Serologisk undersøgelse af dengue og karakterisering af immunrespons i ti endemiske og ikke-endemiske byer i Mexico

Dengue er en sygdom af epidemiologisk betydning i tropiske og subtropiske lande. Regionen i Amerika er en af ​​de mest ramte verden over, hvor næsten 500 millioner mennesker risikerer at få sygdommen fra en af ​​de fire dengue-virusserotyper (DENV-1, DENV-2, DENV-3 og DENV-4) overføres hovedsageligt ved bid af myggen Aedes aegypti. Det er en sygdom, der er underlagt epidemiologisk overvågning baseret på den operationelle definition af et sandsynligt tilfælde af ikke-alvorlig dengue, et sandsynligt tilfælde af dengue med advarselstegn og et sandsynligt tilfælde af svær dengue. Den kliniske diagnose stilles i febrilfasen op til fem dages evolution, gennem RT-qPCR og i rekonvalescensfasen, seks til fjorten dage efter datoen for symptomdebut, med en Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) IgM eller IgG. Selvom epidemiologiske overvågningssystemer er væsentlige værktøjer til sygdomsbeskrivelse og beslutningstagning, er det blevet vurderet, at de kunne give undervurderet information om sygdomsbyrden.

Omkring 75 % af DENV-infektioner er milde eller asymptomatiske, og de mest almindelige kliniske manifestationer er feber, hovedpine, retro-orbitale smerter, myalgi, artralgi og kvalme. Primær infektion kan producere et livslangt serotype-specifikt immunrespons og et krydsrespons mod de forskellige DENV-serotyper i en periode på mellem seks måneder og et år (kortvarig heterolog immunitet), men efter dette tidspunkt er den resulterende beskyttende profil kendt som en monotypisk reaktion, så er den neutraliserende aktivitet kun mod én serotype. Den anden infektion, normalt forårsaget af en anden serotype, kan være forbundet med en øget risiko for at udvikle alvorlige manifestationer; dem, der løser infektionen, udvikler en antistofprofil svarende til den, der blev genereret i den første infektion (antigen arvesynd), men i modsætning til den første infektion varer det resulterende heterologe krydsede humorale immunrespons længere; Senere infektioner, normalt asymptomatiske, hvis de udføres, intensiverer denne profil af antistoffer som en multitype respons eller mod to eller flere serotyper. Selvom beskyttende immunitet mod Dengue-virus stadig er ved at blive undersøgt, anses det for, at multitype-profilen, udviklet ved eksponering for flere serotyper af virussen, er den, der er relateret til beskyttelse mod sygdommen, og det er derfor ønskeligt at udvikle en vaccinekandidat.

Et andet relevant aspekt af dengue-overførsel er, at de lokaliteter, der udvikler en hyperendemisk tilstand, er dem, hvor multitypiske profiler bør findes hyppigere, da disse kun kan genereres ved cirkulation af mere af en serotype. På den anden side ville samfund med cirkulation af én serotype, eller hvor cirkulationen af ​​mere end én serotype er vidt adskilt i tid, have monotypiske profiler, der adskiller ikke-endemiske samfund.

Forebyggende foranstaltninger omfatter hovedsagelig dem, der vedrører sundhedsfremme og vektorkontrol. En vaccine er blevet registreret (CYD-TDV, gul feberkimær 17D-DENV), og yderligere fem er under undersøgelse. Verdenssundhedsorganisationen har opfordret til at udføre serologiske undersøgelser som nøgleinstrumenter til at informere offentlig politik om sygdommens udbredelse og vejlede beslutningstagningen. Dette er mere relevant, da CYD-TDV-vaccinen og TAK-003-vaccinen (DENV-DENV-kimær) viste en differentieret adfærd mellem seronegative og seropositive forsøgspersoner, og CYD-TDV-vaccinen er blevet registreret til eksklusiv brug for endemiske regioner og lokaliteter. Derudover er der rapporteret en sammenhæng mellem vaccinationshistorien og sværhedsgraden af ​​sygdommen i befolkningen under 9 år. Derfor er det vigtigt at kende det humorale immunrespons i denne aldersgruppe. Serologiske undersøgelser har lettet dokumentationen af ​​den rolle, som kliniske, sociale og miljømæssige faktorer spiller i forekomsten af ​​sygdommen og dens heterogenitet på verdensplan. Forekomsten af ​​dengue i endemiske områder er blevet rapporteret at være omkring 80 %, mens den i ikke-endemiske områder er mindre end 30 %. Alder er også blevet beskrevet som en faktor forbundet med forekomsten af ​​dengue i Mexico, det er blevet rapporteret en forekomst på 35,7% i gruppen på 5-9 år efterfulgt af 52,2% i gruppen på 10 til 14 år, 58,9 % i gruppen 15 til 19-årige, 74,1 % i gruppen 20 til 24-årige, 80 % i gruppen 25 til 29-årige og over 90 % i 30-årsgruppen. Infrastruktur og sociale faktorer er også blevet dokumenteret som determinanter for dengue-endemisitet.

