Sérologická studie horečky dengue a charakterizace imunitní odpovědi v deseti endemických a neendemických městech v Mexiku

Dengue je epidemiologicky významná nemoc v tropických a subtropických zemích. Oblast Severní a Jižní Ameriky je jednou z nejvíce postižených na světě, kde je téměř 500 milionů lidí ohroženo nákazou jedním ze čtyř sérotypů viru dengue (DENV-1, DENV-2, DENV-3 a DENV-4). přenášené především kousnutím komára Aedes aegypty. Jde o onemocnění podléhající epidemiologickému dozoru na základě operativního vymezení pravděpodobného případu nezávažné horečky dengue, pravděpodobného případu horečky dengue s varovnými příznaky a pravděpodobného případu těžké horečky dengue. Klinická diagnóza se provádí během febrilní fáze až do pěti dnů evoluce, prostřednictvím RT-qPCR a ve fázi rekonvalescence, šest až čtrnáct dní po datu nástupu příznaků, pomocí ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) IgM nebo IgG. Přestože systémy epidemiologického dozoru jsou základními nástroji pro popis onemocnění a rozhodování, mělo se za to, že by mohly poskytnout podceněné informace o zátěži onemocnění.

Asi 75 % infekcí DENV je mírných nebo asymptomatických a nejčastějšími klinickými projevy jsou horečka, bolest hlavy, retroorbitální bolest, myalgie, artralgie a nauzea. Primární infekce může vyvolat celoživotní sérotypově specifickou imunitní odpověď a zkříženou odpověď proti různým sérotypům DENV po dobu od šesti měsíců do jednoho roku (krátkodobá heterologní imunita), ale po této době je výsledný ochranný profil znám jako monotypická odpověď, pak je neutralizační aktivita pouze proti jednomu sérotypu. Druhá infekce, obvykle způsobená jiným sérotypem, může být spojena se zvýšeným rizikem rozvoje závažných projevů; ty, které infekci vyřeší, vytvoří profil protilátek podobný profilu vytvořenému při první infekci (antigenní prvotní hřích), ale na rozdíl od první infekce výsledná heterologní zkřížená humorální imunitní odpověď trvá déle; Pozdější infekce, normálně asymptomatické, pokud jsou prováděny, zesilují tento profil protilátek jako multitypová odpověď nebo proti dvěma nebo více sérotypům. Ačkoli se ochranná imunita proti viru dengue stále studuje, má se za to, že multitypový profil, který se vytvoří expozicí více sérotypům viru, je ten, který souvisí s ochranou proti onemocnění, a proto je žádoucí vytvořit kandidát na vakcínu.

Dalším důležitým aspektem přenosu horečky dengue je to, že lokality, u kterých se rozvine hyperendemický stav, jsou ty, kde by se měly častěji nacházet multitypické profily, protože ty mohou být generovány pouze cirkulací většího množství sérotypu. Na druhé straně komunity s cirkulací jednoho sérotypu nebo kde je cirkulace více než jednoho sérotypu časově značně oddělena, by měla monotypické profily, které odlišují neendemické komunity.

Preventivní opatření zahrnují především opatření související s podporou zdraví a kontrolou vektorů. Jedna vakcína byla registrována (CYD-TDV, chiméra žluté zimnice 17D-DENV) a dalších pět je ve studiu. Světová zdravotnická organizace vyzvala k provádění sérologických průzkumů jako klíčových nástrojů k informování veřejné politiky o prevalenci onemocnění a vodítka při rozhodování. To je relevantnější, protože vakcína CYD-TDV a vakcína TAK-003 (chiméra DENV-DENV) vykazovaly diferencované chování mezi séronegativními a séropozitivními subjekty a vakcína CYD-TDV byla registrována pro výhradní použití pro endemické oblasti a lokality. Navíc byla hlášena souvislost mezi vakcinací a závažností onemocnění u populace mladší 9 let. Proto je důležité znát humorální imunitní odpověď v této věkové skupině. Sérologické průzkumy usnadnily dokumentaci role klinických, sociálních a environmentálních faktorů v prevalenci onemocnění a jeho heterogenitě v celosvětovém měřítku. Prevalence horečky dengue v endemických oblastech byla hlášena kolem 80 %, zatímco v neendemických oblastech je to méně než 30 %. Věk byl také popsán jako faktor spojený s prevalencí horečky dengue v Mexiku, byla hlášena prevalence 35,7 % ve skupině 5–9 let, následovaná 52,2 % ve skupině 10 až 14 let, 58,9 % ve skupině 15 až 19 let, 74,1 % ve skupině 20 až 24 let, 80 % ve skupině 25 až 29 let a přes 90 % ve skupině 30 let. Infrastruktura a sociální faktory byly rovněž zdokumentovány jako determinanty endemity dengue.

