メキシコの 10 の流行都市と非流行都市におけるデング熱の血清学的研究と免疫反応の特徴付け

デング熱は、熱帯および亜熱帯の国で疫学的に重要な病気です。 南北アメリカ地域は、世界で最も影響を受けている地域の 1 つであり、5 億人近くの人々が 4 つのデングウイルス血清型 (DENV-1、DENV-2、DENV-3、および DENV-4) のいずれかから病気にかかるリスクがあります。主にネッタイシマカという蚊に刺されることで感染します。 これは、非重篤なデング熱の疑い例、警戒すべき徴候を伴うデング熱の疑い例、および重度のデング熱の疑い例の運用上の定義に基づく疫学的監視の対象となる疾患です。 臨床診断は、RT-qPCR を介して進化の 5 日までの発熱期に行われ、回復期には、症状の発症日から 6 ～ 14 日後に、酵素免疫測定法 (ELISA) IgM またはIgG。 疫学的監視システムは、病気の説明と意思決定に不可欠なツールですが、病気の負担に関する過小評価された情報を提供する可能性があると考えられてきました。

DENV 感染の約 75% は軽度または無症候性であり、最も一般的な臨床症状は、発熱、頭痛、眼窩後部の痛み、筋肉痛、関節痛、吐き気です。 一次感染は、生涯にわたる血清型特異的免疫応答と、異なる DENV 血清型に対する交差応答を 6 か月から 1 年間生成する可能性があります (短命の異種免疫)。単一型応答の場合、中和活性は 1 つの血清型に対してのみです。 通常、異なる血清型によって引き起こされる 2 番目の感染は、深刻な症状を発症するリスクの増加と関連している可能性があります。感染を解決したものは、最初の感染で生成されたものと同様の抗体プロファイルを発達させますが（抗原原罪）、最初の感染とは異なり、結果として生じる異種交差体液性免疫応答はより長く続きます。その後の感染は、通常は無症候性ですが、実行された場合、この抗体プロファイルは、マルチタイプの応答として、または 2 つ以上の血清型に対するものとして強化されます。 デングウイルスに対する防御免疫はまだ研究されていますが、ウイルスの複数の血清型への曝露によって開発されたマルチタイププロファイルは、疾患に対する防御に関連するものであると考えられているため、ワクチン候補。

デング感染のもう 1 つの関連する側面は、高流行病状態を発症する場所は、より多くの血清型の循環によってのみ生成されるため、多型プロファイルがより頻繁に見られる場所であるということです。 一方、1 つの血清型が流行しているコミュニティ、または複数の血清型が流行しているコミュニティは、流行していないコミュニティを区別する単一型のプロファイルを持っています。

予防措置には、主に健康増進とベクター制御に関するものが含まれます。 1 つのワクチンが登録されており (CYD-TDV、黄熱キメラ 17D-DENV)、別の 5 つのワクチンが研究中です。 世界保健機関は、病気の有病率について公共政策に情報を提供し、意思決定を導くための重要な手段として、血清学的調査を実施するよう求めています。 CYD-TDV ワクチンと TAK-003 ワクチン (DENV-DENV キメラ) は、血清反応陰性の被験者と血清反応陽性の被験者の間で異なる挙動を示し、CYD-TDV ワクチンは流行地域および地域専用に登録されているため、これはより関連性があります。 さらに、9 歳未満の集団における予防接種歴と疾患の重症度との間に関連性が報告されています。 したがって、この年齢層における体液性免疫応答を知ることが重要です。 血清学的調査により、世界中の疾患の有病率とその異質性における臨床的、社会的、環境的要因の役割の文書化が容易になりました。 流行地域でのデング熱の有病率は約 80% であると報告されていますが、非流行地域では 30% 未満です。 年齢もメキシコでのデング熱の有病率に関連する要因として説明されており、5 ～ 9 歳のグループで 35.7%、10 ～ 14 歳のグループで 52.2% の有病率が報告されています。 15～19歳群で％、20～24歳群で74.1％、25～29歳群で80％、30歳群で90％以上。 インフラストラクチャーおよび社会的要因も、デング熱の流行の決定要因として文書化されています。

メキシコで実施されたデング熱流行研究は、流行集団における観察研究でした。流行地域および非流行地域における血清有病率の世界的な説明を提供する全国的なクラスター無作為化研究は1つしかなく、血清型特異的な中和体液性反応はAmaya-Larios et al、2014によって評価されていません。したがって、風土病地域および非風土病地域で発生する体液性免疫応答の種類に関する知識が不足しています。 モノタイプまたはマルチタイプのプロファイルを持つ都市の一般的な特性を知ることで、さまざまなレベルで重要な情報を提供できるようになります。 製薬会社にとって、国の都市の免疫状態を知ることは、ワクチン候補の有効性と安全性を確立するために臨床研究を実施できる最適な場所を確立することを可能にします。可能性のある公的予防接種政策を作成する責任を負う機関にとって、免疫応答プロファイルと病気の発生率が知られている地域の一般的な特徴を知ることで、発生率のみが知られている地域でこの情報を推定することができます。国際的な科学界にとって、提案されたプロジェクトの結果は、デング熱の風土病伝播の人口特性と、この病気の特徴である風土病-流行サイクルとの関係についての知識に貢献するでしょう。