Dengue seroprevalensundersøgelser udført i Mexico har været observationsundersøgelser i endemiske populationer; Der er kun én national klynge-randomiseret undersøgelse, der giver en global beskrivelse af seroprevalens i endemiske og ikke-endemiske regioner, og den serotypespecifikke neutraliserende humorale respons blev ikke evalueret af Amaya-Larios et al, 2014; derfor er der mangel på viden om den type humorale immunrespons, der forekommer i endemiske og ikke-endemiske lokaliteter. Viden om de generelle karakteristika for byer med monotypiske eller multitypiske profiler vil give os mulighed for at tilbyde afgørende information på forskellige niveauer. For medicinalvirksomheder vil kendskab til immunstatus i landets byer gøre det muligt at etablere de bedste steder, hvor kliniske undersøgelser kan udføres for at fastslå effektiviteten og sikkerheden af ​​vaccinekandidater; For de institutioner, der er ansvarlige for at udarbejde de mulige offentlige vaccinationspolitikker, vil kendskab til de generelle karakteristika for de lokaliteter, hvor immunresponsprofilen og forekomsten af ​​sygdommen er kendt, tillade ekstrapolering af denne information på lokaliteter, hvor kun forekomsten er kendt; For det internationale videnskabelige samfund vil resultaterne af det foreslåede projekt bidrage til viden om populationskarakteristikaene ved den endemiske overførsel af dengue og dens sammenhæng med de endemiske-epidemi-cyklusser, der er karakteristiske for denne sygdoms adfærd.

Forskningsspørgsmål: Hvad er fordelingen og karakteriseringen af ​​det humorale immunrespons af DENV serotype i områder med lav og høj dengue-endemisitet i Mexico? Hypotese: I områder med lav dengue-endemisitet er den humorale respons mod dengue overvejende monotypisk, hvorimod den i områder med høj endemicitet for dengue overvejende er multitypisk.

Mål GENERELT

● Karakteriser den fremherskende type humoral immunrespons hos mennesker i alderen 5 til 35 år, som bor i mexicanske byer med lav og høj dengue-endemiitet.

BESTEMT

• Estimer den generelle prævalens af antistoffer (IgG) mod DENV i undersøgelsespopulationen.
• Bestem den neutraliserende antistoftiter mod DENV-1, DENV-2, DENV-3 og DENV-4 i undersøgelsespopulationen.
• Bestem hyppigheden af ​​typen af ​​monotypisk og multitypisk humoral reaktion i byer baseret på deres endemiske karakter.

Metode Studiedesign: Deskriptiv tværsnitsobservationsundersøgelse med prospektiv dataindsamling.

Målpopulation: Residentbefolkning i endemiske og ikke-endemiske byområder for dengue.

Undersøgelsespopulation: Forsøgspersoner i alderen 5 til 35 år bosiddende i udvalgte lokaliteter med høj og lav endemicitet for dengue.

Inklusions- og eksklusionskriterier: beskrevet nedenfor som berettigelse

Prøvestørrelsesberegning: den blev udført i OpenEpi-programmet, version 3 under hensyntagen til prævalenserne rapporteret af tidligere undersøgelser og ekstrapolering af de tilgængelige oplysninger fra nogle byer om graden af ​​dengue-endemisitet for de lokaliteter, hvor der ikke var tilgængelig information ( 16, 20 -21) Formlen for beregningen af ​​prøvestørrelsen var:

n = [DEFF * Np (1-p)] / [(d2 / Z21-α / 2 * (N-1) + p * (1-p)] I alt skal 2.421 personer prøves. Udvælgelsen af ​​deltagere vil blive udført ved en to-trins prøveudtagning (ved klynger af to faser) for hvert af undersøgelsesstederne. I første etape vil blokke (n = 50) blive tilfældigt udvalgt i hver lokalitet, og senere, i anden etape, vil der blive valgt en bolig inden for hver blok, begyndende med det første hus i blokkens nordøstlige hjørne, hvis dette house ikke accepterer, vil kommunalarbejderen fortsætte til højre, indtil mindst én person fra en husstand, som opfylder udvælgelseskriterierne, accepterer at deltage.