Studie séroprevalence horečky dengue provedené v Mexiku byly pozorovacími studiemi u endemických populací; Existuje pouze jedna národní klastrově randomizovaná studie, která poskytuje globální popis séroprevalence v endemických a neendemických oblastech, a sérotypově specifická neutralizační humorální odpověď nebyla hodnocena Amaya-Larios et al, 2014; proto chybí znalosti o typu humorální imunitní odpovědi, která se vyskytuje v endemických a neendemických lokalitách. Znalost obecných charakteristik měst s monotypickými či multitypickými profily nám umožní nabídnout zásadní informace na různých úrovních. Farmaceutickým společnostem znalost imunitního stavu měst v zemi umožní vytvořit nejlepší místa, kde lze provádět klinické studie ke stanovení účinnosti a bezpečnosti kandidátů na vakcínu; Institucím odpovědným za vypracování možných politik veřejného očkování umožní znalost obecných charakteristik lokalit, kde je znám profil imunitní odpovědi a výskyt onemocnění, extrapolovat tyto informace v lokalitách, kde je známa pouze incidence; Pro mezinárodní vědeckou komunitu přispějí výsledky navrhovaného projektu k poznání populačních charakteristik endemického přenosu horečky dengue a jeho vztahu k endemicko-epidemickým cyklům, které jsou charakteristické pro chování této choroby.

Výzkumná otázka: Jaká je distribuce a charakterizace humorální imunitní odpovědi sérotypem DENV v oblastech s nízkou a vysokou endemicitou dengue v Mexiku? Hypotéza: V oblastech s nízkou endemicitou horečky dengue je humorální odpověď proti horečce dengue převážně monotypická, zatímco v oblastech s vysokou endemicitou horečky dengue je převážně multitypická.

Cíle OBECNÉ

● Charakterizujte převládající typ humorální imunitní odpovědi u lidí ve věku 5 až 35 let, kteří žijí v mexických městech s nízkou a vysokou endemicitou horečky dengue.

CHARAKTERISTICKÝ

• Odhadněte obecnou prevalenci protilátek (IgG) proti DENV ve studované populaci.
• Určete titr neutralizačních protilátek proti DENV-1, DENV-2, DENV-3 a DENV-4 ve studované populaci.
• Určete frekvenci typu monotypické a multitypické humorální odpovědi ve městech na základě jejich endemity.

Metodologie Design studie: Popisná průřezová observační studie s prospektivním sběrem dat.

Cílová populace: Rezidentní populace endemických a neendemických městských oblastí pro horečku dengue.

Studijní populace: Subjekty ve věku 5 až 35 let s bydlištěm ve vybraných lokalitách s vysokou a nízkou endemicitou horečky dengue.

Kritéria pro zařazení a vyloučení: níže popsaná jako způsobilost

Výpočet velikosti vzorku: byl proveden v programu OpenEpi, verze 3 s ohledem na prevalence hlášené předchozími studiemi a extrapolací informací dostupných z některých měst o stupni endemicity horečky dengue pro ty lokality, ve kterých nebyly dostupné informace ( 16, 20 -21) Vzorec pro výpočet velikosti vzorku byl:

n = [DEFF * Np (1-p)] / [(d2 / Z21-α / 2 * (N-1) + p * (1-p)] Celkem bude potřeba odebrat vzorek 2 421 lidem. Výběr účastníků bude proveden dvoustupňovým vzorkováním (po shlucích dvou stupňů) pro každé ze studijních míst. V první fázi budou náhodně vybrány bloky (n = 50) v každé lokalitě a později, ve druhé fázi, bude vybrán domov v každém bloku, počínaje prvním domem na severovýchodním rohu bloku, pokud to dům nepřijme, komunitní pracovník bude pokračovat vpravo, dokud s účastí nevyjádří souhlas alespoň jedna osoba z domácnosti, která splňuje kritéria výběru.

