Serologische Untersuchung von Dengue und Charakterisierung der Immunantwort in zehn endemischen und nicht endemischen Städten in Mexiko

Dengue ist eine Krankheit von epidemiologischer Bedeutung in tropischen und subtropischen Ländern. Die Region Amerika ist eine der am stärksten betroffenen weltweit, wo fast 500 Millionen Menschen dem Risiko ausgesetzt sind, die Krankheit von einem der vier Dengue-Virus-Serotypen (DENV-1, DENV-2, DENV-3 und DENV-4) zu bekommen. hauptsächlich durch den Stich der Mücke Aedes aegypty übertragen. Es handelt sich um eine Krankheit, die der epidemiologischen Überwachung unterliegt, basierend auf der operativen Definition eines wahrscheinlichen Falls von nicht schwerem Denguefieber, eines wahrscheinlichen Falls von Denguefieber mit Warnzeichen und eines wahrscheinlichen Falls von schwerem Denguefieber. Die klinische Diagnose erfolgt während der fieberhaften Phase bis zu fünf Tagen der Evolution durch RT-qPCR und in der Rekonvaleszenzphase sechs bis vierzehn Tage nach Symptombeginn mit einem Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) IgM oder IgG. Obwohl epidemiologische Überwachungssysteme wesentliche Instrumente für die Krankheitsbeschreibung und Entscheidungsfindung sind, wurde angenommen, dass sie unterschätzte Informationen über die Krankheitslast liefern könnten.

Etwa 75 % der DENV-Infektionen verlaufen mild oder asymptomatisch, und die häufigsten klinischen Manifestationen sind Fieber, Kopfschmerzen, retroorbitale Schmerzen, Myalgie, Arthralgie und Übelkeit. Eine Primärinfektion kann eine lebenslange serotypspezifische Immunantwort und eine Kreuzreaktion gegen die verschiedenen DENV-Serotypen für einen Zeitraum zwischen sechs Monaten und einem Jahr hervorrufen (kurzlebige heterologe Immunität), aber nach dieser Zeit wird das resultierende Schutzprofil als bezeichnet eine monotypische Antwort, dann ist die neutralisierende Aktivität nur gegen einen Serotyp. Die zweite Infektion, die normalerweise durch einen anderen Serotyp verursacht wird, kann mit einem erhöhten Risiko für die Entwicklung schwerwiegender Manifestationen verbunden sein; diejenigen, die die Infektion überwinden, entwickeln ein ähnliches Antikörperprofil wie bei der Erstinfektion (antigene Erbsünde), aber im Gegensatz zur Erstinfektion hält die resultierende heterologe gekreuzte humorale Immunantwort länger an; Spätere Infektionen, normalerweise asymptomatisch, verstärken dieses Antikörperprofil als Multityp-Antwort oder gegen zwei oder mehr Serotypen, falls sie durchgeführt werden. Obwohl die schützende Immunität gegen das Dengue-Virus noch untersucht wird, wird davon ausgegangen, dass das Multityp-Profil, das durch Exposition gegenüber mehreren Serotypen des Virus entwickelt wird, dasjenige ist, das mit dem Schutz gegen die Krankheit zusammenhängt, und es daher wünschenswert ist, sich durch ein zu entwickeln Impfstoffkandidat.

Ein weiterer relevanter Aspekt der Dengue-Übertragung ist, dass die Lokalitäten, die einen hyperendemischen Zustand entwickeln, diejenigen sind, an denen multitypische Profile häufiger gefunden werden sollten, da diese nur durch die Zirkulation von mehr eines Serotyps erzeugt werden können. Andererseits würden Gemeinschaften mit der Zirkulation eines Serotyps oder wo die Zirkulation von mehr als einem Serotyp zeitlich weit voneinander entfernt ist, monotypische Profile haben, die nicht-endemische Gemeinschaften unterscheiden.

Präventive Maßnahmen umfassen vor allem Maßnahmen zur Gesundheitsförderung und Vektorkontrolle. Ein Impfstoff wurde registriert (CYD-TDV, Gelbfieber-Chimäre 17D-DENV) und weitere fünf werden untersucht. Die Weltgesundheitsorganisation hat die Durchführung serologischer Untersuchungen als Schlüsselinstrumente gefordert, um die öffentliche Ordnung über die Prävalenz der Krankheit zu informieren und die Entscheidungsfindung zu leiten. Dies ist umso relevanter, da der CYD-TDV-Impfstoff und der TAK-003-Impfstoff (DENV-DENV-Chimäre) ein differenziertes Verhalten zwischen seronegativen und seropositiven Probanden zeigten und der CYD-TDV-Impfstoff zur ausschließlichen Verwendung für endemische Regionen und Orte registriert wurde. Darüber hinaus wurde bei der Bevölkerung unter 9 Jahren ein Zusammenhang zwischen der Impfvorgeschichte und der Schwere der Erkrankung berichtet. Daher ist es wichtig, die humorale Immunantwort in dieser Altersgruppe zu kennen. Serologische Untersuchungen haben die Dokumentation der Rolle klinischer, sozialer und umweltbedingter Faktoren bei der Prävalenz der Krankheit und ihrer weltweiten Heterogenität erleichtert. Die Prävalenz von Dengue wird in endemischen Gebieten mit etwa 80 % angegeben, während sie in nicht endemischen Gebieten weniger als 30 % beträgt. Das Alter wurde auch als ein Faktor im Zusammenhang mit der Prävalenz von Dengue in Mexiko beschrieben, es wurde eine Prävalenz von 35,7 % in der Gruppe der 5- bis 9-Jährigen berichtet, gefolgt von 52,2 % in der Gruppe der 10- bis 14-Jährigen, 58,9 % in der Gruppe der 15- bis 19-Jährigen, 74,1 % in der Gruppe der 20- bis 24-Jährigen, 80 % in der Gruppe der 25- bis 29-Jährigen und über 90 % in der Gruppe der 30-Jährigen. Infrastruktur und soziale Faktoren wurden ebenfalls als Determinanten der Dengue-Endemie dokumentiert.