Indirekte IgG ELISA for at estimere seroprevalens: Seropositiviteten vil blive evalueret med indirekte IgG ELISA efter instruktionerne fra Panbio E-DEN 01 G producenten, som har en specificitet på 98 % og en sensitivitet på 100 %.

Neutraliserende antistoftitre serotypespecifikke: For at fastslå den type humoral immunitet, som den valgte by præsenterer, vil målingen af ​​de neutraliserende antistoftitre blive udført gennem neutraliseringstesten ved at reducere antallet af lytiske plaques til 50 % (PRNT50 %), ved hjælp af Vero-celler og følgende referencestammer for hver serotype: DENV-1 (HAWAI), DENV-2 (NY GUINEA), DENV-3 (H-887) og DENV-4 (H-24).

Typen af ​​humoral immunitet vil blive klassificeret i monotypisk immunrespons, hvis der kun påvises antistoffer mod en enkelt DENV-serotype, og multitypisk immunrespons, hvis der påvises antistoffer mod mere end én enkelt DENV-serotype.

Informationsindsamling og -styring: Oplysningerne vil blive indsamlet i et standardformat. Undersøgelsen vil blive udfyldt af intervieweren (projektpersonalet) baseret på udfyldningsinstruktionerne. Oplysningerne vil blive fanget på trykte undersøgelser og administreret af uddannede dataloggere i den elektroniske database designet til dette formål.

Resultaterne af laboratorietestene vil kun blive administreret med folioen tildelt hver deltager, og resultaterne vil blive indtastet i en database lavet i Excel® af laboratoriepersonalet. Databasen vil indeholde folio, resultatdato og resultatet. Undersøgelsens nominelle oplysninger vil blive holdt adskilt fra resten af ​​oplysningerne, idet de kun identificerer enkeltpersoner ved deres folionummer og beskytter deres identitet.

De kvalitative variable vil blive beskrevet med absolutte og relative frekvenser, og de kvantitative variable vil blive beskrevet med mål for central tendens og spredning under hensyntagen til fordelingen af ​​hver variabel. Prævalensen af ​​IgG mod DENV vil blive bestemt med de respektive 95 % konfidensintervaller (95 % CI) for den samlede undersøgelsespopulation, såvel som for hver lokalitet, efter aldersgruppe og efter køn. Tilsvarende vil forekomsten af ​​neutraliserende antistoffer for specifikke serotyper og hyppigheden af ​​monotypiske og multipiske responser i disse samme undergrupper blive bestemt.

Etiske overvejelser: Denne undersøgelse er en undersøgelse med minimal risiko, hvor kun forsøgspersoner, der accepterer at deltage frivilligt, vil blive overvejet. For personer, der er myndige, vil de blive bedt om at underskrive det informerede samtykke, hvori deres frivillige deltagelse er akkrediteret; I tilfælde af mindreårige vil der blive anmodet om underskrift af det informerede samtykke fra forælderen eller værgen, og hvis den mindreårige er mellem 7 år og 17 år, vil der blive anmodet om underskrift af det informerede samtykke.

Datasikkerhedsprocessen vil bestå i at adskille undersøgelsens nominelle information fra resten af ​​informationen, denne vil blive gemt i to tabeller, der vil blive identificeret med en fælles identifikationsnøgle, for at beskytte personernes identitet.

Biosikkerhedsovervejelser: Håndteringen af ​​infektiøst biologisk farligt affald er specificeret i dette dokument. Generelt vil materialer, der er i kontakt med vira eller blod eller deres derivater, blive kloreret i 30 minutter med en 5% natriumhypochloritopløsning, og senere vil de blive kasseret i en rød pose. Nålene vil blive opbevaret i en beholder til skarpe genstande, der overholder lokale retningslinjer NOM-087.