Nepřímá IgG ELISA pro odhad séroprevalence: Séropozitivita bude hodnocena nepřímou IgG ELISA podle pokynů výrobce Panbio E-DEN 01 G, která má specificitu 98 % a senzitivitu 100 %.

Titry neutralizačních protilátek sérotypově specifické: Pro stanovení typu humorální imunity, kterou vybrané město představuje, bude provedeno měření titrů neutralizačních protilátek pomocí neutralizačního testu snížením počtu lytických plaků na 50 % (PRNT50 %), za použití buněk Vero a následujících referenčních kmenů pro každý sérotyp: DENV-1 (HAWAI), DENV-2 (NOVÁ GUINEA), DENV-3 (H-887) a DENV-4 (H-24).

Typ humorální imunity bude klasifikován na monotypickou imunitní odpověď, pokud jsou detekovány pouze protilátky proti jednomu sérotypu DENV, a na multitypickou imunitní odpověď, pokud jsou detekovány protilátky proti více než jednomu sérotypu DENV.

Sběr a správa informací: Informace budou shromažďovány ve standardním formátu. Dotazník vyplní tazatel (pracovníci projektu) na základě pokynů k vyplnění. Informace budou zachyceny na tištěných přehledech a spravovány vyškolenými dataloggery v elektronické databázi k tomu určené.

Výsledky laboratorních testů budou spravovány pouze s foliem přiděleným každému účastníkovi a výsledky budou vloženy do databáze vytvořené v Excelu pracovníky laboratoře. Databáze bude obsahovat folio, datum výsledku a výsledek. Jmenovité informace průzkumu budou uchovávány odděleně od ostatních informací, přičemž jednotlivci budou identifikováni pouze podle čísla folia a budou chráněna jejich identita.

Kvalitativní proměnné budou popsány s absolutní a relativní četností a kvantitativní proměnné budou popsány s mírami centrální tendence a rozptylu s ohledem na distribuci každé proměnné. Prevalence IgG proti DENV bude stanovena s příslušnými 95% intervaly spolehlivosti (95% CI) pro celou studovanou populaci, stejně jako pro každou lokalitu, věkovou skupinu a pohlaví. Podobně bude stanovena prevalence neutralizačních protilátek pro specifické sérotypy a frekvence monotypických a multipických odpovědí v těchto stejných podskupinách.

Etická hlediska: Tato studie je šetřením s minimálním rizikem, ve kterém budou brány v úvahu pouze subjekty, které souhlasí s dobrovolnou účastí. U zletilých osob budou požádány o podpis informovaného souhlasu, ve kterém je akreditována jejich dobrovolná účast; V případě nezletilých osob bude vyžadován podpis informovaného souhlasu rodiče nebo opatrovníka a pokud je nezletilá osoba ve věku od 7 do 17 let, bude vyžadován podpis informovaného souhlasu.

Proces zabezpečení dat bude sestávat z oddělení nominálních informací průzkumu od ostatních informací, které budou uloženy ve dvou tabulkách, které budou identifikovány společným identifikačním klíčem, aby byla chráněna identita lidí.

Úvahy o biologické bezpečnosti: Nakládání s infekčním biologickým nebezpečným odpadem je specifikováno v tomto dokumentu. Obecně platí, že materiály, které jsou v kontaktu s viry nebo krví nebo jejich deriváty, budou chlorovány po dobu 30 minut 5% roztokem chlornanu sodného a později budou vyhozeny do červeného sáčku. Jehly budou uloženy v nádobě na ostré předměty, která splňuje místní směrnice NOM-087.