In Mexiko durchgeführte Dengue-Seroprävalenzstudien waren Beobachtungsstudien in endemischen Populationen; Es gibt nur eine nationale Cluster-randomisierte Studie, die eine globale Beschreibung der Seroprävalenz in endemischen und nicht-endemischen Regionen liefert, und die serotypspezifische neutralisierende humorale Reaktion wurde von Amaya-Larios et al., 2014, nicht bewertet; Daher gibt es einen Mangel an Wissen über die Art der humoralen Immunantwort, die in endemischen und nicht endemischen Lokalitäten auftritt. Die Kenntnis der allgemeinen Merkmale von Städten mit monotypischen oder multitypischen Profilen wird es uns ermöglichen, entscheidende Informationen auf verschiedenen Ebenen anzubieten. Für Pharmaunternehmen wird die Kenntnis des Immunstatus der Städte des Landes es ermöglichen, die besten Orte zu ermitteln, an denen klinische Studien durchgeführt werden können, um die Wirksamkeit und Sicherheit von Impfstoffkandidaten zu ermitteln; Für die Institutionen, die mit der Ausarbeitung möglicher öffentlicher Impfrichtlinien beauftragt sind, ermöglicht die Kenntnis der allgemeinen Merkmale der Orte, an denen das Immunreaktionsprofil und die Inzidenz der Krankheit bekannt sind, diese Informationen auf Orte zu extrapolieren, an denen nur die Inzidenz bekannt ist; Für die internationale wissenschaftliche Gemeinschaft werden die Ergebnisse des vorgeschlagenen Projekts zur Kenntnis der Bevölkerungsmerkmale der endemischen Übertragung von Dengue und ihrer Beziehung zu den Endemie-Epidemie-Zyklen beitragen, die für das Verhalten dieser Krankheit charakteristisch sind.

Forschungsfrage: Wie ist die Verteilung und Charakterisierung der humoralen Immunantwort durch den DENV-Serotyp in Gebieten mit niedriger und hoher Dengue-Endemie in Mexiko? Hypothese: In Gebieten mit geringer Dengue-Endemie ist die humorale Reaktion gegen Dengue überwiegend monotypisch, während sie in Gebieten mit hoher Dengue-Endemie überwiegend multitypisch ist.

Ziele ALLGEMEINES

● Charakterisieren Sie die vorherrschende Art der humoralen Immunantwort bei Menschen im Alter von 5 bis 35 Jahren, die in mexikanischen Städten mit niedriger und hoher Dengue-Endemie leben.

SPEZIFISCH

• Schätzen Sie die allgemeine Prävalenz von Antikörpern (IgG) gegen DENV in der Studienpopulation ab.
• Bestimmen Sie den neutralisierenden Antikörpertiter gegen DENV-1, DENV-2, DENV-3 und DENV-4 in der Studienpopulation.
• Bestimmen Sie die Häufigkeit der Art der monotypischen und multitypischen humoralen Reaktion in Städten basierend auf ihrer Endemizität.

Methodik Studiendesign: Deskriptive Querschnittsbeobachtungsstudie mit prospektiver Datenerhebung.

Zielgruppe: Wohnbevölkerung von Dengue-Endemie- und Nicht-Endemie-Stadtgebieten.

Studienpopulation: Probanden im Alter von 5 bis 35 Jahren, die an ausgewählten Orten mit hoher und niedriger Dengue-Endemie leben.

