczestnikowi.

6.3 Telefon potencjalni uczestnicy badania, którzy skontaktują się z koordynatorem badań klinicznych, aby uzyskać więcej informacji na temat badania za pośrednictwem poczty elektronicznej, zostaną skontaktowane przez telefon. Na tym etapie zostanie zakończony kwestionariusz rekrutacyjny (załącznik 3) w celu ustalenia, czy kwalifikują się do fazy badań badania. Jeśli podmiot zostanie uznany za kwalifikujący się, otrzyma formularz świadomej zgody do odczytania i zadawania wszelkich pytań, które mogą mieć i podpisać. Badanie będzie przeprowadzane do momentu zapisania się dziesięciu (10) pacjentów.

Nie będzie wizyt osobistych. Uczestnicy badania zostaną wysłani do wszystkich materiałów badawczych, które obejmowały siedem (7) pastyloty i czterech (4) domowych zestawów testowych: dwa (2) zestawy do zbierania śliny i dwa (2) zestawy do zbierania płukania soli fizjologicznej. Badani otrzymają również produkt badawczy do użytku w domu z wskazówkami.

6,5 dzień 0 (linia bazowa)

Uczestnicy wykorzystają jeden (1) zestaw do zbierania śliny i jeden (1) zestaw do kolekcji płukania soli fizjologicznej. Zrzucą próbki do Ostia Sciences zgodnie z danymi instrukcjami. Po pobraniu próbek uczestnicy zaczną korzystać z psikusów dziennie przez 7 dni. Uczestnicy wezmą jedną ssanie po szczotkowaniu. Pozwolą się rozpuścić w sobie ssanie bez gryzienia lub połykania i unikać jedzenia i picia przez godzinę. Uczestnicy zostaną poinstruowani w sprawie właściwej higieny jamy ustnej i zostaną poinstruowani, aby kontynuować domową higienę jamy ustnej oprócz korzystania z wyznaczonego produktu przez 7 dni (1 tydzień). Uczestnicy zostaną poinstruowani, aby odrzucić pojemnik na pasty na koniec badania.

6.6 Dzień 7 (zakończenie)

24 godziny po skorzystaniu z siódmej (7.) pasty do pędzla uczestnicy użyją jednego (1) zestawu do zbierania śliny i jednego (1) zestawu do zbierania spłukiwania soli fizjologicznej. Zrzucą próbki do Ostia Sciences zgodnie z danymi instrukcjami. Uczestnicy badania odrzucą wszelkie pozostałe materiały do ​​nauki, które mogą mieć. Za pośrednictwem poczty elektronicznej kierownik badań potwierdzi przestrzeganie protokołu i poda instrukcje po studiach. Badani zostaną poinformowani, że jest to koniec badania. Zostaną powiedziane, że mogą wznowić regularną higienę jamy ustnej. Następnie poprosimy uczestników o ich opinię na temat ich doświadczenia.

7. Procedury badań i rejestracje kliniczne

7.7 Próbki śliny i doustnie płukania

Zestaw do zbierania Saliva to zestaw kolekcji Supersal2 Universal Saliva, instrukcje można znaleźć w załączniku 10. Próbki śliny będą przetwarzane i będą analizowane przez DNA

Ekstrakcja DNA, wówczas QPCR zostanie zastosowany do ilościowego ilościowego zmiany określonych bakterii w próbkach śliny, szczególnie patogennych bakterii (P. Gingivalis, T. Forsythia, T. denticola, P. micra) i korzystne bakterie (S. salivarius, S. parasanguinis).

Oral Rinse Collection Zestaw jest produkowany przez Ostia Sciences, z instrukcjami znalezionymi w załączniku 11. Tam doustne próbki płukania zostaną przeanalizowane pod kątem doustnych liczby neutrofili jako marker doustnego obciążenia zapalnego (olej).

Ponieważ wszystkie projekty badawcze zostaną wykonane na próbkach zidentyfikowanych, nie będzie możliwe zwrócenie indywidualnych wyników uczestnikom. Wszystkie próbki zostaną zniszczone natychmiast po testowaniu. Ponieważ wszystkie badania zostaną przeprowadzone w zakresie zidentyfikowanych, zagregowanych danych, nie będzie możliwe wycofanie danych od konkretnego uczestnika, gdy próbki zostaną wycofane z badania.

8.0 Analizy statystyczne

Do analizy statystycznej pełna zmiana drobnoustrojów i oleju zostanie porównana między linią wyjściową a zakończeniem dnia 7 za pomocą sparowanego testu Wilcoxona.

9.0 Raport o zdarzeniach niepożądanych

Badani zostaną powiedziane o wszelkich możliwych niepożądanych reakcjach lub skutkach ubocznych narażenia na tę metodę lub produkt. Możliwe jest podrażnienie jamy ustnej. Jeśli wystąpią skutki uboczne, oczekuje się, że będą łagodne i tymczasowe. Każde wydarzenie zatrzyma się, gdy pacjent przestanie być narażony na instrument lub powróci do normalnej higieny jamy ustnej. Śledczy zarejestrują wszystkie niepożądane reakcje i zgłoszą tę dokumentację działowi zapewnienia bezpieczeństwa produktu. Charakter reakcji i wszelkie korelacje z wykorzystaniem produktu zostaną ocenione. Jeżeli dowody wskazują, że reakcja niepożądana może wynikać z użycia produktu, podmiot zostanie poinstruowany o przerwie stosowania produktu i zostanie zapewnione odpowiednie leczenie. W przypadku niekorzystnego doświadczenia, sytuacji awaryjnych lub innych problemów lub pytań dotyczących uczestnictwa w tym badaniu możesz skontaktować się z następującymi badaczami:

Dr Michael Glogauer w (905) 973-0664. W przypadku awarii medycznej prosimy o kontakt z lekarzem.