研究課題: メキシコの低デング熱流行地域および高デング熱地域における DENV 血清型による体液性免疫応答の分布と特徴付けは何ですか? 仮説: デング熱の風土病が少ない地域では、デング熱に対する体液性反応は主に単型であるのに対し、デング熱の風土病が高い地域では主に多型です。

目的 一般

● 低デング熱および高デング熱のメキシコ都市に住む 5 歳から 35 歳の人々の体液性免疫応答の優勢なタイプを特徴付けます。

明確

• 研究集団における DENV に対する抗体 (IgG) の一般的な有病率を推定します。
• 研究集団における DENV-1、DENV-2、DENV-3、および DENV-4 に対する中和抗体価を決定します。
• 固有性に基づいて、都市における単型および多型の体液性反応の頻度を決定します。

方法論 研究デザイン: 前向きデータ収集による記述的断面観察研究。

対象集団: デング熱の流行地域および非流行地域の居住者集団。

調査集団：デング熱の流行が高い地域と低い地域に住む、5歳から35歳の被験者。

包含および除外基準：適格性として以下に記載

サンプルサイズの計算: OpenEpi プログラム バージョン 3 で、以前の研究で報告された有病率を考慮し、利用可能な情報がなかった地域のデング熱流行の程度について、一部の都市から入手可能な情報を推定して実行されました (16, 20 -21) サンプルサイズの計算式は次のとおりです。

n = [DEFF * Np (1-p)] / [(d2 / Z21-α / 2 * (N-1) + p * (1-p)] 合計で 2,421 人をサンプリングする必要があります。 参加者の選択は、調査場所ごとに 2 段階のサンプリング (2 段階のクラスターによる) によって行われます。 第 1 段階では、各地域でブロック (n = 50) がランダムに選択され、第 2 段階では、ブロックの北東の角にある最初の家から始めて、各ブロック内で家が選択されます。家が受け入れない場合、コミュニティ ワーカーは、選択基準を満たす世帯の少なくとも 1 人が参加に同意するまで、右側に進みます。

血清有病率を推定するための間接IgG ELISA：血清陽性は、98％の特異性と100％の感度を持つPanbio E-DEN 01 Gメーカーの指示に従って、間接IgG ELISAで評価されます。

血清型特異的な中和抗体価: 選択した都市が提示する体液性免疫のタイプを確立するために、中和抗体価の測定は、溶解プラークの数を 50% (PRNT50%) に減らすことによる中和試験を通じて行われます。 Vero 細胞と各血清型の次の参照株を使用: DENV-1 (ハワイ)、DENV-2 (ニューギニア)、DENV-3 (H-887)、および DENV-4 (H-24)。

体液性免疫のタイプは、単一の DENV 血清型に対する抗体のみが検出される場合の単型免疫応答と、複数の単一の DENV 血清型に対する抗体が検出される場合の多型免疫応答に分類されます。

情報の収集と管理: 情報は標準形式で収集されます。 調査票は、記入指示書に基づき、面接官（プロジェクト担当者）が記入します。 情報は印刷された調査で収集され、この目的のために設計された電子データベースで訓練を受けたデータ ロガーによって管理されます。

臨床検査の結果は、参加者ごとに割り当てられた Folio のみで管理され、検査スタッフが Excel® で作成したデータベースに結果が入力されます。 データベースには、フォリオ、結果の日付、および結果が含まれます。 調査の名目上の情報は、残りの情報とは別に保管され、Folio 番号のみによって個人を識別し、身元を保護します。

質的変数は絶対度数と相対度数で説明され、量的変数は各変数の分布を考慮した中心傾向と分散の尺度で説明されます。 DENV に対する IgG の有病率は、全調査対象集団、および各地域、年齢層別、および性別について、それぞれの 95% 信頼区間 (95% CI) で決定されます。 同様に、特定の血清型に対する中和抗体の有病率、およびこれらの同じサブグループにおける単型および多型応答の頻度が決定されます。

倫理的考慮事項: この研究はリスクを最小限に抑えた調査であり、自発的に参加することに同意した被験者のみが考慮されます。 法定年齢の被験者の場合、自発的な参加が認定されているインフォームドコンセントに署名するよう求められます。未成年者の場合、親または保護者のインフォームド コンセントの署名が要求されます。未成年者が 7 歳から 17 歳の場合、インフォームド コンセントの署名が要求されます。

データ セキュリティ プロセスは、調査の名目上の情報を残りの情報から分離することで構成されます。これは、人々の身元を保護するために、共通の識別キーで識別される 2 つのテーブルに格納されます。

バイオセーフティに関する考慮事項: 感染性の生物学的有害廃棄物の管理は、この文書で指定されています。 一般に、ウイルスや血液、またはそれらの派生物と接触する物質は、5% 次亜塩素酸ナトリウム溶液で 30 分間塩素処理され、その後赤い袋に廃棄されます。 針は、地域のガイドライン NOM-087 に準拠した鋭利物容器に保管されます。