Proteombaserad immunterapi av hjärnmetastaser från bröstcancer

Försöket kommer att omfatta 60 fall av refraktorhjärnmetastaser från bröstcancer (BMBC) av olika maligniteter efter inte mindre än en linje av standardkemoterapi och fullständig strålbehandling.

Den första linjens terapi av BMBC involverar allogena hematopoetiska stamceller (HSC), dendritiskt vaccin (DV) och cytotoxiska lymfocyter (CTL).

HSCs används för att stimulera individualiserat adoptivt immunsvar, för att påverka tumörceller toxiskt och för att reglera tumörstamceller (TSC) målinriktat för att undertrycka deras reproduktiva och proliferativa potential. För att erhålla HSC får donatorn 8 subkutana administreringar av granulocytkolonistimulerande faktor (G-CSF) med 8-10 timmars intervall under 4 dagar. De första tre dagarna är en engångsdos 2,5 mikrogram per 1 kg vikt, sista dagen fördubblas dosen. Stamcellerna skördas vid dag 5. Röda blodkroppar tas ut genom centrifugering. Innehållet av cellmarkörer utvärderas med flödescytometri. Resultatet utvärderas efter anrikning av cytokoncentrat och avlägsnande av mogna celler och plasma från det. Preparatet förvaras i rör per 4 ml med kryoskyddsmedel och 10% polyglucinlösning. Stamcellsandelen är inte mindre än 0,5x106 CD34+, och lymfocytandelen är inte mindre än 0,5x109 per administrering.

Provet av hjärntumör erhålls genom stereotaxisk/endoskopisk/öppen biopsi från alla patienter som ingår i försöket. Tumörcellerna (TC) och TSC:er är immunkemiskt isolerade från BMBC-biopsiprov. En del av tumörprovet används för standard histologisk, cytologisk och immunokemisk testning, medan tumörceller (TC) och tumörstamceller (TSC) (CD44+, CD24-/LowLin-) isoleras från den andra delen.

Dendritiska celler isoleras från perifera mononukleära blodceller och odlas. Tumörprov tillhandahåller tumörspecifika antigener för att förbereda det dendritiska vaccinet (DV).

Framställning av CTL syftar till att förbättra cytotoxisk effekt på tumör på grund av ett stort antal cirkulerande CTL. Cytotoxiska lymfocyter (CTL) isoleras från cirka 100 ml perifert blod efter 3 DV-administrationer, och av dem odlas dendritiska celler (DC). Därefter tas perifert blod upprepade gånger och lymfocyter isoleras. CTL:erna samodlas med DC:er laddade med tumörantigener (första linjens terapi) eller rekombinanta proteiner analoga med onkospecifika nyckelproteiner (andra linjens terapi) flera gånger för att utöka deras antal (108-109). Deras immunfenotyp detekteras och CTL:er kryokonserveras. Den första stimuleringen av CTLs med DCs varar 6-8 dagar, den andra varar 2-4 dagar, nästa 2 dagar stimuleras lymfocyterna för tredje och fjärde gången. Och sedan stimuleras de mottagna lymfocyterna av IL-2 i 2 dagar.

Sex månader efter avslutad första linjens terapi utvärderas effektiviteten och den kohort som visar effektivitet fortsätter terapin, medan den kohort som inte visar någon effektivitet kommer att fortsätta försöket med den andra linjens terapi.

Den andra linjens terapiarm använder DV med rekombinanta proteiner analoga med onkospecifika nyckelproteiner, autologa CTL:er och autologa HSC:er med modifierat proteom.

Autologa HSC:er tas emot från försöksdeltagaren som beskrivits tidigare. Cellberedning av HSC för aktiv komparatorarm erhålls av cytokoncentratet av autologa mononukleära celler av perifert blod efter mobilisering som specificerats för experimentarmen. Tumörspecifika antigener för aktiv komparatorgrupp tillhandahålls av patientens tumörvävnad.

TCs och TSCs såväl som HSCs av patienten genomgår fullständig transkriptomkartläggning och genuttrycksprofilering (CTMGEP) och proteomkartläggning och proteinprofilering (PMPP). Nyckel (3 eller 4 proteiner med maximal normaliserad intensitet) onkospecifika proteiner (OSP) bestäms enligt proteomtestning av TC:er, medan proteomprofilering av TSC:er och användning av databaser med protein-protein-relationer tillåter detektion av intracellulära signaltransduktionsvägar (ISTP) opåverkade genom cancerframkallande och kan reglera. Dessutom detekteras receptormembranmål för att påverka dessa signalvägar (acceptormembranproteiner), såväl som proteiner som kan aktivera dem (proteinligander). CTMGEP av TSC bekräftar diagnostiserad funktionell ISTP. Matematisk modellering av CTMGEP och jämförelse med Affymetrix GeneChip Humant genom U133A Array-data avslöjar perturbagener som kan kemiskt inducera HSC: er och att modifiera deras proteomprofil för att tillhandahålla utsöndring av erforderliga proteinligander. Databasanalysen möjliggör förståelse av hur förändringar i genuttryck inducerade av ett lågmolekylärt medel eller mikro-RNA överensstämmer med de förändringar som observerats i den undersökta profilen. Om korrespondensen är betydande antas det att agenten eller liknande agenter kan initiera effekten. Om antikorrelation är signifikant, antas medlet initiera en motsatt effekt vid genuttrycksmodifiering. Transkriptomet av HSCs modifieras genom samodling av mononukleära celler med perturbagener. Deras biologiska effektivitet utvärderas in vitro i Homunculus bioreaktor. Därefter lagras preparatet som beskrivits tidigare.

Individuell DV framställs av leukokoncentratet av perifert blod från patienten. Lymfocyterna isoleras, odlas med G-CSF och interleukin-2, konditioneras av tumörspecifika antigener, TNF-α och PGE2 under 48 timmar och laddas med rekombinanta proteiner identiska med nyckeltumörspecifika antigener som upptäckts vid proteomisk testning av TC. Den grundläggande mekanismen för individuell DV-immuneffekt är utarbetandet av tumörtoxiska lymfocyter av patientens organism.

CTL erhålls såsom beskrivits tidigare. Insatsen beskrivs i lämpligt avsnitt.

Toxiciteten kommer att utvärderas enligt CTC-NCI-kriterier. Effektiviteten bedöms enligt följande kriterier:

1. Fullständig effekt - fullt försvinnande av alla tumörhärdar
2. Partiell effekt - minskning av tumörstorlek och/eller metastaserande härdar med inte mindre än 50 % och inga tecken på nya neoplasmer
3. Stabilisering - minskning av tumörfocis storlek med mindre än 50% och inga tecken på nya neoplasmer
4. Framsteg - tillväxt av tumörhärdar under behandlingen. Vid mosaikeffekt, när en del av foci fortskrider och en del är stabil eller reducerande, fortsätter behandlingen men fallen analyseras utanför sammanhanget "Respons to the therapy"