Einschluss- und Ausschlusskriterien: unten als Förderfähigkeit beschrieben

Berechnung der Stichprobengröße: Sie wurde im OpenEpi-Programm, Version 3, unter Berücksichtigung der in früheren Studien berichteten Prävalenzen und Extrapolation der verfügbaren Informationen einiger Städte zum Grad der Dengue-Endemie für diejenigen Orte durchgeführt, an denen keine Informationen verfügbar waren ( 16, 20 -21) Die Formel für die Berechnung des Stichprobenumfangs lautete:

n = [DEFF * Np (1-p)] / [(d2 / Z21-α / 2 * (N-1) + p * (1-p)] Insgesamt müssen 2.421 Personen beprobt werden. Die Auswahl der Teilnehmenden erfolgt durch eine zweistufige Stichprobenziehung (durch Cluster von zwei Stufen) für jeden der Studienorte. In der ersten Stufe werden Blöcke (n = 50) zufällig in jedem Ort ausgewählt und später, in der zweiten Stufe, wird ein Haus innerhalb jedes Blocks ausgewählt, beginnend mit dem ersten Haus an der nordöstlichen Ecke des Blocks, falls vorhanden Haus nicht akzeptiert, wird der Sozialarbeiter nach rechts weitergehen, bis mindestens eine Person aus einem Haushalt, die die Auswahlkriterien erfüllt, der Teilnahme zustimmt.

Indirekter IgG-ELISA zur Abschätzung der Seroprävalenz: Die Seropositivität wird mit dem indirekten IgG-ELISA gemäß den Anweisungen des Herstellers Panbio E-DEN 01 G bestimmt, der eine Spezifität von 98 % und eine Sensitivität von 100 % aufweist.

Neutralisierende Antikörpertiter serotypspezifisch: Um die Art der humoralen Immunität festzustellen, die die ausgewählte Stadt aufweist, wird die Messung der neutralisierenden Antikörpertiter durch den Neutralisationstest durchgeführt, indem die Anzahl der lytischen Plaques auf 50 % (PRNT50 %) reduziert wird, unter Verwendung von Vero-Zellen und den folgenden Referenzstämmen für jeden Serotyp: DENV-1 (HAWAI), DENV-2 (NEUGUINEA), DENV-3 (H-887) und DENV-4 (H-24).

Die Art der humoralen Immunität wird in monotypische Immunantwort, wenn nur Antikörper gegen einen einzigen DENV-Serotyp nachgewiesen werden, und multitypische Immunantwort, wenn Antikörper gegen mehr als einen einzigen DENV-Serotyp nachgewiesen werden, eingeteilt.

Erfassung und Verwaltung von Informationen: Die Informationen werden in einem Standardformat erfasst. Der Fragebogen wird vom Interviewer (Projektmitarbeiter) anhand der Ausfüllanleitung ausgefüllt. Die Informationen werden auf gedruckten Umfragen erfasst und von geschulten Datenloggern in der dafür konzipierten elektronischen Datenbank verwaltet.

Die Ergebnisse der Labortests werden nur mit dem jedem Teilnehmer zugewiesenen Folio verwaltet und die Ergebnisse werden vom Laborpersonal in eine in Excel® erstellte Datenbank eingegeben. Die Datenbank enthält Folio, Ergebnisdatum und das Ergebnis. Die nominellen Informationen der Umfrage werden von den übrigen Informationen getrennt aufbewahrt, wobei Personen nur anhand ihrer Folionummer identifiziert und ihre Identität geschützt werden.

Die qualitativen Variablen werden mit absoluten und relativen Häufigkeiten beschrieben, und die quantitativen Variablen werden mit Maßen der zentralen Tendenz und Streuung unter Berücksichtigung der Verteilung jeder Variablen beschrieben. Die Prävalenz von IgG gegen DENV wird mit den jeweiligen 95-%-Konfidenzintervallen (95-%-KI) für die gesamte Studienpopulation sowie für jede Lokalität, nach Altersgruppe und nach Geschlecht bestimmt. In ähnlicher Weise werden die Prävalenz neutralisierender Antikörper für bestimmte Serotypen und die Häufigkeit monotypischer und multipischer Reaktionen in denselben Untergruppen bestimmt.

Ethische Erwägungen: Diese Studie ist eine Untersuchung mit minimalem Risiko, bei der nur Probanden berücksichtigt werden, die sich bereit erklären, freiwillig teilzunehmen. Volljährige Personen werden gebeten, die Einverständniserklärung zu unterzeichnen, in der ihre freiwillige Teilnahme akkreditiert wird; Bei Minderjährigen wird die Unterschrift der Einverständniserklärung der Eltern oder Erziehungsberechtigten verlangt, und wenn der Minderjährige zwischen 7 und 17 Jahre alt ist, wird die Unterzeichnung der Einverständniserklärung verlangt.

Der Datensicherheitsprozess besteht darin, die nominellen Informationen der Umfrage von den übrigen Informationen zu trennen, diese werden in zwei Tabellen gespeichert, die mit einem gemeinsamen Identifikationsschlüssel identifiziert werden, um die Identität der Personen zu schützen.

Erwägungen zur biologischen Sicherheit: Die Handhabung von infektiösem biologischen gefährlichen Abfall wird in diesem Dokument spezifiziert. Im Allgemeinen werden Materialien, die mit Viren oder Blut oder deren Derivaten in Kontakt kommen, 30 Minuten lang mit einer 5%igen Natriumhypochloritlösung chloriert und später in einem roten Beutel entsorgt. Die Nadeln werden in einem Behälter für scharfe Gegenstände aufbewahrt, der den lokalen Richtlinien NOM-087 entspricht.