Imunoterapia baseada em proteoma de metástases cerebrais de câncer de mama

O estudo incluirá 60 casos de metástases cerebrais refratárias de câncer de mama (BMBC) de diferentes malignidades após pelo menos uma linha de quimioterapia padrão e curso completo de radioterapia.

A terapia de primeira linha de MBBC envolve células-tronco hematopoiéticas alogênicas (HSCs), vacina dendrítica (DV) e linfócitos citotóxicos (CTLs).

As HSCs são usadas para estimular a resposta imune adotiva individualizada, para afetar as células tumorais de forma tóxica e para regular as células-tronco tumorais (TSCs) de forma direcionada, a fim de suprimir seu potencial reprodutivo e proliferativo. Para obter HSC o doador recebe 8 administrações subcutâneas de fator estimulante de colônia de granulócitos (G-CSF) com intervalo de 8-10 horas por 4 dias. Nos primeiros três dias, uma dose única é de 2,5 mcg por 1 kg de peso, no último dia a dose é dobrada. As células-tronco são colhidas no dia 5. Os glóbulos vermelhos são retirados por centrifugação. O conteúdo de marcadores celulares é avaliado por citometria de fluxo. O resultado é avaliado após enriquecimento do citoconcentrado e remoção das células maduras e do plasma do mesmo. A preparação é armazenada em tubos de 4 ml com crioprotetor e solução de poliglucina a 10%. A proporção de células-tronco não é inferior a 0,5x106 CD34+ e a proporção de linfócitos não é inferior a 0,5x109 por uma administração.

A amostra de tumor cerebral é obtida por meio de biópsia estereotáxica/endoscópica/aberta de todos os pacientes incluídos no estudo. As células tumorais (TCs) e TSCs são isoladas imunoquimicamente da amostra de biópsia de MBBC. Uma parte da amostra do tumor é usada para testes histológicos, citológicos e imunoquímicos padrão, enquanto as células tumorais (TCs) e células-tronco tumorais (TSCs) (CD44+, CD24-/LowLin-) são isoladas da outra parte.

As células dendríticas são isoladas de células mononucleares do sangue periférico e cultivadas. A amostra do tumor fornece antígenos específicos do tumor para preparar a vacina dendrítica (DV).

A preparação de CTLs visa aumentar o efeito citotóxico no tumor devido ao grande número de CTLs circulantes. Linfócitos citotóxicos (CTLs) são isolados de cerca de 100 ml de sangue periférico após 3 administrações de DV, e deles células dendríticas (DCs) são cultivadas. Em seguida, o sangue periférico é coletado repetidamente e os linfócitos são isolados. Os CTLs são co-cultivados com DCs carregadas com antígenos tumorais (terapia de primeira linha) ou proteínas recombinantes análogas às principais proteínas oncoespecíficas (terapia de segunda linha) várias vezes para expandir seu número (108-109). Seu imunofenótipo é detectado e os CTLs são criopreservados. A primeira estimulação de CTLs com DCs dura 6-8 dias, a segunda dura 2-4 dias, nos próximos 2 dias os linfócitos são estimulados pela terceira e quarta vez. E então os linfócitos recebidos são estimulados por IL-2 durante 2 dias.

Seis meses após a conclusão da terapia de primeira linha, a eficiência é avaliada e a coorte que demonstrou eficiência continua a terapia, enquanto a coorte que não demonstrou eficiência continuará o estudo com a terapia de segunda linha.

O braço de terapia de segunda linha usa DV com proteínas recombinantes análogas às principais proteínas oncoespecíficas, CTLs autólogas e HSCs autólogas com proteoma modificado.

As HSCs autólogas são recebidas do participante do estudo conforme descrito anteriormente. A preparação celular de HSC para o braço comparador ativo é obtida do citoconcentrado de células mononucleares autólogas de sangue periférico após mobilização conforme especificado para o braço experimental. Os antígenos específicos do tumor para o grupo comparador ativo são fornecidos pelo tecido tumoral do paciente.

TCs e TSCs, bem como HSCs do paciente, passam por mapeamento de transcriptoma completo e perfil de expressão gênica (CTMGEP) e mapeamento de proteoma e perfil de proteína (PMPP). Chave (3 ou 4 proteínas com intensidade normalizada máxima) proteínas oncoespecíficas (OSP) são determinadas de acordo com o teste de proteoma de TCs, enquanto o perfil de proteoma de TSCs e o uso de bancos de dados de relações proteína-proteína permitem a detecção de vias de transdução de sinal intracelular (ISTP) não afetadas pela carcinogênese e passível de regulação. Além disso, são detectados alvos de membrana do receptor para afetar essas vias de sinalização (proteínas de membrana receptoras), bem como proteínas que são capazes de ativá-los (ligantes de proteínas). CTMGEP de TSCs confirma ISTP funcional diagnosticado. Modelagem matemática de CTMGEP e comparação com Affymetrix GeneChip Human genoma U133A Array data revela perturbagens capazes de induzir quimicamente HSCs e modificar seu perfil de proteoma para fornecer a secreção de ligantes de proteína necessários. A análise do banco de dados permite entender como as alterações na expressão gênica induzidas por um agente de baixo peso molecular ou micro RNA correspondem às alterações observadas no perfil examinado. Se a correspondência for significativa, supõe-se que o agente ou agentes similares podem iniciar o efeito. Se a anticorrelação for significativa, o agente deve iniciar um efeito oposto na modificação da expressão gênica. O transcriptoma de HSCs é modificado por co-cultura de células mononucleares com perturbagens. Sua eficiência biológica é avaliada in vitro em biorreator Homunculus. Em seguida, a preparação é armazenada conforme descrito anteriormente.

O DV individual é preparado a partir do leucoconcentrado do sangue periférico do paciente. Os linfócitos são isolados, cultivados com G-CSF e interleucina-2, condicionados por antígenos tumor-específicos, TNF-α e PGE2 por 48 horas e carregados com proteínas recombinantes idênticas aos principais antígenos tumor-específicos detectados em testes proteômicos de TCs. O mecanismo básico do efeito imune individual do DV é a elaboração de linfócitos tóxicos do tumor pelo organismo do paciente.

Os CTLs são obtidos conforme descrito anteriormente. A intervenção é descrita na seção apropriada.

A toxicidade será avaliada de acordo com os critérios CTC-NCI. A eficiência é avaliada de acordo com os seguintes critérios:

1. Efeito completo - desaparecimento total de todos os focos tumorais
2. Efeito parcial - redução do tamanho do tumor e/ou focos metastáticos em não menos que 50% e ausência de sinais de novas neoplasias
3. Estabilização - redução do tamanho dos focos tumorais em menos de 50% e ausência de sinais de novas neoplasias
4. Progresso - crescimento de focos tumorais durante a terapia. Em caso de efeito mosaico, quando parte dos focos progride e parte se estabiliza ou diminui, a terapêutica continua mas os casos são analisados ​​fora do contexto "Resposta à terapêutica"