Immunothérapie basée sur le protéome des métastases cérébrales du cancer du sein

L'essai comprendra 60 cas de métastases cérébrales réfractaires du cancer du sein (BMBC) de malignité différente après au moins une ligne de chimiothérapie standard et un cycle complet de radiothérapie.

Le traitement de première ligne du BMBC implique des cellules souches hématopoïétiques allogéniques (CSH), un vaccin dendritique (DV) et des lymphocytes cytotoxiques (CTL).

Les CSH sont utilisées pour stimuler la réponse immunitaire adoptive individualisée, pour affecter les cellules tumorales de manière toxique et pour réguler les cellules souches tumorales (TSC) de manière ciblée afin de supprimer leur potentiel de reproduction et de prolifération. Pour obtenir des HSC, le donneur reçoit 8 administrations sous-cutanées de facteur de stimulation des colonies de granulocytes (G-CSF) avec un intervalle de 8 à 10 heures pendant 4 jours. Les trois premiers jours, une dose unique est de 2,5 mcg pour 1 kg de poids, le dernier jour, la dose est doublée. Les cellules souches sont récoltées au jour 5. Les globules rouges sont prélevés par centrifugation. Le contenu en marqueurs cellulaires est évalué par cytométrie en flux. Le résultat est évalué après enrichissement en cytoconcentré et élimination des cellules matures et du plasma. La préparation est conservée en tubes de 4 ml avec cryoprotecteur et solution de polyglucine à 10 %. La proportion de cellules souches n'est pas inférieure à 0,5x106 CD34+ et la proportion de lymphocytes n'est pas inférieure à 0,5x109 par administration.

L'échantillon de tumeur cérébrale est obtenu par biopsie stéréotaxique/endoscopique/ouverte de tous les patients inclus dans l'essai. Les cellules tumorales (TC) et les TSC sont isolées immunochimiquement de l'échantillon de biopsie BMBC. Une partie de l'échantillon tumoral est utilisée pour les tests histologiques, cytologiques et immunochimiques standard, tandis que les cellules tumorales (TC) et les cellules souches tumorales (TSC) (CD44+, CD24-/LowLin-) sont isolées de l'autre partie.

Les cellules dendritiques sont isolées des cellules mononucléaires du sang périphérique et cultivées. L'échantillon de tumeur fournit des antigènes spécifiques de la tumeur pour préparer le vaccin dendritique (DV).

La préparation des CTL vise à renforcer l'effet cytotoxique sur la tumeur en raison du grand nombre de CTL en circulation. Des lymphocytes cytotoxiques (CTL) sont isolés d'environ 100 ml de sang périphérique après 3 administrations de DV, et parmi eux des cellules dendritiques (CD) sont cultivées. Ensuite, le sang périphérique est prélevé à plusieurs reprises et les lymphocytes sont isolés. Les CTL sont co-cultivés avec des DC chargées d'antigènes tumoraux (thérapie de première intention) ou de protéines recombinantes analogues à des protéines oncospécifiques clés (thérapie de deuxième intention) plusieurs fois pour augmenter leur nombre (108-109). Leur immunophénotype est détecté et les CTL sont cryoconservés. La première stimulation des CTL avec les DC dure 6 à 8 jours, la seconde dure 2 à 4 jours, les 2 jours suivants les lymphocytes sont stimulés pour la troisième et la quatrième fois. Et puis les lymphocytes reçus sont stimulés par l'IL-2 pendant 2 jours.

Six mois après la fin du traitement de première ligne, l'efficacité est évaluée et la cohorte démontrant l'efficacité continue le traitement, tandis que la cohorte ne démontrant aucune efficacité poursuivra l'essai avec le traitement de deuxième ligne.

Le bras thérapeutique de deuxième ligne utilise la DV avec des protéines recombinantes analogues aux protéines oncospécifiques clés, des CTL autologues et des CSH autologues avec un protéome modifié.

Les HSC autologues sont reçues du participant à l'essai comme décrit précédemment. La préparation cellulaire de CSH pour le bras comparateur actif est obtenue à partir du cytoconcentré de cellules mononucléaires autologues du sang périphérique après mobilisation comme spécifié pour le bras expérimental. Les antigènes spécifiques de la tumeur pour le groupe comparateur actif sont fournis par le tissu tumoral du patient.

Les TC et les TSC ainsi que les HSC du patient subissent une cartographie complète du transcriptome et un profilage de l'expression génique (CTMGEP) et une cartographie du protéome et un profilage des protéines (PMPP). Les protéines oncospécifiques (OSP) clés (3 ou 4 protéines avec une intensité normalisée maximale) sont déterminées en fonction des tests protéomiques des TC, tandis que le profilage protéomique des TSC et l'utilisation de bases de données de relations protéine-protéine permettent la détection des voies de transduction du signal intracellulaire (ISTP) non affectées par la cancérogénèse et capables de régulation. En outre, des cibles membranaires réceptrices affectant ces voies de signal (protéines membranaires acceptrices) sont détectées, ainsi que des protéines capables de les activer (ligands protéiques). Le CTMGEP des TSC confirme l'ISTP fonctionnel diagnostiqué. Modélisation mathématique du CTMGEP et comparaison avec Affymetrix GeneChip Human genome U133A Array Les données révèlent des perturbagènes capables d'induire chimiquement des CSH et de modifier leur profil protéomique afin d'assurer la sécrétion des ligands protéiques requis. L'analyse de la base de données permet de comprendre comment les changements dans l'expression des gènes induits par un agent de faible poids moléculaire ou un micro ARN correspondent aux changements observés dans le profil examiné. Si la correspondance est significative, on suppose que l'agent ou des agents similaires peuvent initier l'effet. Si l'anticorrélation est significative, l'agent est censé initier un effet opposé dans la modification de l'expression génique. Le transcriptome des CSH est modifié par co-culture de cellules mononucléaires avec des perturbagènes. Leur efficacité biologique est évaluée in vitro en bioréacteur Homunculus. Ensuite, la préparation est stockée comme décrit précédemment.

Le DV individuel est préparé à partir du concentré leucocytaire du sang périphérique du patient. Les lymphocytes sont isolés, cultivés avec du G-CSF et de l'interleukine-2, conditionnés par des antigènes spécifiques de tumeur, TNF-α et PGE2 pendant 48 heures et chargés avec des protéines recombinantes identiques aux principaux antigènes spécifiques de tumeur détectés lors des tests protéomiques des TC. Le mécanisme de base de l'effet immunitaire individuel DV est l'élaboration de lymphocytes toxiques tumoraux par l'organisme du patient.

Les CTL sont obtenus comme décrit précédemment. L'intervention est décrite dans la section appropriée.

La toxicité sera évaluée selon les critères CTC-NCI. L'efficacité est évaluée selon les critères suivants :

1. Effet complet - disparition complète de tous les foyers tumoraux
2. Effet partiel - réduction de la taille de la tumeur et/ou des foyers métastatiques d'au moins 50 % et aucun signe de nouveaux néoplasmes
3. Stabilisation - réduction de la taille des foyers tumoraux de moins de 50 % et aucun signe de nouveaux néoplasmes
4. Progrès - croissance des foyers tumoraux pendant la thérapie. En cas d'effet mosaïque, lorsqu'une partie des foyers progresse et une partie est stable ou en réduction, la thérapie est poursuivie mais les cas sont analysés en dehors du contexte "Réponse à la thérapie"