(非) ターゲットメタボロミクスを使用したフェノール代謝物の in vivo 内因性および/または外因性生成の研究 (ENDOPHENOL)

研究はランダム化クロスオーバー試験で構成され、各群は5日間続きます。 大学、病院、公共の場所に設置されたアナウンスを利用して、パルマ (PR) での研究のために合計 30 人の健康なボランティアが募集されます。 各アームに被験者を割り当てるために、Random Number Generator Pro (Segobit Software) を使用して、ランダム化されたブロック設計を使用してリストが生成されます。 このリストは、被験者の登録に関与していない同僚によって、密封された不透明な封筒に入った番号順を使用して作成されるため、PI とボランティアにはわかりません。

研究への参加を自由に受け入れるボランティアには、書面によるインフォームドコンセントが求められます。 ボランティアへの情報は、同意書とは別に事前に提供されます。 これらの情報シートとインフォームドコンセントフォームはオビエド条約に従って作成されており、地域の倫理委員会のガイドを考慮しています。 書面によるインフォームドコンセントを得た後、ボランティアは適格性を判断し、個人データを収集するためにスクリーニング訪問を受けます。

ボランティアのプライバシーは、個人の英数字コードの帰属による擬似匿名化によって保証されます。 採用されたボランティアは、個人情報および取得されたデータの使用に対する承認書にも署名します。

募集後、被験者は最初の訪問に参加し、個人データが収集され、体組成と身体測定パラメータが測定されます。 その後、研究を続けるために必要な食品、サプリメント、材料が提供されます。 募集された被験者は、低（ポリ）フェノール食に従うことが要求され、これはすべてのボランティアに対して同じであり、介入研究の全期間にわたって維持される。 食事の内容、調理方法、食事時間等は主催者側でご提供させていただきます。 食事は、測定された基礎代謝率に 1.45 に設定された身体活動レベルを乗じて、必要なカロリーを概算するようにカスタマイズされます。また、低 (ポリ) フェノール食事には、1 日のエネルギー必要量に基づいて量的な変動があります。 1500kcal/日、1750kcal/日、2000kcal/日、2250kcal/日、2500kcal/日、2750kcal/日、3000kcal/日で、たんぱく質、脂質、炭水化物の栄養バランスが取れています。 さらに、参加者は研究期間中の身体運動を制限することが求められます。

被験者は、食事療法初日の前夜（食事療法初日の前夜21時から）から始まり、12時間ごと（60～48時間、48～36時間）、介入前の60時間に生成された尿を採取するように求められます。 、36〜24時間、24〜12時間、12〜0時間）、食事日記を記入して食事の遵守を確認します。 被験者は、採取した尿をパルマ大学食品医薬品局の人間栄養部門に持参するよう求められます。

ダイエット3日目の朝、被験者は絶食状態でパルマ大学に到着することが求められます。 介入を受ける前に、絶食時の尿と唾液のサンプルが収集されます。 次に、無作為化された群に従って、砂糖入りカフェインレスコーヒー (各 50 mL、砂糖 5 g を 3 回) または砂糖入り水 (水 150 mL、砂糖 5 g) が、以下から構成される標準化された朝食とともに提供されます。 （ポリ）フェノールを含まない、栄養バランスのとれた固形食事と水（自由摂取）。

朝食後、被験者は指定された時点（0〜3時間、3〜6時間、6〜9時間、9〜12時間、12〜24時間、24〜36時間、および36〜48時間）で次の48時間自主的に尿を採取するように求められます。同じパーソナライズされた食事。 最後に、被験者は介入後 6 ～ 48 時間以内に自主的に糞便サンプルを収集します。

最終日の朝、最後の採尿後、被験者は採取した尿と便のサンプル、および5日間の食事日誌をパルマ大学食品医薬品局の人間栄養部門に持参します。

最初のアームの後、被験者は2週間連続で習慣的なライフスタイルを再開し、その後、別の訪問に参加します。その際、最初の訪問中に実施されたすべての人体計測評価が繰り返され、個別化された食事のための食品と情報が入った別のキットが提供されます。与えられる。 この研究はクロスオーバーデザインであるため、従うプロトコールは上記のものと同じになります（ただし、唾液サンプリングは1回のみ実行されます）。 食事の3日目になると、研究の前の群でコーヒーを摂取した被験者は水を摂取し、その逆も同様です。

この研究では、主要結果として尿中のコーヒー由来（ポリ）フェノールとその代謝物の平均濃度と、この分野の同様のアプローチと研究に関する入手可能な文献を考慮してサンプルサイズを推定しました。 30 人のボランティアという数は、臨床試験で許容されるパラメーター (検出力を 0.8 に設定し、α を 0.05 に設定)、脱落の可能性 (脱落率 15%)、および統計分析用のサンプル検出力を維持するためのボランティアの除外を考慮して設定されました。 比較が実行される前に、各変数の正規性が評価されて、最も適切な統計検定が選択されます。 代謝物データが正規分布している場合、データは平均 ± 標準偏差として表され、反復測定 t 検定または事後比較を伴う ANOVA を使用して分析されます。 データが正規分布していない場合は、中央値および四分位範囲として報告され、事後ペア比較を伴うフリードマン検定が実行されます。 P 値 < 0.05 は統計的に有意であるとみなされます。

教師なし多変量解析と教師あり多変量解析は、フェノール代謝物の標的メタボロミクス解析のために私たちの研究グループが開発した手順に従って、または非標的メタボロミクスデータを使用する場合に、さまざまな尿代謝タイプを特定して特徴付けるために使用されます。 既存の変動性をより詳しく調査するために、さまざまなクラスタリング アプローチを使用します。 これは、クラスター (つまり、フェノールのメタボタイプ) の数、各クラスターを形成する参加者の数、および考えられるメタボタイプ間の類似性を確立するのに役立ちます。

LMWP のパターンとその推定上の決定要因 (年齢、性別、民族、ライフスタイル、人体計測、体組成、遺伝子型、腸内微生物叢) との関係は、相関検査と多変量解析を使用して調査されます。 P 値 < 0.05 は統計的に有意であるとみなされます。 統計は、PIの監督の下、微生物プロファイリングとジェノタイピングを担当する大学チームと協力して、人間栄養ユニットの専門スタッフによって実行されます。